鸭疫里氏杆菌的分离鉴定

2009年4月从扬州某鸭场分离到一株细菌,经分离培养、染色镜检、生化特性和玻片凝集试验确定其为ⅩⅤ型鸭疫里氏杆菌。动物致病性试验表明,鸭疫里氏杆菌分离菌株可以通过肌肉注射、皮下注射和滴鼻三种途径感染试验鸭,使攻毒鸭发生100%死亡,说明该鸭疫里氏杆菌分离株具有很强的致病性。     

鸭疫里氏杆菌的分离和鉴定

鸭疫里氏杆菌 (Ｒｉｅｍｅｒｅｌｌａａｎａｔｉｐｅｓｔｉｆｅｒ,ＲＡ) ,曾用名鸭疫巴氏杆菌 (Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａａｎａｔｉｐｅｓｔｉｆｅｒ)、鸭传染性浆膜炎 ,是主要感染于雏鸭的传染病。本病多发于 2～ 7周龄的雏鸭 ,主要表现为纤维素性心包炎、气囊炎、肝周炎、脑膜炎等。发病率 5 %～ 90 % ,死亡率 5 %～5 0 % ,给养鸭业造成重大的经济损失。目前 ,防治本病主要用药物治疗和疫苗预防。本研究将从上海地区分离鸭疫里氏杆菌并鉴定 ,为ＲＡ的防治提供科学依据。1　材料与方法1 .1　材料培养基 :血液琼脂和巧克力色琼脂 ,自制。病鸭…     

鸭疫里氏杆菌的分离鉴定

从死亡及濒死期雏鸭的肝、脾、肺和腹水等病料中分离到8株细菌,经培养特性、形态特征观察和生化试验等,鉴定为鸭疫里氏杆菌（Riemerella anatipestifer）。用分离株人工感染7日龄健康雏鸭,复制出与自然发病雏鸭相同的病例。药敏试验表明,该菌株对氟苯尼考、丁胺卡那霉素、林町霉素高度敏感,对卡那霉素、恩诺沙星等11种药物均有不同程度的耐药性。     

鸭疫里氏杆菌的分离鉴定和药敏试验

对江西丰城地区某规模化养鸭场疑似鸭传染性浆膜炎的病死鸭进行病原菌的分离鉴定、生化试验和药敏试验,初步鉴定为鸭疫里氏杆菌。药敏实验结果发现分离菌对庆大霉素、链霉素、氯霉素、阿米卡星、环丙沙星、呋喃唑酮高度敏感,对青霉素、红霉素、诺氟沙星、四环素、氨苄西林存在耐药性。     

3型鸭疫里氏杆菌的分离与鉴定

采集福州市北郊某番鸭场接种过1型和2型鸭疫里氏杆菌（RA）双价灭活疫苗而发病死亡的雏鸭肝，从中分离到1株RA，经对分离菌培养特性、形态观察和血清型鉴定，属3型RA。     

我国鸭疫里氏杆菌血清型的鉴定

１９９７年１月－１９９８年３月,从北京市２０个商品鸭场自然病死的北京白鸭和河南省与上海市部分鸭场的樱桃谷鸭分离到２７６株鸭疫里氏杆菌,采用凝集试验和琼脂扩散沉淀试验,对其进行了血清型的研究。其中７０株细菌为１型,６４株为２型,其余１４２株怀１,２,型参考菌株的抗血清发生反应。     

山东地区鸭疫里氏杆菌的分离鉴定

通过对山东省6个肉鸭养殖较多县(市)的调查,共收集了118份临床病料。经细菌分离、生化试验、PCR检测和动物回归试验,确诊102份为鸭疫里氏杆菌感染,细菌分离率为86.44%。对102株菌株进行血清型鉴定,优势血清型为10型、1型、2型和6型,分别占总分离株的30.39%、25.49%、17.65%和10.78%。     

鸭疫里氏杆菌不同血清型广西株的分离鉴定

从广西部分地区9个发病鸭场的病料中分离出9株疑似鸭疫里氏杆菌，经培养特性、形态、染色性及生化反应特性等鉴定为鸭疫里氏杆菌（RA）。RA血清型分型试验结果表明，9株分离菌中有7株（GX1、GX2、GX3、GX4、GX5、GX6、GX8）属血清型Ⅰ型；另2株（GX7、GX9）与GX1株的阳性血清无交叉凝集反应，GX7、GX9株制备的阳性血清也无交叉凝集反应，表明这2株菌既非Ⅰ型又不属同型的RA。经致病性试验，GX1株具很强的致病力，能使北京鸭和本地麻鸭发病死亡，GX7和GX9株仅能使北京鸭发病死亡，而不致本地麻鸭发病。结果表明，广西存在着不同血清型的RA，而且有的菌株致病性很强。     

安徽省某鸭场鸭疫里氏杆菌的分离鉴定

对安徽省某鸭场病鸭的临床症状及剖检病变进行分析和细菌分离,并对分离的细菌进行形态培养、PCR检测和克隆测序,初步鉴定疑似为鸭疫里氏杆菌的有2株,分别命名为AH-1和AH-2,同时将测序结果与GenBank上公布的序列AY606207进行比对,结果发现AH-1和AH-2与其同源性分别为97．0％和100．0％。给健康鸭注射该分离茵可复制出心包炎、肝周炎、气囊炎等典型病理变化并引起死亡。药敏试验结果表明,这2株分离菌对头孢唑林、阿莫西林、氟苯尼考、氨苄青霉素高度敏感,对罗红霉素、利福平中度敏感,对庆大霉素、丁胺卡那、红霉素、氧氟沙星、强力霉素不敏感,对链霉素、恩诺沙星、环丙沙星完全耐药。     

鸭疫里氏杆菌病病原的分离鉴定

鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)病,是造成养鸭业严重经济损失的传染病之一。作者对某鸭场的病死鸭进行临床症状观察、病理剖检,通过细菌的分离培养及鉴定,确诊病死鸭病原为鸭疫里氏杆菌。鉴于养殖场中该病的存在及对养鸭业的危害,建议加强对鸭疫里氏杆菌病的诊断及监控。     

16S rRNA基因及外膜蛋白基因分析在鸭疫里默氏菌鉴定中的应用

本实验对鸭疫里默氏菌（包括6个血清型）、大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌和多杀性巴氏杆菌进行了16S rRNA基因片段的扩增和测序，并将测序结果进行了同源性比较和酶切分析；同时根据标准血清2型鸭疫里默氏菌外膜蛋白的基因序列设计一对引物进行扩增。根据16S rRNA的测序结果及EcoRⅠ和HaeⅢ酶切片段分析，可将鸭疫里默氏菌与其它临床症状易混淆的细菌感染相区别，而外膜蛋白基因序列的特异性也为鸭疫里默氏菌的鉴别诊断提供了一种快速、准确的PCR鉴定方法。     

禽大肠杆菌的分离与16S rRNA的鉴定

从疑似患有大肠杆菌病的病死鸡群中采取粪便样品,分离病原进行生化鉴定,从8份样品中分离鉴定出6株大肠杆菌。根据细菌16S rRNA 基因的高度保守性,设计合成大肠杆菌的共同引物,对随机选取的1株细菌进行PCR扩增,并与GenBank中的E.coli 16S rRNA进行序列比对,确定这株细菌与大肠杆菌的同源性达99%以上。本方法特异性好,为实验室鉴定大肠杆菌提供了一种简单、容易操作的手段。     

鸡卡氏杆菌的分离与16S rRNA基因的分析鉴定

四川雅安某种鸡场种鸡出现消瘦,腹部膨大,肝脏肿大破裂出血,腹膜和输卵管炎为主要特征的疾病.为诊断和预防此病的发生,通过对细菌分离纯化、形态学观察、生化试验、药物敏感性试验鉴定出1株致病菌,应用通用引物对细菌的16S rRNA基因进行克隆和测序,测序结果于NCBI上进行BLAST比对,选择同源性较高的巴氏杆菌科15个属的29株细菌16S rRNA序列进行比对分析,构建遗传进化树.结果表明,分离纯化的细菌能在血平板上生长,革兰氏染色阴性短杆状,能发酵大多数糖和醇类,对头孢类抗生素敏感,16S rRNA序列与卡氏杆菌属细菌的同源性最高,在92.2%～99.5%之间,特别是与鸭卡氏杆菌同源在97.5%～99.5%之间.遗传进化树分析结果表明,该菌株与卡氏杆菌属细菌属于同一大分类群,与鸭卡氏杆菌位于同一个小分支,最终诊断该鸡场为卡氏杆菌感染.     

一株猪源棒状杆菌的分离及其16S rRNA基因分析鉴定

四川某商品猪场仔猪出现以体温升高,背、腹和腿部皮肤发绀,淋巴结出血肿大,肺、脾脏出血、化脓为主要特征的疾病。通过对分离细菌的纯化培养、形态学观察、生化试验、致病性试验和药物敏感性试验,鉴定出一株致病菌。应用通用引物对其16S rRNA基因进行克隆和序列分析,序列在NCBI上进行BLAST比对,选择同源性较高的棒状杆菌属中25株不同种的菌株16S rRNA序列进行比对分析,构建遗传进化树。分离纯化的细菌在鲜血琼脂平板厌氧条件下生长良好,为革兰氏染色阳性杆状菌,能发酵部分糖类,能致死小白鼠,对头孢类抗生素敏感,16S rRNA序列与棒状杆菌属细菌的同源性最高,在78.2%~98.0%之间,遗传进化树分析结果表明,该菌株与棒状杆菌属细菌属于同一分类群,分离菌鉴定为棒状杆菌。     

16S rRNA基因在细菌菌种鉴定中的应用

本文综述了应用16S rRNA基因作为靶基因对细菌进行鉴定的各种分子生物学技术，并指出应用16S rRNA基因在乳酸菌鉴定方面的研究进展。     

牛无浆体16S rRNA基因的克隆测序及分析

从自然感染无浆体的重庆黄牛无菌采集血液,提取全血基因组,用血营养菌16S rRNA基因的通用引物进行PCR扩增,得到长约1500 bp的扩增片段,将其克隆到pMD18-T载体后进行测序,并与5条边缘无浆体、4条中央无浆体、4条牛无浆体、4条羊无浆体和3条嗜吞噬细胞无浆体16S rRNA基因序列进行系统发育分析.结果表明所克隆的基因片段长度为1412 bp,GenBank登录号为FJ169957.序列比较结果显示,所获得的序列与Kawa-hara公布的牛无浆体日本株(AB211163)同源性最高,达到99.0%,系统发育分析发现,该序列被聚类到牛无浆体群,并与嗜吞噬细胞无浆体群聚类到一个大的分支.本文从分子水平证实重庆地区存在牛无浆体,牛无浆体与嗜吞噬细胞无浆体的亲缘关系比其他3种无浆体更近.     

16 S rRNA在细菌分类鉴定研究中的应用

细菌的16S核糖体RNA（ribosome RNA,rRNA）以其在进化上的特征性序列,现已被广泛用于细菌分类和鉴定的分子指标。其具体操作是,以聚合酶链式反应（PCR）分离细菌样本中的16SrRNA的基因片段,通过克隆、测序或酶切、探针杂交获得其序列信息,再与16SrRNA数据库中的序列数据进行比较,确定其在进化中的位置,从而鉴定样本中可能存在的微生物种类。文章综述了16SrRNA作为微生物系统分子分类鉴定的理论基础和方法,以及在细菌分类鉴定中的应用。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定及16S rRNA序列分析

从云南某规模化养猪场病猪肺脏分离到1株革兰氏阴性小杆菌,经细菌生化鉴定、PCR鉴定和16S rRNA序列比对鉴定为副猪嗜血杆菌。抗生素药物敏感试验结果表明,分离菌株对四环素、红霉素、氯霉素、头孢噻吩高敏;对庆大霉素、氧氟沙星、诺氟沙星中敏;对磺胺甲唑耐药。16S rRNA分析结果表明,该分离株与GenBank中的Hps参考株AB078973(基因登录号)同源性为100%,将分离菌株鉴定为副猪嗜血杆菌。16S rRNA遗传进化关系表明,分离株与副猪嗜血杆菌3株血清5型参考株AB078972、AB078973、AB078974的16S rRNA序列位于一个分支上,遗传进化关系最近,它们之间的核苷酸同源性在99.0%~99.4%之间,初步鉴定为血清5型副猪嗜血杆菌,致病性试验结果表明,分离菌株对小白鼠有强致病性,命名为YN-1株。     

云南鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白A 及16S rRNA序列分析

为了探讨鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer, RA)云南流行株的外膜蛋白A (OmpA)的基因序列差异及其与16S rRNA序列的相关性,PCR扩增18株云南流行株鸭疫里默氏杆菌OmpA基因及16S rRNA核苷酸序列,分别构建其系统进化树,分析其系统进化关系。结果表明,18株鸭疫里默氏杆菌OmpA基因分为2个群,其同源性分别为86%~99.2%和92.6%~100%。18株鸭疫里默氏杆菌16S rRNA基因同属1个群,同源性高达96.1%~100%。 RA-1、RA-2、RA-11和RA-39 4株分离株的OmpA基因位于进化树的同一个亚群,其16S rRNA基因也位于进化树的同一亚群,两者呈现出明显的相关关系,其他14株分离株的OmpA基因系统进化树与16S rRNA基因系统进化树无明显的相关关系。     

鸡卡氏杆菌的分离与16S rRNA基因的分析鉴定

四川雅安某种鸡场种鸡出现消瘦,腹部膨大,肝脏肿大破裂出血,腹膜和输卵管炎为主要特征的疾病。为诊断和预防此病的发生,通过对细菌分离纯化、形态学观察、生化试验、药物敏感性试验鉴定出1株致病菌,应用通用引物对细菌的16S rRNA基因进行克隆和测序,测序结果于NCBI上进行BLAST比对,选择同源性较高的巴氏杆菌科15个属的29株细菌16S rRNA序列进行比对分析,构建遗传进化树。结果表明,分离纯化的细菌能在血平板上生长,革兰氏染色阴性短杆状,能发酵大多数糖和醇类,对头孢类抗生素敏感,16S rRNA序列与卡氏杆菌属细菌的同源性最高,在92.2%～99.5%之间,特别是与鸭卡氏杆菌同源在97.5%～99.5%之间。遗传进化树分析结果表明,该菌株与卡氏杆菌属细菌属于同一大分类群,与鸭卡氏杆菌位于同一个小分支,最终诊断该鸡场为卡氏杆菌感染。