猪伪狂犬病的诊断方法研究进展

本文对伪狂犬病的病毒分离、兔体接种试验、血清学试验以及分子生物学等诊断方法进行了综述。     

猪流行性腹泻病毒的分离和鉴定

从广州某猪场采集疑为病毒性腹泻的病猪粪便，除菌处理后接种PK—15传代细胞，采用在接种物和细胞维持波中加入60μg/mL胰蛋白酶的方法，分离到一株野毒。中和试验、动物回归试验和电镜观察结果表明，分离的病毒为猪流行性腹泻病毒(PEDV)。     

牛病毒性腹泻病毒的分离与鉴定

为了对牛病毒性腹泻病毒进行分离鉴定,本试验通过对黑龙江省完达山牛场疑似感染牛病毒性腹泻病毒患牛的直肠粪便以及鼻拭子进行无菌采集,样品经常规处理后接种于MDBK细胞,盲传3次以及PCR扩增鉴定,最后对收集到的病毒进行蚀斑纯化试验。结果表明,病毒MDBK细胞出现明显病变,PCR鉴定与预期结果相符,3次蚀斑纯化后分离到该病毒。结论可成功分离到牛病毒性腹泻病毒。     

朱鹮低致病性禽流感病毒的分离与鉴定

为了掌握朱鹮禽流感病毒流行情况,利用鸡胚分离方法从病死朱鹮脑组织标本中分离出禽流感病毒毒株,并将所分离的病毒进行血凝试验、血凝抑制试验、鸡胚最小致死量平均死亡时间(MDT)、半数致死量(LD50)及1日龄鸡脑内接种致病指数(ICPI)试验.结果表明,所分离的病毒均能够凝集鸡、肉鸭、绵羊、山羊、猪、人、兔等的红细胞,且这...     

鸡新城疫强毒株的分离及其人工感染试验

采用鸡胚接种法从安徽凤阳某患病鸡群中分离到一株病毒，经HA、HI试验及知清中和接种鸡胚试验，确定为新城疫病毒。参照国际上规定的新城疫病毒力判定的标准及其方法，测定该分离株的鸡胚是小致死量平均死亡时间（MDT）、1日龄鸡脑内接种致病指数（ICPI）和6周龄鸡静脉内接种致病指数（IVPI）分别为44h、1．74和2．39。表明该分离株具有与新城疫病毒发型相类似的毒力，属强毒力毒株。用该分离株对16日龄的鸡、鹅、鸭分别进行了人工试验感染，其发病率均为100％，而死亡率为分别为40％－80％、40％－60％和0。     

徐州地区牛流行热病毒的分离与鉴定

1991年夏秋之交徐州市各奶牛场暴发牛流行热。为确诊该病,采集了发病高热期抗凝血,进行了病毒分离和鉴定试验。病料经处理后,直接接种于BHK_21细胞,传至第二代可见典型的CPE。电镜下观察到80—150nm弹状病毒颗粒。分离毒的理化特性、核酸类型及中和试验结果均与标准BEFV相一致,证实该分离病毒为牛流行热病毒。     

两株鸽Ⅰ型副黏病毒的分离与鉴定

临床采集的发病鸽组织处理后经绒毛尿囊膜接种10日胚龄SPF鸡胚,并通过免疫学和分子生物学方法进行病原鉴定,确定分离到2株鸽Ⅰ型副黏病毒。结合免疫学试验和分子生物学试验对分离株研究发现,分离病毒与鸽新城疫病毒参考株处于同一个遗传进化分支,核苷酸序列一致性为89.6%~94.5%,分离株F蛋白裂解位点的氨基酸序列与新城疫强毒一致。表明在我国鸽群中仍存在高致病性新城疫病毒。研究结果为鸽瘟的防控提供了一定的理论基础。     

不同接种方式对鸡新城疫病毒HA影响的对比试验

为了研究自动接种机对接种后病毒红细胞凝集价的影响,同时了解自动接种机的接种原理,掌握其接种操作规程,并能熟练使用自动接种机进行接种,进行了人工接种与自动接种机接种的对比试验,并进行了多次试验。结果表明,自动接种机能够完全替代人工接种进行大规模生产,且没有任何不良影响,同时已经达到较佳的接种参数,但使自动接种机的接种剂量,接种时间和接种针头距离都还需要进行摸索。     

湖南湘西地区外观健康犬携带狂犬病病毒的调查研究

为了解湖南湘西地区外观健康犬携带狂犬病病毒的情况,我们于2005年9月从湘西狂犬病疫点采集38份扑杀的外观健康的犬脑组织,并于2006年1月在湘西农贸市场采集了168份外观健康的犬脑组织。RT-PCR和直接荧光抗体试验(FAT)检测表明共有5份犬脑标本为阳性,并用乳鼠脑内接种的方法分离得到了5株狂犬病病毒毒株,分子流行病学分析表明这5株病毒均为野毒。在这5份阳性标本,疫点有4份,检出率为10.5%,市场1份,检出率为0.59%。我们的调查结果表明疫点的外观健康犬携带狂犬病病毒的检出率与国内的其它报道接近,而从市场采集的标本的检出率却要低很多。     

禽腺病毒的分离鉴定及LMH细胞适应毒的生物学特性研究

为了对采集自北京平谷某养殖场发病鸡中出现心包积液综合征症状的病料进行病毒分离和鉴定,将病料接种LMH细胞进行病毒分离,并在LMH上连续传代,取C5和C15代细胞毒分别接种3周龄SPF鸡进行致病性试验。根据分离病毒在LMH上的CPE特征、病毒血清中和试验、Hexon基因序列比对分析、SPF鸡致病性回归试验,表明从发病鸡病料中分离的一株病毒为血清4型禽腺病毒;病毒在LMH细胞盲传3代后,就能很好地适应细胞培养,出现禽腺病毒典型的CPE;培养至第10代,病毒在接种后72 h,病毒含量即可达到107.4TCID50/0.1m L的峰值滴度;接种细胞毒的SPF鸡出现4型禽腺病毒导致的典型临床症状和特异性剖检病理变化,两组接种鸡的死亡率分别为100%和70%。结果表明,研究分离到的4型禽腺病毒毒株对SPF鸡具有高致死率,但病毒经过细胞连续传代后对鸡的致死率降低。     

禽脑脊髓炎病毒的分离与初步鉴定研究

通过SPF鸡胚连续快速传代，从自然发病雏鸡脑组织中分离出一株食脑脊髓炎病毒（AEV），经鸡胚接种，雏鸡接种、琼脂扩散试验和电镜观察，初步鉴定该株病毒为AEV，暂命名为AEV-SD961株。     

鸡传染性法氏囊病的血清学诊断方法

鸡传染性法氏囊病常用的实验室诊断方法是病毒的分离和鉴定、琼脂扩散试验以及易感雏鸡接种等。其中琼脂扩散试验是比较经典而且实用方便的方法，现将鸡传染性法氏囊病的血清学诊断方法介绍如下。     

徐州地区9株新城疫病毒的分离鉴定

为了解徐州地区鸡新城疫流行现状及防治效果，采集该地区鸡新城疫疑似病料，通过血凝试验和血凝抑制试验，对病料进行病毒分离与鉴定，为鸡新城疫病防治提供参考。结果表明，疑似病料经分离培养、血凝试验和血凝抑制试验，获9株鸡新城疫病毒；1日龄雏鸡脑内接种致病指数表明．其中6株病毒为强毒株（SN03—2012、SN12—2012、SN05—2012、SN012012、LB05—2012、SN04—2010）。     

中药蟾甘口服液鸡胚接种抗鸡新城疫病毒研究

用鸡胚培养法和红血球凝集(HA)试验,测定中药蟾甘口服液对鸡新城疫病毒的抑制作用。试验共分4组,第Ⅰ组接种病毒尿囊液与中药蟾甘口服液混合液,HA滴度0。第Ⅱ组接种病毒尿囊液与西药金刚烷胺混合液,HA滴度5log2。第Ⅲ组接种病毒尿囊液与生理盐水混合液,HA滴度9log2。第Ⅳ组不接种病毒尿囊液,不给药,HA滴度0。结果表明,中药蟾甘口服液对鸡胚无毒性作用。中药蟾甘口服液与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城病毒在鸡胚中增殖。     

中药金丝桃素注射液对鸡新城疫病毒抑制作用研究

用鸡胚培养法和红血球凝集(HA)试验,测定中药金丝桃素注射液对鸡新城疫病毒的抑制作用。试验共分4组,第Ⅰ组接种病毒尿囊液与中药金丝桃素混合液,HA滴度0。第Ⅱ组接种病毒尿囊液与西药金刚烷胺混合液,HA滴度5log2。第Ⅲ组接种病毒尿囊液与生理盐水混合液,HA滴度9log2。第Ⅳ组不接种病毒尿囊液,不给药,HA滴度0。结果表明,中药金丝桃素注射液对鸡胚无毒性作用。中药金丝桃素与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城病毒在鸡胚中增殖。     

新疆库蠓源性盖塔病毒的分离与鉴定

为了解新疆尉犁县库蠓体内携带病毒情况,从该县采集18 000只库蠓,50只为一组研磨后分别接种于BHK-21、C6/36、Vero细胞,盲传5代,一组样品使BHK-21出现CPE,先用5-氟尿核苷药敏试验鉴定为RNA病毒,之后用虫媒RNA病毒引物扩增,鉴定为甲病毒,疑似盖塔病毒,最后用中和试验、免疫电镜观察和盖塔病毒C基因特异性引物PCR等方法鉴定分离毒株为盖塔病毒。本研究首次从新疆库蠓体内分离到盖塔病毒,该毒株与2005年日本分离株相似性高达98%,推测可能是由于引进日本带病种公畜或精液有关,提示在进出口畜牧贸易活动中,应加强盖塔病毒的检疫工作。     

一株貉源犬细小病毒CPV-CL01株的分离鉴定

为了探究河北某貉养殖场引起貉肠炎的病原,以便采取针对性防控措施,解决当前貉肠炎发病率高、死亡率高的问题。本研究对采集的病料进行了常规处理,离心取上清液,采用血凝试验、细胞接种、传代培养、分离毒PCR鉴定、序列分析、动物回归等方法进行试验研究,结果表明,貉肠炎病料上清液有血凝性,血凝值为l:128,接种猫肾细胞(F81细胞),盲传3代,F81细胞出现典型的细胞病变,经鉴定分离的病毒为细小病毒,基因比对为犬细小病毒(CPV-CL01株)。貉回归试验可复制出病毒性肠炎典型临床病症及病变,是一强毒株。     

鸡胚增殖病毒技术操作要点

目前病毒的培养有动物接种、组织培养和鸡胚培养3种方法,其中鸡胚培养是病毒培养中最常用的方法之一。鸡胚是正在发育中的机体,多种动物病毒能在鸡胚中增殖和传代。鸡胚的优点在于胚胎的组织分化程度低,而且可以选择不同的日龄和接种途径,病毒在鸡胚中易于增殖,部分病毒感染鸡胚以后可以产生疽斑,引起充血、出血、坏死灶和死亡等特异性的感染指征。感染病毒的鸡胚组织和液体中含有大量病毒,容易采集和处理,而且来源充足,设备和操作简便易行。     

中药虎杖注射液鸡胚接种抗鸡新城疫病毒研究

用鸡胚培养法和红血球凝集(HA)试验,测定中药虎杖注射液对鸡新城疫病毒的抑制作用。试验共4组,第Ⅰ组接种病毒尿囊液与中药虎杖混合液,HA滴度0。第Ⅱ组接种病毒尿囊液与西药金刚烷胺混合液,HA滴度4log2。第Ⅲ组接种病毒尿囊液与生理盐水混合液,HA滴度7log2。第Ⅳ组不接种病毒尿囊液,不给药,HA滴度0。结果表明,中药虎仗注射液对鸡胚无毒性作用。中药虎杖与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中增殖。     

山羊痘病毒贵州株的分离与鉴定

山羊痘是由羊痘病毒属山羊痘病毒(GPV)引起的一种严重危害山羊的高度接触性传染病.试验通过病原分离、琼脂扩散试验、鸡胚接种、电镜形态学观察及PCR鉴定等方法对贵州地区山羊群爆发的疑似山羊痘进行病原的分离与鉴定,现报道如下.