双向电泳结合蛋白质印迹技术分析猪囊尾蚴乳酸脱氢酶

为了研究猪囊尾蚴乳酸脱氢酶(LDH)的表达,试验选择四川省雅江县呷拉乡猪带绦虫病患者,给其口服槟榔-南瓜子驱虫,收集、制备虫卵悬液(8万个/mL),再给3头20日龄三元杂交乳猪猪灌胃虫卵悬液,每头1 mL,40 d后收集、制备猪囊尾蚴蛋白,进行双向电泳(2- DE)分析,将凝胶蛋白斑点转移至聚偏氟乙烯膜(PVDF膜),...     

双向电泳结合蛋白质印迹技术分析猪囊尾蚴乳酸脱氢酶

为了研究猪囊尾蚴乳酸脱氢酶(LDH)的表达,试验选择四川省雅江县呷拉乡猪带绦虫病患者,给其口服槟榔-南瓜子驱虫,收集、制备虫卵悬液(8万个/mL),再给3头20日龄三元杂交乳猪猪灌胃虫卵悬液,每头1 mL,40 d后收集、制备猪囊尾蚴蛋白,进行双向电泳(2-DE)分析,将凝胶蛋白斑点转移至聚偏氟乙烯膜(PVDF膜),用自制的大鼠抗猪带绦虫LDH血清作为一抗、健康大鼠血清作为阴性对照进行蛋白质印迹(Western-blotting)分析。结果表明:双向电泳凝胶共检测到(207±9)个蛋白质斑点,相对分子质量(Mr)为14 400～94 000,等电点(pI)为3.0～10.0;试验组特异性抗原抗体阳性杂交斑点为1个,阴性对照未见阳性杂交斑点;将Western-blotting检测的抗原抗体阳性杂交斑点与原双向电泳凝胶斑点进行比对,找到对应蛋白斑点,经ImageMaster 2D Platinum 5.0软件分析后初步确定该蛋白斑点的pI/Mr为7.03/35 368,与猪带绦虫LDH的pI/Mr理论推导值接近,说明猪囊尾蚴表达LDH。     

托芬那酸对兔腹主动脉瘤的抑制作用及炎症相关指标的影响

为研究托芬那酸抑制兔腹主动脉瘤继续膨胀的机理,将腹主动脉瘤氯化钙浸润模型兔随机分为对照组(不用药),托芬那酸高剂量组(0.2 mL/kg)、中剂量组(0.1 mL/kg)、低剂量组(0.05 mL/kg),每组5只,连续用药2周,1次/d。分别测量浸润前/后和用药后腹主动脉直径,检测炎性细胞数、前列腺素E2和基质金属蛋白酶9的表达量。结果显示:用药2周后,瘤体直径极显著减小(P<0.01);白细胞总数和中性粒细胞数显著或极显著减少(P<0.05或P<0.01);前列腺素E2、基质金属蛋白酶9的表达量显著降低(P<0.05)。结果表明:托芬那酸抑制腹主动脉瘤继续膨胀可能是由于其降低炎性细胞数和基质金属蛋白酶9的表达量。     

猪囊虫病防治

猪囊尾蚴病又称猪囊虫病,它是由猪带绦虫的幼虫-猪囊尾蚴寄生于猪的肌肉中而引起的一种寄生虫病.由于猪囊尾蚴在肌肉中呈囊状,故称之为猪囊虫,病猪的肉又称米猪肉或豆猪肉.猪囊虫的成虫可寄生于人的小肠,故其为重点防制的人兽共患寄生虫病.     

大肠杆菌及脂多糖对奶牛乳腺上皮细胞基质金属蛋白酶表达的影响

为研究大肠杆菌(E.coli)及脂多糖(LPS)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响,以及MMPs与基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)、尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)系统在调控细胞外基质(ECM)代谢中的作用,分别以106 CF U/mL热灭活E.coli菌液、7.5μg/mL ...     

猪囊尾蚴循环抗原和排泄分泌抗原研究进展

猪囊尾蚴病是由带科(Taeniidae)带属(Taenia)的猪带绦虫(有钩绦虫)(Taenia solium)的幼虫-猪囊尾蚴(Cysticercus cellulosae)寄生于猪的肌肉和其他器官中而引起的一种人畜共患寄生虫病,俗称囊虫病。该病主     

嵌合型猪圆环病毒(PCV1-2)及PCV2 ORF2真核表达质粒对商品猪的免疫保护

应用本实验室构建的嵌合型猪圆环病毒(PCV1-2)及真核表达质粒pcDNA3.1/V5-His-ORF2作为免疫原免疫母源抗体ELISA效价在0.07～0.60不等的商品猪,9头猪随机分为4组,1组(3头)肌肉注射免疫103.5TCID50的PCV1-2/头,2组(2头)肌肉注射真核表达质粒200μg/头,3组(2头)肌肉注射空载体(pcDNA3.1)200 μg/头,4组(2头)不免疫作为攻毒对照组.于免疫后42 d,PCV1-2组及真核表达质粒组产生了PCV2抗体.免疫后42 d所有组攻毒PCV2和PRRSV,剂量分别为2×104.5TCID50/头和106TCID50/头.攻毒后21 d,攻毒对照组猪淋巴结比免疫组显著肿大,免疫组猪血清、淋巴结中PCV2病毒载量低于对照组,攻毒对照组猪淋巴结中PCV2抗原含量高于免疫组.这些结果表明,嵌合型PCV1-2及真核表达质粒肌肉注射免疫商品猪后,对PCV2感染能产生保护性免疫应答,有可能成为候选疫苗.     

不同饲喂方式对猪背最长肌钙蛋白酶抑制蛋白和钙蛋白酶基因表达及剪切力的影响

为研究不同饲喂方式对猪背最长肌钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin)和μ-钙蛋白酶(μ-calpain)mRNA丰度,以及对肌肉剪切力的影响,54头约60 kg的杜×长×大三元杂交去势公猪被随机分为3个组,每组3个重复,每个重复6头猪.第1组为对照组,自由采食;第2组为补偿生长组,前20 d限饲30%,后20 d自由采食;第3组为限饲组,全期限饲30%.所有猪饲养40 d后屠宰取样,用实时定量PCR测定猪背最长肌中calpastatin和μ-calpain mRNA相对丰度.结果表明,背最长肌calpastatin和μ-calpain mRNA相对丰度在自由采食组和补偿生长组间差异不显著(P>0.05);在补偿生长组和限饲组问差异显著(P<0.05);在自由采食组和限饲组间差异极显著(P<0.01).背最长肌剪切力与calpastatin表达量显著正相关,相关系数为0.505 9.背最长肌剪切力与μ-calpain相对丰度显著负相关,相关系数为-0.475 7.背最长肌中calpastatin mRNA相对丰度与μ-calpain mRNA相对丰度负相关,相关系数为-0.055 9.结果表明补偿生长和限饲均可以增强calpastatin和μ-calpain基因在转录水平的调控.     

浅谈猪囊虫的危害及病猪识别

猪囊虫病是由猪囊尾蚴(猪囊虫)寄生于猪的肌肉中,所引起的一种寄生虫病.患囊虫病的猪屠宰后,在患猪肌肉中,可见到白色半透明,如黄豆大小囊泡的猪肉囊尾蚴,囊泡内有小米粒大小的白点,农村俗称患囊虫病的肉为"米碎猪".     

金属蛋白酶制剂对育肥猪生产性能的影响

选择平均日龄约为130d,平均体重约为60kg的72头育肥猪(杜×长×约杂交),按完全随机分组法分成3个组(经检验组间差异不显著),每组设3个重复,每个重复8头。在试验组1添加0.05%的金属蛋白酶制剂,试验组2添加0.1%的金属蛋白酶制剂,进行为期40d的饲养试验。结果表明:金属蛋白酶制剂可提高育肥猪的日增重(P<0.05);提高粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、磷的表观消化率;但降低试验组粗灰分的表观消化率(P<0.05);提高试验组1的钙表观消化率(P<0.05)。金属蛋白酶制剂可提高试验组的眼肌面积、里脊重、胴体重、屠宰率。0.1%金属蛋白酶制剂可提高肉豆寇酸、花生酸、十七碳酸、棕榈油酸、油酸含量(P<0.05);降低棕榈酸、总饱和脂肪酸含量(P<0.05)。     

早期诊断与治疗猪囊虫病试验

为探索早期诊断与治疗猪囊虫病的有效方法，采用ＥＬＩＳＡ诊断大通地区的猪血样１３８２头份，并对其中的７７头进行了剖检验证，还用丙硫咪唑治疗已确诊患囊虫病的猪５８头。试验结果：用ＥＬＩＳＡ检出猪囊虫阳性率为８．０３％；ＥＬＩＳＡ血检与剖检结果的阳性符合率为９２．３％，阴性符合率为９５．３％，总体符合率为９４．８％；丙硫咪唑对猪囊虫的杀灭率为９８．７％，治愈率为９３．７％，经治疗后让机体自身修复７—９个月时，达到鲜销标准的猪为７２．８％—９０．９％。     

Immunization procedure-related immunoglobulin levels in the development of antibodies against Cysticercus cellulosae

Various immunization procedures were investigated in an effort to improve the number of hybridomas producing antibodies against Cysticercus cellulosae. Ten groups of 5 BALB/c mice were subjected to different immunization procedures and were bled repeatedly over a period of 68 days. The samples of sera thus obtained were tested by enzyme linked immunosorbent assay: total immunoglobulins, IgG and IgM levels were determined. In general, total anticyst antibody titres increased during the course of immunization but in 3 groups the final titre was lower than the maximal antibody titre. Overall, immune tolerance did not appear to be a problem and longer immunization programs seemed to end with slightly higher antibody levels. So far, 4 mice from the group that exhibited the highest immunoglobulin levels have been used for hybridoma production. Out of 124 hybridomas thus obtained, only 1 secreted antibodies against Cysticercus cellulosae.     

膜联蛋白B2基因的克隆及其真核表达载体的构建

根据GenBank已登录的猪囊尾蚴膜联蛋白B2基因序列,设计合成1对特异性引物,应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术从猪囊尾蚴中扩增出膜联蛋白B2基因,将其克隆至pcDNA3.1表达载体上,经酶切鉴定和基因测序表明,目的基因AnnexinB2已正确地整合至表达质粒中,成功构建了膜联蛋白B2基因的真核表达载体.     

抗猪囊虫循环抗原杂交瘤细胞系的建立和鉴定

建立了8株抗猪囊虫循环抗原(CA)的杂交病细胞系。其中6F12和2E7为抗囊虫特异McAb;McAb 1C6、1C7、1B5、4D9、2B9和8D8与囊虫、(?)球蚴、细颈囊尾蚴抗原均可发生反应。这些McAb的腹水ELISA效价为105～107,细胞培养上清液效价为102,并均可与病猪血清中的囊虫CA反应形成沉淀线。用1B5、6F12和8D8分别致敏血球,以反向间接血凝试验检测98份囊虫病猪血清,检出率分别为70.41%(69/98)、6.12%(6/98)和7.14%(7/98)。本研究制备的McAb可用于猪囊虫循环抗原检测。     

苯骈咪唑类药物对猪囊尾蚴体外作用的光镜和扫描电镜观察

应用光学和扫描电镜观察了４种咪唑类药物对体外猪囊尾蚴的抑制作用,结果表明丙硫苯咪唑、磺苯咪唑、硫苯咪唑和氟苯咪唑对猪囊尾蚴均有抑制作用,前两者作用早于后两者。     

猪囊尾蚴抗原基因Ag1V1的克隆及其序列分析

根据NCBI上已知序列设计引物,利用RT-PCR技术从猪囊尾蚴中成功克隆了低分子量抗原基因Ag1V1,同源性和种系发育分析结果显示,河南分离株Ag1V1基因的核苷酸序列和预测氨基酸序列与日本分离株同源性为100％和98.9％,说明Ag1V1蛋白基因具有一定的保守性;通过生物信息学软件对其蛋白二级结构、疏水性及抗原表位等方面的预测,认为其有望成为诊断或免疫用抗原.     

猪囊尾蚴B抗原的克隆及鉴定

本实验从猪囊尾蚴虫体中提取 Ｒ Ｎ Ａ， 根据已发表的 Ｂ 抗原（ Ａｇ Ｂ） 核苷酸序列设计一对引物， 用 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 扩增出 Ａｇ Ｂ 全基因， 以ｐ Ｕ Ｃ１１９ 为载体克隆， 转化到大肠杆菌 Ｊ Ｍ８３ 中， 经分析鉴定所扩增片段为 Ａｇ Ｂ 基因。     

猪囊尾蚴T24基因的克隆与表达

采用RT—PCR方法扩增猪囊尾蚴T24免疫原基因，将扩增产物与pGEM—Teasy载体连接，重组质粒经PCR、酶切鉴定后进行测序；构建T24基因的pGEX-4T-1原核表达载体，经IPTG诱导表达后，进行SDS-PAGE、Western—blotting；用所表达的蛋白免疫小鼠，经ELISA检测血清抗体，验证其免疫原性。结果显示，所克隆的T24基因片段长716bp，含有1个678bp的开放阅读框，其编码226个氨基酸，与已报道的猪囊虫T24基因核苷酸序列同源性为100％；表达的融合蛋白大小为40ku，并能被猪囊虫阳性血清识别；免疫小鼠在免疫1周后即可检测到血清抗体，第30d达到较高水平，表明该融合蛋白具有较好的免疫原性。     

异源性抗原抗猪囊尾蚴感染的研究

本文报道了泡状带绦虫活化六钩蚴的超声裂解抗原可以诱导猪体产生抗猪带绦虫攻击感染的交叉保护作用。猪囊尾蚴匀浆抗原也使猪体产生了较强的抗猪带绦虫攻击感染的保护作用。泡状带绦虫六钩蚴超裂抗原免疫组与猪囊尾蚴匀浆抗原免疫组的保护情况是相似的,这表明异源免疫也可使猪体产生较好的抗猪囊尾蚴感染的免疫。由于制备异源性抗原的泡状带绦虫能够从狗的体内获得,因此在体外培养猪带绦虫未获成功之前可以解决从人体获取猪带绦虫的困难。     

小鼠对猪囊虫抗原基因TS76的免疫应答

将猪囊虫抗原基因 TS76的真核表达型质粒 VTS76单独或与 p UC18联合肌肉免疫注射于 BAL B/ c小鼠 ,以MTT比色法检测小鼠脾淋巴细胞 Con A刺激的增殖反应及 IL - 2的诱生活性 ,EL ISA方法检测免疫小鼠 Ig G总量和特异性抗体水平 ,常规法检测外周血免疫细胞数量的动态变化。结果发现 ,VTS76免疫小鼠各项细胞和体液免疫应答反应指数均比空白对照组小鼠显著提高 ;联合免疫组小鼠的细胞免疫应答和体液免疫应答反应指数均比 VTS76小鼠提高。由此可见 ,以 VTS76免疫小鼠可诱导其特异性细胞和体液免疫反应 ,而 p UC18又明显提高了 VTS76免疫小鼠的免疫应答水平 ,具有显著的免疫增强作用