胭脂鱼精子低温保存及其在人工授精中的应用

[目的]研究胭脂鱼精子的低温保存方法,为胭脂鱼的人工繁殖和人工授精提供基础依据。[方法]试验配制了A、B、C、D4种精子保存液,以0．7％的NaCl溶液作为对照,以精子被激活后的活率为指标,对4种精子保存液保存成熟的胭脂鱼精子的效果进行评价。[结果]在低温（0～4℃）条件下,4种精子保存液之间及其与对照溶液之间的差异比较明显。其中保存效果最好的是B液,能在120h内使精子的活率保持为80％;D液次之,能在84h内使精子的活率保持为80％。胭脂鱼在淡水中快速运动时间为（24．0±3．5）s,寿命为（128．0±9．5）s。2007～2008年精子保存B液在胭脂鱼的人工授精中进行应用,受精率为53％～85％。[结论]用精子保存液低温保存胭脂鱼精子的方法是切实可行的。     

杜洛克猪精子体外4℃保存过程中活力参数及蛋白修饰变化

为探究体外4℃保存对猪精子活力参数及蛋白修饰的影响,使用猪精液保存稀释液体外4℃保存猪精子7d,利用计算机辅助精子活力分析仪(CASA)分析测定新鲜精液和保存7d后精液的精子活力指标;使用相应试剂盒检测精子中ATP水平及甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)活性;应用蛋白免疫印迹(WB)技术,比较新鲜精液在4℃保存7d后蛋白翻译后修饰水平的变化。结果表明,猪精液体外4℃保存7d后,精子活力参数呈现下降趋势。其中,运动力(MOT)、快速前进性运动速率(PRO)、平均路径速度(VAP)、平均直线运动速率(VSL)与新鲜精液相比分别降低59.99%、37.03%、12.34%、18.97%,且差异显著(P0.05);发现精子中ATP水平和GAPDH酶活性在4℃保存7d后显著降低(P0.05),即随着体外保存时间的延长,精子细胞内的能量供应不足,代谢水平降低;猪精液4℃保存7d后精子蛋白的磷酸化和酰化修饰明显减弱,这一结果与精子活力、代谢酶活性结果的变化趋势一致。研究结果证实,在体外4℃保存条件下,可能因精子细胞内能量代谢受阻而影响了精子活力及蛋白修饰水平。因此,本研究无论对于丰富精子的能量代谢基础理论,还是对于延长猪精液低温保存时间,提高人工授精效率,均具有重要的理论和实践意义。     

内毒素对17℃环境下猪精子质量的影响

为探究不同浓度内毒素对17℃保存条件下猪精子质量的影响。在Modena基础稀释液中分别添加浓度为10^-7,10^-6,10^-5,10^-4 g/mL的内毒素，检测猪精子在此环境下5 d内的精子活率、活力、直线速度、路径速度和凝集指数。结果表明：10^-7 g/mL组的精子在4～5 d时，直线速度显著降低，而10^-6～10^-4 g/mL各组中的精子，各项质量指标显著降低，但各组精子的凝集指数差异不显著。猪精子对内毒素具有一定抗性，高浓度的内毒素影响精子的保存期；且内毒素不是引起精子大面积凝集的原因。研究为生产实践中猪精液的保存提供了试验依据。     

温度对中华鲟精子、卵子短期保存的影响

研究了中华鲟精子和卵子在低温(8,12℃)、中温(16,20℃)和高温(24,28℃)条件下短期保存的效果。结果发现:精子保存时间随着保存温度的升高逐渐缩短,8℃下可保存146 h以上,而28℃下只能保存32 h。低温下保存精子的活力强于高温下保存的精子,表现为快速运动时间和总活动时间较长;卵子适合在中温(16,20℃)下保存,高温或者低温对卵子的保存都不利,28℃下只能保存4~8 h,8℃下只能保存4~10 h,而在16℃和20℃下可保存18~20 h。     

两种无冷冻保护剂冷冻精子方法的比较

小鼠卵胞浆内单精子注射(ICSI)的开展使解冻后的精子无需具有活动能力就可以使卵子受精和发育,因此多种简单的精子冻存方法被开发。从复苏后精子受精和支持胚胎发育的能力,以及DNA甲基化方面研究比较无冷冻保护剂的条件下-20℃和-196℃冻存的两种方法。结果表明,两种方法都不改变胚胎DNA甲基化状态,-196℃保存的精子的受精率和胚胎发育率降低,但是通过卵子激活可以修复受精和胚胎发育的能力。-20℃保存精子1个月不影响受精和胚胎发育能力,冻存6个月降低精子的受精和胚胎发育潜能。因此,-20℃短期保存精子是一种简单、有效且安全的方法。     

猪精液保存及精子代谢与表观遗传调控研究进展

猪精液保存在科学理论研究和经济生产实际中都具有重要的意义。文章就国内外有关猪精液保存、精子代谢、精子冷冻过程中的表观遗传调控等研究进展进行了综述,并对猪精液保存的前沿发展与研究方向进行了展望,以期为进一步提高猪精液保存的品质,发挥良种优势提供理论依据。     

牛磺酸对猪精子负压17℃液态保存效果的影响

为研究猪精子在17℃负压液态保存时牛磺酸对精子质量的影响,通过在Modena基础稀释液中添加不同剂量的牛磺酸,17℃负压环境下进行猪精液的保存,并利用迈朗全自动精子质量检测仪等仪器检测猪精子质量、精液pH值及精液中H2O2浓度,研究不同浓度牛磺酸对猪精液质量的影响。实验共分5个处理组,即基础稀释液中添加0、2.5、5、7.5、10 mmol·L-1牛磺酸,实验重复4次。结果表明,7.5 mmol·L-1的牛磺酸在精子活力,路径速度上都明显优于其他组(P0.05);添加牛磺酸后精液的pH值下降缓慢,且精液中H2O2浓度较对照组有不同程度的下降。由以上实验结果可知,从综合指标上看7.5 mmol·L-1的牛磺酸对在17℃负压环境下进行猪精液的保存是有利的,为猪人工授精生产实践中猪精子的保存提供了实验依据。     

我国哺乳动物精子超微结构的研究进展(综述)

<正> 目前,我国人工授精技术已近普及,以至于在生物工程领域中也占有相当的地位。然而,发现和利用这一技术,却是在18世纪后期,由意大利的生物学家 Spallanzani 教授,首先利用哺乳动物进行人工授精试验成功的。据传说,早在14世纪阿拉伯人做过马的人工授精,但迄今为止还没有充分地证据来证明,当时对精子在动物繁殖上的意义和受精,获能的机制了解甚微。以后随着精子生理学研究的迅速进展,研究出了在体外利用配制的液体保存精子等方法。人类从发现利用人工授精技术至实现精子的体外保存,用了将近一个多世纪的漫长时间。     

不同稀释液对猪精液常温保存效果的研究

选取杜洛克公猪精液作为试验材料,比较5种稀释液对猪精液的保存效果,结果表明:用葡萄糖—柠檬酸稀释液,所保存精液的pH值、精子活率、精子畸形率等品质指标表现良好,且稀释液的成本低廉,自配简单易行,适于农村养猪户推行;基层常用的葡萄糖稀释液保存3 d时的精子活率性状表现不佳,仅适合于现配现用。BL─液(美国)稀释液的保存效果也比较好,但该稀释液组分复杂,配制较难,成本也较高,可在规模养猪场中推广。     

缺帘鱼精子超低温保存的初步研究

筛选比较了不同保存液、保护剂、降温方式、解冻方式对缺帘鱼精液超低温保存活力的影响,初步解释了缺帘鱼精子经超低温短期保存后活力明显较鲜精低的原因.结果显示:Ringer's液作为保存液,16%二甲亚砜作为保护剂,选取五步法超低温冷冻保存精子[精子缓慢降温至-150℃→液氮面上3 cm(约-170℃),停留4 min→液氮面(约-190℃),停留1 min→液氮];40℃水浴解冻取得最好的冻后活力,解冻后精子活力为(35.2±4.5)%.