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1.
黄瓜绿斑驳花叶病毒单克隆抗体的研制 总被引:2,自引:0,他引:2
将纯化的黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus, CGMMV)制剂免疫BALB/c小鼠,最后一次免疫后第3天取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经采用选择性培养基、有限稀释法克隆和间接ELISA方法进行筛选,成功获得了3株分泌CGMMV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株并分别命名为3C9,3F7,2G10。用ELISA方法对所获得的3个杂交瘤细胞株进行亚型鉴定均为IgG2a,kappa链。 间接ELISA效价测定结果分别为3C9:1.024×107,3F7:2.56×106,2G10:1.28×106。此3株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体均能与本研究室保存的其他3种不同的CGMMV分离物发生特异性反应,而不与其他3种同属成员病毒 烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)、辣椒轻斑驳病毒(Pepper mild mottle virus, PMMoV)、齿瓣兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV) 发生反应。 相似文献
2.
将纯化的李痘病毒(Plum pox virus,PPV)制剂免疫BALB/c小鼠,用SP2/0骨髓瘤细胞与经李痘病毒免疫的BALB/c小鼠的脾细胞融合,有限稀释法克隆和间接ELISA法筛选出2株稳定分泌李痘病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株3F1,7A8。用间接ELISA方法对所获得的2个杂交瘤细胞株进行亚型鉴定分别为IgG1、IgG3。间接ELISA方法测定腹水效价分别为3F1:1.0×106,7A8:1.0×105。以多克隆抗体为包被抗体、单克隆抗体为检测抗体的TAS-ELISA试剂盒与李痘病毒的D株系、M株系的病毒分离物均有反应,与同属的马铃薯A病毒、莴苣花叶病毒、西瓜花叶病毒2号、马铃薯Y病毒坏死株系不发生交叉反应。 相似文献
3.
将纯化的南芥菜花叶病毒(Arabis mosaic virus,ArMV)制剂免疫Balb/c小鼠,末次免疫后第3天取其脾细胞与SP2/0细胞融合,采用选择性培养基、有限稀释法克隆和间接ELISA方法进行筛选,成功获得了2株稳定分泌ArMV单克隆抗体的杂交瘤细胞株并分别命名为3F7,4G10。用间接ELISA方法对所获得的2个杂交瘤细胞株进行亚型鉴定分别为IgA(3F7)、IgG1(4G10)。间接ELISA效价测定结果:3F7为1:106,4G10为1:108。以单克隆抗体为包被抗体、多克隆抗体为检测抗体的TAS-ELISA检测试剂盒能检测感染ArMV的昆诺藜病汁液的灵敏度为1:1600。 相似文献
4.
烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus,TRSV)和番茄环斑病毒(Tomato ringspot virus,ToRSV)是我国禁止入境的检疫性有害生物。采用半巢式RT-PCR方法对这两种病毒进行了检测,用Trizol快速提取病毒总RNA,并根据TRSV和ToRSV的外壳蛋白基因设计特异性引物,经过第一轮RT- PCR和第二轮半巢式PCR扩增,TRSV样本分别得到359 bp和206 bp特异性片段,ToRSV样本分别得到340 bp和219 bp特异性片段。半巢式RT-PCR扩增产物的测序表明,TRSV产物序列与GenBank中登录的外壳蛋白基因存在88%~97%的同源性,ToRSV产物序列与GenBank中登录的外壳蛋白基因存在96%~100%的同源性。研究显示,DAS-ELISA与RT-PCR的检测灵敏度相近,而半巢式RT-PCR的检测灵敏度比这两种方法高出10~3倍以上。 相似文献
5.
为制备并鉴定番茄溃疡病菌(Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis,Cmm)的单克隆抗体(McAbs),用全菌皮下免疫BALB/C小鼠,采用B细胞杂交瘤技术,经免疫、融合、间接ELISA筛选和克隆等,获得稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株,得到了抗番茄溃疡病菌的单克隆抗体。经免疫后获得3株单抗分别为1A4、1C3和1B7,经亚类鉴定分别是IgM、IgG1、IgG1;纯化腹水间接ELISA效价分别为1:3.2×106、1:8.1×105、1:3.2×106;与其他同属不同亚种无交叉反应。结果表明:3株单克隆抗体均具有较高特异性和敏感性,可作为番茄溃疡病菌的检测抗体,其中,1A4的效果最好。番茄溃疡病菌单克隆抗体的获得为进一步研发番茄溃疡病检测试剂盒奠定了基础。 相似文献
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番茄环斑病毒单克隆抗体细胞株的建立及检测方法的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
用纯化的番茄环斑病毒(TmRSV)免痊Balb/c小白鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合。筛选出6株分泌TmRSV单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株。抗体免疫球旦白分属于1gG2a,IgG3和1gM。用免疫电镜诱捕法检测,6个McAb与加拿大分离物反应均为阳性,其中CE3,CG8,9G9不与西德分离物反应。属于1gG3的单抗具有与A旦白结合的特性。 相似文献
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9.
以原核表达的甘薯潜隐病毒(SPLV)的外壳蛋白(CP)为抗原免疫小鼠,经过细胞融合和亚克隆,筛选出2株稳定分泌抗SPLV CP的单克隆抗体杂交瘤细胞株(5B11-2和5G8-2),并分别制备了单克隆抗体腹水。间接ELISA结果表明,用SPLV CP包被酶联板,5B11-2和5G8-2单克隆抗体的效价均为1∶512 000;用感染SPLV的甘薯叶片汁液包被酶联板,2株单克隆抗体的效价均为1∶6 400。抗体类型及亚类鉴定结果表明,2株单克隆抗体均为IgG1、κ轻链。Western blot分析表明,2株单抗均能与SPLV CP和感染SPLV的甘薯叶片汁液有特异性反应。利用单克隆抗体建立的间接抗原包被ELISA(ACP-ELISA)检测SPLV方法,病叶1∶3 840倍稀释仍能检测到病毒。血清学和RT-PCR检测结果表明,制备的单克隆抗体可用于田间甘薯样品的检测。 相似文献