一株拮抗茶炭疽病菌的木霉菌的分离、筛选及鉴定

为获得对茶炭疽病有生物防治效果的拮抗木霉菌,本文采用梯度稀释法从茶树根际土壤中分离获得23株木霉菌,并通过平板对峙法和抑菌圈法从中筛选出1株强拮抗茶炭疽病菌的木霉菌株LS17110205。该菌株对茶炭疽病菌抑菌率达76.96%,并能在茶炭疽病菌菌落上产生大量白色菌丝及绿色分生孢子,使茶炭疽病菌菌落萎缩,颜色变暗;其发酵液也能有效抑制茶炭疽病菌菌丝生长,抑制率达70.08%。扫描电镜观察发现,菌株LS17110205发酵液能使茶炭疽菌菌丝表面皱缩。基于形态学特征结合分子系统发育树分析,将菌株LS17110205鉴定为Trichoderma asperelloides。该研究结果为茶炭疽病的生物防治提供一定的理论基础。     

海洋细菌AiL3防治芒果炭疽病研究

为探讨拮抗芒果炭疽菌的海洋细菌AiL3的防病作用,采用室内和田间小区试验,对该菌株防治芒果炭疽病的效果进行了测定。室内防病试验结果表明,AiL3菌株各处理液对采后芒果炭疽病均有较好的防病效果,以含1‰Tween80的10倍发酵稀释液处理效果最好,6 d后的防治效果为53.7%,明显高于同期施保克处理27.0%;田间小区试验结果表明,菌株能够通过抑制病菌扩展速度减轻病害的发生,其中含1‰Tween80的10倍上清稀释液处理组的效果最好,3次施药后10 d和20 d后对田间芒果叶和果的防病效果分别为47.5%、41.2%和49.7%、42.9%。     

20种植物提取物对芒果炭疽菌的抑制作用

研究了16科20种（其中12种为中草药）植物的丙酮提取物对芒果炭疽病菌株的抑制作用,初步分析了利用植物源农药解决芒果炭疽病抗药性问题的可能性.结果表明,同一药物在不同浓度下作用效果可能存在较大的差异.芒果炭疽病抗药性菌株对供试植物丙酮提取物没有明显的抗药性,100mg/mL（每mL含100mg干物质的提取物）浓度下石菖蒲、艾草、阳春砂、益智、飞机草等植物在芒果炭疽菌抗药性菌株室内试验中其作用效果明显优于1000 mg/L多菌灵,其中石菖蒲丙酮提取物对芒果炭疽病菌敏感菌株（ZJS）、抗药性菌株（ZJR）有效中浓度EC50分别为5.91,4.06 mg/mL,艾草丙酮提取物对芒果炭疽病菌敏感菌株（ZJS）、抗药性菌株（ZJR）有效中浓度EC50分别为9.24,14.53 mg/mL.     

茶树炭疽病菌拮抗链霉菌的筛选及其抑菌特性研究

茶炭疽病菌刺盘孢菌（Colletotrichum camelliae）是引起茶树炭疽病的重要致病菌,为获得对C.camelliae具有拮抗作用的链霉菌,采用稀释涂布法和平板对峙法从茶园生境中分离筛选出对其具有明显拮抗作用的链霉菌菌株,并结合形态学观察、生理生化特征和16 SrRNA基因序列分析对其进行种属鉴定;开展基于链霉菌菌株的抗菌谱测定、茶炭疽病菌菌丝生长抑制试验和孢子萌发抑制试验;通过菌丝生长速率法测定其无菌发酵滤液对茶炭疽病菌的抑菌活性及其抑菌活性稳定性,并测定其产胞外降解酶能力、抗菌物质合成基因、挥发性与非挥发性代谢物抑菌活性。结果表明,筛选获得一株对茶炭疽病菌C.camelliae具有良好抑菌效果的菌株XS-4,对茶炭疽病菌的平板抑制效果为76.42%;结合形态学观察、生理生化特征,以及16 SrRNA基因序列分析,将菌株XS-4鉴定为多产色链霉菌（Streptomyces polychromogenes）;菌株XS-4对其他8种植物病原菌均具有较好的抑菌效果,抗菌性能具有广谱性。扫描电镜结果表明,菌株XS-4能抑制茶炭疽病菌菌丝生长。孢子萌发抑制试验发现,拮抗菌XS-4发...     

辣椒采后灰霉病拮抗细菌的分离及生防效果

为了降低辣椒采后由灰霉病引起的腐烂损失,从辣椒植株内分离筛选拮抗菌,结果获得6株对辣椒灰霉病菌有较强抑制作用的内生细菌,其中PL58菌株的抑菌活性最强,在平板上培养3d后抑菌圈直径大于39 mm,培养7 d后对辣椒灰霉病菌的抑制率达55.1%,该菌株初步鉴定为芽孢杆菌,其拮抗作用有一定的广谱性。该菌株的发酵液(1.0×109 cfu/mL)对辣椒灰霉病菌菌丝生长和孢子萌发均有较强的抑制作用,但其无菌滤液没有抑制作用。该菌株在辣椒果实上对灰霉病的拮抗效果最高达78%,辣椒果实在25℃下贮藏25 d后该菌株的生防效果仍有37.2%。因此,PL58菌株可以作为一种生防菌应用于辣椒采后灰霉病的防治。     

茶炭疽病拮抗放线菌的分离筛选与鉴定

为获得对茶炭疽病有生防效果的拮抗放线菌,采用平板对峙法,从湖南茶园土壤分离筛选到1株对茶炭疽病菌具有显著拮抗效果的放线菌株F2,其中菌株对指示菌拮抗效果显著。经形态观察,培养性状,16S r DNA PCR扩增,初步鉴定F2菌株为链霉菌属。该研究结果为茶炭疽病的生物防治提供科学依据。     

阿米西达对芒果炭疽病的防治

进行了室内药剂对芒果炭疽病菌的毒力测定及2 a大田喷药防治芒果炭疽病的试验。结果表明,阿米西达具有很好的抑制产孢和孢子萌发的能力,在芒果刚抽嫩稍或花穗抽出3 cm时,每隔7-10 d喷150-200μg·mL-1阿米西达SC可有效地控制芒果叶片炭疽病的为害程度,防效达44.84％-87.06％;同时还可减少炭疽病的潜伏侵染菌量,并减轻果实贮藏期间的病情。      

热处理后芒果、香蕉果皮PAL活性变化与炭疽病发生的关系

热处理后芒果、香蕉果实果皮苯丙氨酸解氨酶（ＰＡＬ）活性在贮藏期间的变化与炭疽病发生关系的研究结果表明,果实采后经热处理或接种炭疽病菌均可诱导芒果、香蕉果实果皮ＰＡＬ活性提高,处理后 ２ ｄ,果皮ＰＡＬ活性达到最大值。其后随着热效应的减弱,果实的后熟,酶活性逐渐下降,直至果实完熟时达最低值,然后随着炭疽病的出现,ＰＡＬ活性又有所上升。经热处理的果实,贮藏期间炭疽病发生速度较慢,发病率低,果皮ＰＡＬ活性处于最低值。      

琯溪蜜柚炭疽病拮抗放线菌的筛选和鉴定

为筛选出对琯溪蜜柚炭疽病有防治效果的生防菌,以琯溪蜜柚炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）为靶标菌,采用平板对峙法进行初筛,用生长速率法和人工接种法对抑菌效果较好的菌株FX28进行抑菌谱及防治效果测定;通过形态学、生理生化特征,结合16S rDNA序列分析等方法研究其分类地位。结果表明：从25份土样中共分离到放线菌105株,对琯溪蜜柚炭疽病菌有较好拮抗作用的放线菌有16株,其中菌株FX28抑菌活性最高,其抑菌带宽度为15.3 mm,抑制率达86.4%,抑菌谱广,对琯溪蜜柚炭疽病菌、琯溪蜜柚黑点病菌、琯溪蜜柚黑斑病菌等14种供试植物病原菌均有抑制作用;其作用机制表现为菌丝分枝增多、变粗、顶端膨大等,对琯溪蜜柚炭疽病的预防效果和治疗效果分别为83.8%和71.1%。根据形态、生理生化特性及16S rDNA序列分析,初步确定菌株FX28为深红紫链霉菌（Streptomyces violaceorubidus）。     

抗多菌灵的芒果炭疽病菌的杀菌剂筛选及其交互抗性测定

为筛选抗多菌灵的芒果炭疽病菌的杀菌剂,采用生长速率法测定23种杀菌剂对8株抗、感多菌灵的芒果炭疽病菌(Colletotrichum gtoeosporioides Penz.)的室内毒力.通过EC50值、EC90值及杀菌剂间的交互抗性测定等综合分析表明:对芒果炭疽病菌毒力最强的杀菌剂是咪鲜胺,其平均EC50值和EC90值分别为0.04、0.21μg/mL;苯醚甲环唑、丙环唑、吡唑醚菌酯、氟硅唑、氟硅唑·恶唑菌酮、戊唑醇、腈菌唑和多抗霉素对芒果炭疽病菌的毒力也较强,与多菌灵不存在交互抗性,这9种杀菌剂均可作为防治芒果炭疽病的首选杀菌剂.另外,三唑酮、异菌脲、三环唑和代森锰锌也有较好的抑菌效果,可用于芒果炭疽病的防治.通过交互抗性分析,在苯并咪唑类杀菌剂之间,苯并眯唑类杀菌剂与烯唑醇,嘧菌酯、醚菌酯与腈菌唑·醚菌酯,嘧菌酯、醚菌酯与三唑酮,苯醚甲环唑与氟硅唑·恶唑菌酮之间存在交互抗性;而百菌清与嘧菌酯、醚菌酯和腈菌唑·醚菌酯,恶霉灵与嘧菌酯、醚菌酯、腈菌唑·醚菌酯和三唑酮之间存在负交互抗性.     

椰子林土壤放线菌的分离及其拮抗椰子泻血病菌的鉴定

从椰子林不同类型土样中分离到101株放线菌,采用PDA培养基和高氏一号培养基及甲壳素脱乙酰酶培养基进行筛选。结果表明,以椰子泻血病菌为指示菌,用对峙培养法选出抑菌带宽度达18 mm以上的菌株14株,菌株FSD-14拮抗效果最明显,其次是FSD-27。这两种菌株对椰子芽腐病菌、椰子果腐病菌等供试真菌均有良好抑菌效果,对各供试病原真菌的抑菌带宽度达18 mm以上,F1S1、F26S1、S40-2、F20M4能产生甲壳素脱乙酰酶。通过对FSD-14的培养特征、生理生化指标及16S rDNA序列分析,确定该菌株属于浅灰链霉菌（Streptomyces griseolus）中的一员。     

芒果种质对炭疽病的抗病性评价

采用离体叶片抗病性鉴定法对来自国内外的189份芒果种质进行了抗炭疽病抗性评价.结果表明:参试种质中未发现免疫种质,其中高抗种质9份、中抗种质55份、中感种质90份、感病种质34份和高感种质1份.对于这64份抗病种质,应在炭疽病流行年份继续开展田间抗病性评价工作,同时结合农艺性状评价,确定种质是否能在生产上推广或能否作为育种材料.试验结果为189份芒果种质抗炭疽病创新利用奠定了基础.     

Effects of passages through a suitable host of the fungus, Metarhizium anisopliae,on the virulence of acaricide- susceptible and resistant strains of the tick,Rhipicephalus microplus

The aim of this work was to assess the virulence of strain M379 of the fungus, Metarhizium anisopliae (Metchnikoff) Sorokin (Hypocreales: Clavicipitaceae) after different passages through a suitable host and at different concentrations for the control of both acaricide-susceptible and resistant strains of the tick, Rhipicephalus (formerly Boophilus) microplus Canestrini (Ixodida: Ixodidae) in vitro. The highest value of LC₅₀ for the susceptible strain corresponded to zero passage with 7.68 × 10⁷ conidia/ml followed by the fourth passage with 2.68 × 10⁷, which reduced 2.87-fold the lethal concentration. When comparing LC50 values of the fourth vs. the seventh passage (2.59 × 10⁵ conidia/ml), the lethal concentration was reduced 103.47-fold by the seventh passage. In addition, in the resistant strain the LC₅₀ highest value corresponded to zero passage with 4.95 × 10⁷ conidia/ml followed by the fourth passage with 7.86 × 10⁶, which reduced 6.30-fold the lethal concentration. When comparing LC₅₀ values of the fourth vs. the seventh passage (1.04 × 10⁵ conidia/ml) in the resistant strain, the lethal concentration was reduced 75.58-fold by the seventh passage. These results suggest that the number of passages on M. anisopliae through a suitable host increased its virulence on both R microplus strains. When comparing LC₅₀ of the zero passage through a suitable host of both acaricide-susceptible and resistant strains, the highest LC₅₀ values corresponded to the susceptible strain with 7.68 × 10⁷ conidia/ml followed by the resistant one with 4.95 × 10⁷, showing that on the resistant strain the lethal concentration is reduced by 1.55-fold. When comparing the fourth passage, the highest values of LC₅₀ corresponded to the susceptible strain with 2.68 × 10⁷ conidia/ml followed by the resistant one with 7.86 × 10⁶ conidia/ml, showing for the resistant strain a 3.41-fold reduced lethal concentration. Moreover, when comparing the seventh passages, the highest values of LC₅₀ corresponded to the susceptible strain with 2.59 × 10⁵ followed by the resistant with 1.04 × 10⁵ conidia/ml, revealing for the resistant strain a 2.49-fold reduced lethal concentration. These results suggest that the resistant strain needs a lower concentration of conidia than the susceptible strain. In this case, the acaricide-resistant strain is more susceptible to M. anisopliae of zero- and seven-passage strains.     

青稞根腐病生防放线菌的筛选及防效研究

为获得防治青稞根腐病的生防放线菌,从大田采集健康青稞植株及其根际土壤,利用选择性培养基对青稞根表及根际土壤进行放线菌分离筛选;以青稞根腐病原菌木贼镰孢为靶标,利用平板对峙法进行初筛,选取平均抑菌圈大于20 mm的放线菌,用发酵液法进行复筛并计算其生长抑制率;采用盆栽法测定生长抑制率较高菌株的防效及致病性,并通过分子鉴定确定其分类地位。结果表明,从初筛得到16株抑菌圈大于20 mm的放线菌中,复筛得到2株对青稞根腐病生长抑制率大于70%的菌株,分别为H35-1和AP11;测定其对青稞根腐病的防效发现,H35-1的防效为30.74,AP11的防效为48.31。对防效较好菌株AP11的16S rDNA序列进行测定并构建系统发育树发现,其与酸疮痂链霉菌(Streptomyces acidiscabies)的遗传距离为零,1 000次重复自展支持值为100,鉴定其为酸疮痂链霉菌。致病性分析发现,该酸疮痂链霉菌不具有致病性。本研究为青稞根腐病生防菌剂的研制提供了菌种资源,为青稞根腐病生物防治提供参考。     

芒果胶孢炭疽病菌对土槿皮乙酸抗性突变菌株的诱导及其生物适合度分析

土槿皮乙酸（pseudolaric acid B, PAB）是一个结构独特的天然二萜酸,前期发现该化合物对芒果胶孢炭疽菌等多种植物病原真菌具有广谱的抑菌活性,但其杀菌作用机制未知。本研究以芒果胶孢炭疽菌菌株JB-Q为供试对象,采用药剂驯化、紫外照射和钴辐射等方法诱导产生抗PAB的突变体,并分析抗性菌株的生物适合度。结果表明,仅药剂驯化法得到了18株不同抗性水平且可稳定遗传的抗PAB的胶孢炭疽菌,抗性频率为1.69×10^-7。适合度研究表明,所有供试菌株在15~35℃范围内均能生长,且在25℃时菌丝生长速率达到最大值;而不同抗性水平的突变菌株的生长速率存在一定差异,其中低抗菌株>亲本菌株>中抗菌株>高抗菌株;渗透压测试结果表明,亲本菌株对0.02% 十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate, SDS）表现更为敏感,其抑制率高达70%;在金属离子（NaCl、KCl和CaCl₂）胁迫下,抗性突变菌株则表现更为敏感。因此,研究认为PAB不易导致胶孢炭疽菌的抗性产生,但诱导产生的抗性突变菌株的生存竞争力与敏感菌株相当。此外,交互抗性结果显示,土槿皮乙酸与吡唑醚菌酯、咪鲜胺和戊唑醇之间不存在交互抗性,但与苯并咪唑类杀菌剂多菌灵存在正交互抗性,其皮尔逊相关系数为0.7729（P<0.01）,这表明PAB可能与微管抑制剂多菌灵有相似的作用机制,但仍需开展进一步的研究验证。     

Azoxystrobin resistance of French Mycosphaerella graminicola strains assessed by four in vitro bioassays and by screening of G143A substitution

We tested here five distinct in vitro screening methods assessing Mycosphaerella graminicola resistance to strobilurin fungicides: (i) spotting on agar medium, (ii) spore germination on agar medium, (iii) growth in microplates without and (iv) with the addition of Alamar blue and (v) screening of the cytochrome b substitution conferring resistance G143A. The assays were performed by assessing resistance to azoxystrobin of 32 French M. graminicola strains and the two reference strains IPO323 and IPO94269 from the Netherlands. The microplate Alamar blue assay displayed high standard deviations from all growth averages, hence reporting the strong lack of reliability of this method. As expected, the two reference strains were found sensitive with all other methods. In agreement with the disruptive resistance of M. graminicola to single-site fungicides, the half maximal inhibitory concentration (IC₅₀) values of sensitive and resistant strains displayed a bimodal distribution pattern with each type of assay. All strains carrying G143 or A143 alleles were found sensitive or resistant respectively with each bioassay. Although the absolute IC₅₀ value for each strain varied among assays, the ranking of strains according to their IC₅₀ values was overall conserved with all assays. Finally, the frequency of strobilurin resistant haplotypes within France was investigated by screening G143A in 82 strains isolated in 2005 year from 12 localities. Results showed a marked gradual decrease in resistance distribution from 70% in northern to 30% and 0% in central and southern France, respectively. The accuracy of each method as well as the widespread and incidence of strobilurin resistance within the French population of M. graminicola have been discussed.     

229份杧果种质对炭疽病抗性初步评价

炭疽病是杧果的重要病害,严重影响杧果的生长势以及杧果的产量和质量,选种抗病品种是有效的防治方法之一。采用室内离体叶片抗病性鉴定法,初步鉴定了在农业部儋州杧果种质资源圃中的229份杧果种质对炭疽病的抗病性。结果表明,在参试的种质中未发现免疫和高感种质,其中高抗种质13份、中抗种质36份、中感种质116份、感病种质64份,这些种质的初步评价,为进一步展开杧果抗病遗传规律及分子育种研究打下了基础。     

芒果小孢子发育时期与花器形态的相关性

通过对芒果小孢子发育时期细胞学、小孢子不同发育时期花蕾形态和花药颜色等的观察,直接从花蕾或花药的形态特征来判断小孢子的发育时期.结果表明,芒果小孢子发育时期与花器外部形态变化密切相关.供试芒果品种的小孢子处于单核靠边期时,花蕾纵径为2.58～3.48 mm.花蕾横径为2.30～3.32 mm.花药长度为0.71～O.90 mm,花药宽度为O.56～0.72 mm.结果为通过观察芒果花蕾外观形态来确定花药发育时期,从而确定花药培养最佳时期所对应的选蕾标准,进而为花药单倍体培养奠定基础.     

玉米穗腐病原菌禾谷镰孢的分离鉴定与致病力测试

利用形态学和分子鉴定技术,从玉米穗腐病病穗上分离并鉴定到17个禾谷镰孢菌株。以玉米自交系X178、593和 B73为材料,对其中5个产孢能力强的菌株通过玉米发芽抑制试验进行致病力测试。结果表明,菌株FG14对测试自交系的平均发芽抑制率达54.10%;FG7最低,仅有23.22%,两者相差2.3倍。选用5个菌株在田间分别接种B73和LH59果穗,两个自交系对菌株FG14和FG21的抗性评价均为感,FG7为中抗。种子发芽和田间接种鉴定结果均表明,禾谷镰孢菌株间致病力存在显著差异。试验明确不同菌株对穗腐病抗性鉴定的影响,获得的菌株为玉米种质的穗腐病抗性筛选提供理论参考。     

160份广西春大豆种质对大豆花叶病毒株系SC15和SC18的抗性评价

广西是大豆花叶病发生较为严重的地区,大豆花叶病毒株系SC15及SC18株系是广西区内主要流行株系。为了调查广西本地大豆种质对这两个流行株系的抗性,采用人工接种的方法对160份广西本地春大豆种质进行抗性鉴定。结果显示:桂下湾灰地豆、小青豆(桂平)、小青豆-1(上思)、横县黑豆-1、横县黑豆-2、横县黑豆-3、那坡黑眼豆、隆林蛇场本地豆8份种质对SC15株系高抗,占所鉴定材料总数的5%;石塘五月黄、灌阳黄豆、凤山早黄豆、三石六月黄、两造黄豆、横县黑豆-1、田黑豆7份春大豆种质对SC18株系表现抗浸染,占所鉴定材料总数的4.37%。所鉴定的广西春大豆种质中,抗SC15株系的抗病种质抗性级别低,没有对SC15株系完全免疫的大豆种质;而抗SC18株系的大豆种质抗性级别比SC15株系高,其中有7份春大豆种质对SC18株系免疫。从抗性鉴定结果看,SC18株系对广西春大豆的致病力比SC15株系弱。因此SC15株系对大豆生产的危害更为严重,是更为值得重视的一个强毒株系。本研究筛选出的抗SMV春大豆种质可作为抗源材料用于大豆抗病育种及抗性相关的研究。