湿地松体胚发育成熟的影响因子研究

以湿地松4个胚性细胞系(即稳定增殖的胚性胚柄细胞团)为材料,开展体胚发育成熟的关键影响因子研究。结果表明:不同的胚性细胞系和成熟培养基中碳源种类是影响湿地松体胚成熟的关键因素;成熟培养基中PEG分子量大小及PEG、ABA、AC不同浓度组合影响成熟体胚的数量和质量;体胚成熟较佳培养基为LP+ABA70mg.L-1+PEG 8000150g.L-1+麦芽糖60g.L-1+AC 0～2.0g.L-1+琼脂粉3.0g.L-1,直径1cm大小胚性胚柄细胞团可获得成熟子叶胚19.8个。     

芸芥体细胞胚胎成熟的影响因素研究

[目的]研究蔗糖、聚乙二醇(PEG)、脱落酸(ABA)及活性炭(AC)对芸芥体胚成熟的影响。[方法]以青城芸芥的无菌苗为试验材料,通过观察诱导体胚的形态和调查成熟体胚及正常体胚的比例,研究各因素对芸芥体胚成熟的影响。[结果]高浓度蔗糖(609、0 g/L)或添加适当浓度的PEG或一定量活性炭的条件下,芸芥体胚成熟均较好,生长快,直径达2 mm左右。45 g/L PEG最适于诱导芸芥体细胞胚胎的成熟,体胚成熟率和正常体胚率分别达35.0%和53.1%。1 g/L AC的效果最好,体胚成熟率和正常体胚率分别达30.6%和46.0%。在添加ABA的条件下,芸芥体胚成熟率和正常体胚率都低于对照。[结论]高糖培养基、添加适当浓度的PEG和一定量的活性炭均有利于芸芥体胚的成熟,ABA不利于芸芥体胚的成熟。     

湿地松体胚增殖与成熟培养研究

以湿地松未成熟合子胚为试验材料,诱导获得胚性胚柄细胞团(Embryogenic Suspensor Mass-ESM),通过培养基的优化,开展湿地松ESM维持与增殖及体胚成熟培养的研究。研究结果表明:基本培养基与植物生长调节剂组合影响ESM的增殖速率及质量,DCR+NAA1.0mg·L-1+6-BA0.32mg·L-1+KT0.30mg·L-1为湿地松ESM的最佳增殖培养基;在无植物生长调节剂培养基上的预培养是湿地松体胚发育、成熟的必要程序,ABA、PEG、AC和高浓度蔗糖的组合进一步促进了体胚的发育成熟,体胚在培养基LP+ABA50mg·L-1+PEG600020%+6%蔗糖+AC2.5g·L-1上获得了近子叶期体胚,但未能获得完全成熟的体胚。     

ABA和PEG对胡萝卜体细胞胚诱导和调控的影响

对ABA和PEG诱导胡萝卜（Daucus Carota L.)体细胞胚发生及其调控体细胞胚发育的效应进行了研究，在MS液体培养基中（含蔗糖30g/L)附加10umol/L ABA和100g/L PEG 6000诱导体细胞胚，能使其提早发生7－10d，而且能使子叶胚处于调控状态，确定地ABA和PEG在MS液体培养基中（含蔗糖10g/L)调控胡萝卜体细胞胚发育的下限浓度分别为1umol/L ABA,200g/L PEG 6000，细胞学观察表明此种状态的胚缺乏营养，采用双向电泳分离出与ABA和PEG渗透调节密切相关的特异蛋白质多肽S1，分子质量27．9ku，等电点 6．0左右。     

抗松针褐斑病湿地松体细胞胚胎发生与植株再生

为将抗松针褐斑病湿地松(Pinus elliottii Engelm.)良种快速推广,以未成熟合子胚为外植体,研究了合子胚发育阶段对胚性愈伤组织诱导以及ABA与PEG8000对体细胞胚成熟的影响,并探讨了体细胞胚质量及干化条件对体细胞胚萌发的影响。结果表明:发育至2~4阶段的合子胚最利于胚性愈伤组织的诱导,LP+16 mg·L~(-1)ABA+180 g·L~(-1)PEG8000+2 g·L~(-1)AC适合于体细胞胚的成熟,高质量体细胞胚经"滤纸容器法"干化2周后萌发,萌发的体细胞胚于1/4WPM+0.3 mg·L~(-1)NAA+1 mg·L~(-1)IBA上培养70 d左右根部发育,转入1/2WPM中,30 d左右侧根产生发育完整的再生植株。     

油松胚性愈伤组织成熟培养的影响因素

以油松的胚性愈伤组织为材料,利用单因素试验设计探究ABA质量浓度、PEG质量浓度、植物凝胶质量浓度、糖的种类和其质量浓度对油松体细胞胚成熟率的影响;在此基础上采用正交试验筛选出最佳培养条件。单因素试验结果表明,成熟培养基中ABA质量浓度14~18 mg·L^-1、PEG质量浓度50~100 g·L^-1、植物凝胶质量浓度2.5~5.0 g·L^-1、麦芽糖和蔗糖质量浓度组合(15+25)g·L^-1时,体细胞胚的成熟效率较高;正交试验结果表明,成熟培养基中ABA质量浓度16 mg·L^-1、PEG质量浓度75 g·L^-1、植物凝胶质量浓度5 g·L^-1、麦芽糖和蔗糖质量浓度(10+30)g·L^-1时,油松体细胞胚的成熟效率提高了0.8倍。     

北美蓝云杉体细胞胚发生技术研究

研究北美蓝云杉体细胞胚发生技术,对该树种的胚胎发生机理和建立相关的快繁技术体系等具有一定的理论意义。以成熟胚为外植体,分别对基本培养基、生长调节剂种类和浓度对其体细胞胚发生各阶段的影响进行了研究,同时观察体细胞胚发生过程的形态特征。结果表明:1)胚性愈伤组织诱导培养基,首先在DCR培养基+2,4-D5.0mg/L+6-BA4.0mg/L+KT2.0mg/L诱导15d后,之后转入DCR培养基+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L,胚性愈伤诱导率最高为45.3%;2)胚性愈伤组织保持与增殖培养基为1/2LM培养基+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L+PEG40001.0g/L,胚性愈伤组织增殖率最高为102.27%;3)IBA可促进成熟体细胞胚的诱导,以1/2LM+IBA0.5mg/L+ABA2.0mg/L(以上4种培养基均附加蔗糖30g/L,谷氨酰胺450mg/L,水解酪蛋白500mg/L,琼脂5.0g/L,pH=5.8)的体细胞胚诱导率最高,为38.10%;4)在1/2MS+1.0g/L活性炭的培养基上,体细胞胚萌发,子叶生长但胚根发生较少。北美蓝云杉体细胞胚诱导过程中出现严重的畸形胚现象及生根难的问题,今后有待进一步研究。     

ABA和PEG对胡萝卜体细胞胚诱导和调控的影响

对 ABA和 PEG诱导胡萝卜 (Daucus carota L.)体细胞胚发生及其调控体细胞胚发育的效应进行了研究。在 MS液体培养基中 (含蔗糖 30 g/ L)附加 10 μm ol/ L ABA或 10 0 g/ L PEG6 0 0 0诱导体细胞胚 ,能使其提早发生 7～ 10 d,而且能使子叶胚处于调控状态。确定了 ABA和 PEG在 MS液体培养基中 (含蔗糖 10 g/ L)调控胡萝卜体细胞胚发育的下限浓度分别为 1μmol/ L ABA,2 0 0 g/ L PEG6 0 0 0 ,细胞学观察表明此种状态的胚缺乏营养。采用双向电泳分离出与 ABA和 PEG渗透调节密切相关的特异蛋白质多肽 S1 ,分子质量 2 7.9ku,等电点 6 .0左右     

樟树胚性愈伤组织诱导与体胚发生研究

以樟树未成熟合子胚为外植体,探讨了外植体取材时间、植物生长调节剂配比、附加有机物等因素对胚性愈伤组织诱导、增殖培养及体细胞胚胎发生的影响。结果表明:不同采集时期的合子胚愈伤组织诱导率差异显著,只有心形胚时期的合子胚才能诱导胚性愈伤组织;在改良MS+4.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA培养基初诱导情况下,后接入改良MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L 2,4-D培养基中,胚性愈伤组织诱导率可达77.78%;外加添加200 mg/L水解络蛋白和200 mg/L环糊精可保持胚性愈伤组织增殖和体细胞胚诱导,胚性愈伤组织增殖系数达3.86,每克愈伤组织平均分化116.67个体细胞胚,胚性愈伤组织继代周期以25～30 d为宜。在改良MS+200 mg/L环糊精+1.0 mg/L ABA+0.5 mg/L IAA中可以促使体胚成熟萌发,萌发率可达52.78%。将萌发的芽体转接到MS+0.1 mg/L BA+0.5 mg/L IAA+0.2 g/L AC生根培养可获得完整植株。     

紫花苜蓿高频体胚发生及萌发成苗技术与转基因应用

以紫花苜蓿的子叶或叶片为外植体,建立高频体胚发生及成苗技术体系,为苜蓿耐逆性状的遗传改良提供技术支撑。在愈伤诱导、体胚诱导、体胚成熟与萌发等几个关键环节,分析比较培养基组分对培养效果的影响。建立在SHDK培养基上诱导愈伤、MB(-/+)+ABA 0.4mg/L+PEG-6000 50g/L+蔗糖50g/L培养基上诱导体胚、Bio2Y培养基上促体胚发育成熟、1/2 MS(或SH)培养基上体胚萌发成苗的高频再生技术体系。最适条件下,每克胚性愈伤组织可产生77.9个正常萌发成苗的健康体胚。再生植株在生长箱内经过2周20℃、16h/d的光照培养后移栽温室,成活率达90%以上。利用该离体再生技术成功地将凝集素基因PPA导入苜蓿中,获得抗蚜转基因苜蓿。     

红皮云杉球状胚诱导影响因子分析

为了提高红皮云杉体胚形成的数量和质量,对红皮云杉球状胚诱导阶段的一些影响因子进行了分析.结果发现：肌醇、活性炭和遗传基础对红皮云杉球状胚诱导的影响均达到了显著水平;附加15 g/L肌醇和3 g/L活性炭而不加任何激素的RJW培养基的球状胚诱导效果最好,达到97.6个/g;遗传基础不同的3个细胞系对中等浓度肌醇和活性炭的反应是一致的.     

棉花优良新品种泗棉3号高频体细胞胚发生和植株再生的研究

选择我国棉花优良品种泗棉３号进行组织培养，获得了具有高频胚胎发生的愈伤组织、胚状体和小植株。在附加ＺＴ的ＭＳ培养基上，泗棉３号的下胚轴、子叶、根均诱导获得了愈伤组织，但其形成率和形成量不同，其中下胚较易诱导获得愈伤组织，根和子叶较差。ＺＴ对愈伤组织形成和生长影响较大，其在愈伤组织诱导中较适的使用浓度为３．０或５．０ｍｇ／Ｌ。     

In Vitro Selection and Identification of Drought-Tolerant Mutants in Sweetpotato

In vitro selection of drought-tolerant mutants in sweetpotato cv. Lizixiang was studied by using PEG6000 as selection stress. Embryogenic suspension cultures were cultured in MS medium containing 0-35% PEG6000 and 2 mg L-1 2, 4-dichlorophenoxyacetic acid (2, 4-D). The results indicated that 30%PEG6000 can be used for the optimal selection stress of drought-tolerance. Embryogenic suspension cultures irradiated with 80 Gy gamma-ray were cultured in MS medium containing 30 % PEG6000 and 2 mg L-1 2,4-D and 20 drought-tolerant cell aggregates were obtained. These cell aggregates were transferred to solid MS medium supplemented with 2 mg L-1 2,4-D and formed embryogenic callus with somatic embryos. The embryogenic callus with somatic embryos was further transferred to MS medium supplemented with 1 mg L-1 abscisic acid (ABA), resulting in the germination of somatic embryos. In this study a total of 18 regenerated plants were obtained. The regenerated plants were transplanted in a greenhouse and 11 lines were formed. The analysis on drought treatment of seedlings, water retaining capacity of leaves and coefficient of drought-tolerance showed that 3 lines had significant drought-tolerance in comparison with the control plants.     

日本落叶松体细胞胚胎发生的研究

[目的]对日本落叶松体细胞胚胎发生进行系统研究。[方法]以日本落叶松5个品种的未成熟合子胚为外植体,研究基本培养基、品种基因型、杂交系和纯系品种对日本落叶松愈伤组织诱导的影响,以及ABA对体细胞胚成熟及植株再生的影响。[结果]通过对日本落叶松胚性愈伤组织的诱导和体细胞胚的成熟培养获得再生植株。2种基本培养基中,DCR对胚性愈伤组织的诱导频率最高,达54.0%;落叶松品种之间的愈伤组织诱导率有差异,以杂交品种愈伤组织的诱导率最高,达71.4%,优于纯系的落叶松品种（27.3%～50.0%）;在体细胞胚的成熟培养过程中,ABA可严重影响体细胞胚的发育,并影响到其以后的萌发能力和植株再生。[结论]杂交品系更有利于胚性愈伤组织诱导,ABA对日本落叶松体细胞胚胎发育起重要作用。     

北美枫香雄花和花序轴诱导体细胞胚胎发生

北美枫香是适应性强、生长速度快、秋叶红艳美丽的园林绿化树种。为了提高其繁殖效率,以北美枫香雄花和花序轴为外植体,采用完全随机区组设计,研究外植体类型,基因型,TDZ浓度对北美枫香愈伤组织的诱导、体胚分化和萌发的影响。结果表明:雄花作为外植体,合适的诱导培养基为改良Blaydes培养基+TDZ 0.15 mg/L+水解酪蛋白1 g/L+蔗糖40 g/L+3% 植物凝胶;花序轴作为外植体,合适的诱导培养基为改良Blaydes培养基+TDZ 0.01 mg/L+水解酪蛋白1 g/L+蔗糖40 g/L+3% 植物凝胶。合适的萌发培养基为不含水解酪蛋白的基本培养基。如果出现球形胚,将培养物转接到不含任何生长调节剂的改良Blaydes培养基上,体胚经成熟可进一步形成完整小植株。该体胚体系的建成将显著提高北美枫香的繁殖效率。      

香榧体细胞胚发生的初步研究

 以香榧Torreya grandis ‘Merrillii’胚为外植体,研究了基本培养基、复合添加物、碳源以及植物生长调节物质对愈合组织形成的影响,筛选出胚性愈合组织诱导和增殖的适宜条件,并初步进行了体细胞胚的诱导与萌发试验。结果表明：Schenk and Hildebrandt （SH）是最佳基本培养基,碳源以蔗糖最好,在SH中添加谷氨酰胺,愈合组织诱导率显著高于其他处理,达50.8%;低浓度的萘乙酸（NAA）或2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）能够促进愈合组织的诱导,NAA的促进作用比2,4-D明显,当NAA的质量浓度为0.1 mg·L^－1时,愈合诱导率显著高于其他处理,达60.1%;SH+0.1 mg·L^－1 NAA+30 g·L^－1蔗糖是愈合组织形成的最佳条件,SH+0.05 mg·L^－1 NAA+30 g·L^－1蔗糖为胚性愈合组织形成和增殖的最适宜培养基;胚性愈合组织在添加有脱落酸（ABA）和聚乙二醇（PEG） 6000的SH培养基上,可形成体胚,以1/2SH作为萌发培养基,体胚在1 200 lx光照下的萌发效果比黑暗条件下好。图3表3参21