一株产低温蛋白酶芽胞杆菌FJAT-24893的筛选与鉴定

为了解西藏尼玛县甲热布错湖及其周边土壤的微生物多样性,研究低温蛋白酶的高效生产生物技术,采用温度梯度法和稀释法,NA平板涂布分离可培养芽胞杆菌,通过酪素培养基筛选产蛋白酶的耐低温菌株,对甲热布错湖耐低温菌进行分离,并对其中的产低温蛋白酶菌株进行筛选,分析分离菌株生理生化特征、最适产酶条件,结合16SrRNA基因序列同源性分析确定产低温蛋白酶菌株的多样性和系统进化地位。从获得的16株分离物中筛选到1株产低温蛋白酶芽胞杆菌菌株FJAT-24893,经16SrRNA鉴定为耐寒芽胞杆菌(Bacillus frigoritolerans)。该菌株最适产酶温度为25℃、最适pH为8。     

陕北黄土寡营养环境微生物次生代谢产物的初步研究

[目的]探索适合陕北黄土寡营养环境微生物的分离和培养方法。[方法]采用寡营养培养基分离筛选法与单菌丝顶端挑取法,对陕北黄土土样中的极端寡营养环境微生物进行分离纯化,通过硅胶薄层层析法,对筛选出的菌株的次生代谢产物进行分析。[结果]从黄土中分离出18株极端寡营养环境微生物,从石样风化土中分离出2株极端寡营养环境微生物。其中由pH值为4的培养基中分离出8株菌株,pH值为10的培养基中分离出12株菌株。JDA-03、JDA-04、JDA-05、JDA-06、JDA-07、JDB-11、JDB-13菌株的次生代谢产物丰富,JDB-9、JDB-10菌株的次生代谢产物中含有萜类物质。[结论]该研究为开发利用陕北黄土中特有的微生物资源奠定了基础。     

毒死蜱降解菌的筛选及其特性的研究

［目的］筛选对毒死蜱具有良好降解作用的菌株,为利用微生物进行有机磷农药土壤修复提供理论依据。［方法］采用富集分离法从喷施毒死蜱的土壤中分离出4株对毒死蜱有良好降解作用的菌株,经复筛最终得到1株能够高效降解毒死蜱农药的微生物菌株D12,在充分供氧的条件下,研究菌株降解毒死蜱的降解过程、生长条件及其影响因素,并在纯培养的条件下测定该菌株对毒死蜱的降解效果。［结果］当接种量为菌浓度OD560=0.179,最适pH值为7.0,温度为30 ℃,毒死蜱浓度为100 mg/L时,该菌株D12培养6 d后的降解率达到50.4％。该菌生长的最佳毒死蜱浓度为1000 mg/L,对毒死蜱的最大耐受浓度为3 000 mg/L。［结论］试验筛选的菌株D12在基础培养基中对毒死蜱有较强的降解能力。     

微生物絮凝剂产生菌的筛选及其絮凝活性研究

[目的]筛选出具有高絮凝活性的微生物产生菌,并观察研究微生物产生菌的外观形貌,并确定微生物产生菌的最佳培养条件。[方法]分别从土壤、活性污泥、食品厂污水和垃圾渗滤液中筛选出具有絮凝活性的菌株若干,然后在不同的培养基条件下通过富集培养、平板分离、纯化培养和复筛,筛选出具有高絮凝活性的菌种。在显微镜下观察菌种的形貌。最后考察了培养温度、培养时间和摇床转速对絮凝效果的影响,对培养条件进行了优化。[结果]从土壤、活性污泥、食品厂污水和垃圾渗滤液中筛选出具有絮凝活性的菌种8株,然后在不同的培养基条件下通过富集培养、平板分离、纯化培养和复筛等,筛选出絮凝活性超过90%菌种2株,在显微镜下初步鉴定为杆菌。以絮凝活性最高的F-4为例,该菌产絮凝剂的最佳培养条件为：培养时间56 h、培养温度30℃、摇床转速150 r/min。[结论]在该条件下,F-4菌株对高岭土悬浊液的絮凝率达到93.1%。     

土壤微生物在不同纤维素富集条件下的多样性

应用PCR-DGGE分子技术并结合聚类分析、主成分分析（PCA）等统计分析方法,对土壤微生物在几种不同的纤维素富集培养条件下的多样性进行分析.结果发现,不同的纤维素富集培养条件对土壤微生物的多样性有不同程度的影响：CMC和PCS两种培养基在50 ℃时所回收的土壤微生物的菌群结构和组成比较相似;纤维素富集培养基（J培养基）同CMC两种培养基所回收的土壤微生物菌群结构和组成却有很大的差异;50 ℃条件下所回收的土壤微生物其菌群结构和组成同28 ℃、37 ℃两个温度相比也相差较大.这一结果表明,组合不同的纤维素富集培养条件,结合分子和统计分析,可以对土壤样品在不同纤维素富集培养条件下微生物的多样性进行检测和评估,同时还可以为分离目标菌时富集培养条件的选择提供很有价值的参考.     

土壤中难培养微生物培养方法初探

通过在培养基中加入适量的过氧化氢酶、丙酮酸钠和适当的稀释培养基,以及采用土壤浸出液直接培养的方法,将从土壤中筛选出的处于不可培养（VBNC）状态的微生物进行培养,结果部分难培养微生物恢复分裂能力形成菌落,这为进一步开发土壤中微生物资源奠定了基础。     

重金属污染土壤微生物的分离与研究

为了解重金属污染土壤中微生物的群落状况,摸索土壤微生物改良方法,试验对不锈钢厂排污口周边土壤中的铅(Pb)、铬(Cr)、镍(Ni)、铜(Cu)、铁(Fe)、锌(Zn)采用火焰原子吸收光谱法进行检测,针对土壤重金属含量设计选择培养基进行微生物分离,然后采用基质解析飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)方法对分离的微生物进行鉴定,并在重金属培养基中采用数学方法建立生长模型。结果表明,不锈钢厂污水污泥中Fe含量高达2.0×10~5 mg/kg,Cr含量也达到4.7×10~4 mg/kg。采用高Fe培养基在污染土壤中筛选到1株微生物,经质谱鉴定为希瓦氏菌;在高Cr培养基中筛选到1株微生物,经鉴定为短小芽孢菌;2株微生物在高浓度重金属盐培养基中可耐受,但无重金属高营养培养基传代培养2代后重金属耐受能力消失。     

木香薷纯露室内抑菌效果的初步研究

为探讨木香薷纯露的抑菌效果,本试验利用木香薷为试验材料,将提取的木香薷纯露按照不同的浓度添加到配制好的微生物培养基上,然后将培养基分铺到各个培养皿中,放在不同的试验地点,观察并记录各个培养基上的菌落数量。结果表明:不同环境条件下空气中的微生物数量不同,添加不同浓度木香薷纯露的培养基上菌落数目不同,其中男生宿舍中的培养基上的菌落数量最少,抑菌效果较好;相同环境条件下,不同的纯露浓度抑菌效果不同。通过本试验研究木香薷纯露的抑菌功效,为以后在医药、食品中添加木香薷纯露进行抑菌提供理论依据。     

耐寡营养高效解磷菌株XMT-5的分离鉴定及解磷特性

为获得更加适应寡营养的自然环境条件的解磷菌株,以1/4蒙金娜培养基从土壤中分离筛选高效解磷菌株,并对其进行鉴定,分析其生长条件及解磷机制。结果表明,从土壤中共分离获得解磷菌9株,通过对解磷量的定量测定确定高效解磷菌株XMT-5,其最大解磷量为195.63 mg/L;从菌落特征、生理生化特性及16S rRNA基因序列分析三方面鉴定菌株XMT-5为根瘤菌(Rhizobium sp.);菌株XMT-5在寡营养条件下可以分泌柠檬酸、酒石酸和乙酸3种有机酸,从而可使培养液pH值下降;菌株XMT-5可在温度4~42℃、pH值4~10、Na Cl质量浓度0~80 g/L以及寡营养条件下生长,环境适应能力较强,具有良好的应用前景。     

玉米优良自交系转基因受体系统建立及转化后的筛选与再生

通过对培养基和培养条件的筛选和改进 ,提高了诱导玉米优良自交系幼胚产生胚性愈伤组织 ,建立转基因受体系统的效率。通过比较试验 ,确定了潮霉素筛选的浓度和方法。PCR检测证明 ,目的基因已整合到玉米基因组中。     

土壤微生物发酵液对猪苓菌丝生长的影响

【目的】研究土壤微生物发酵液对猪苓菌丝生长发育及胞外多糖质量浓度的影响,为其大规模人工栽培提供技术支持。【方法】从猪苓生活的土壤中分离微生物(细菌、放线菌、真菌),通过平板试验,筛选对猪苓菌丝或菌核生长有促进作用的菌株;用筛选出的微生物发酵液培养猪苓,以不添加发酵液的培养基为对照,比较不同发酵液处理对猪苓菌丝生物量及胞外多糖质量浓度的影响。【结果】平板培养中,细菌L2、L3、L5、L9处理菌丝均有分泌物出现;随着培养时间延长,菌丝颜色逐渐变黄变褐,除L2外,其余细菌菌株处理猪苓均有菌核生成;放线菌A14处理猪苓菌丝生长速度较快,但与对照差异不显著;真菌P3处理猪苓菌丝生长速度与对照相比显著提高。在液体培养基中,真菌P4发酵液可显著提高猪苓菌丝生物量,菌丝体干质量达7.67 g/L;放线菌A3发酵液处理猪苓菌丝胞外多糖质量浓度最高,达0.133 g/L。【结论】从土壤中筛选出了能够促进猪苓菌丝生长发育、提高猪苓胞外多糖质量浓度的菌株。     

不同栽培年限的人参根区土壤微生物区系变化（摘要）

[目的]明确不同栽培年限人参根区土壤真菌、细菌和放线菌浓度变化情况。[方法]以吉林省多个产地人参根区土壤作为研究对象,采用稀释平板法对真菌、细菌和放线菌进行分离和数量测定,真菌的分离用马丁培养基＋孟加拉红＋硫酸链霉素;细菌的分离用牛肉膏蛋白胨培养基;放线菌的分离用高氏1号培养基＋重铬酸钾。真菌培养温度为25℃,培养时间为6～7 d;放线菌培养温度为28℃,培养时间为4～5 d;细菌培养温度为30℃,培养时间为2～4 d。根据不同培养基中生长出的菌落数统计真菌、细菌和放线菌数量,结合土壤样品的稀释倍数,按照公式：土壤微生物浓度（cfu/g）=（菌落平均数×稀释倍数）/每皿菌液加入量（ml）,求得土壤中可培养真菌、细菌和放线菌浓度。[结果]不同地点采集的土壤样品的统计结果存在差异,但基本表现为随人参生长年限的增加,人参根区土壤中真菌浓度逐年升高,细菌和放线菌浓度逐年降低,且放线菌的变化不如细菌变化显著。[结论]土壤类型、种植模式及人参生长年限对农田土和林地土中3类微生物的浓度均有影响,但生长年限对人参根区土壤微生物的影响最显著。     

一种降解秸秆的丝状真菌的分离和定性方法

建立了一种新的简单的分离秸秆降解丝状真菌的方法,用此方法从东北寒地黑土中分离出真菌56株,其中丝状真菌46株.这种分离方法简述为:先用土壤或者堆肥浸渍秸秆至接近腐烂,再用酒精对接近腐烂秸秆进行表面灭菌,最后用土豆葡萄糖琼脂培养基培养并分离秸秆中微生物,这样分离的微生物大多为产丝真菌.用添加或者不添加硝酸铵、酵母粉和黑土浸液等辅助物的秸秆粉制成不同培养基,这些培养基用来比较其对分离的微生物的生长的影响.结果表明,同一微生物在不同培养基中生长区别很小,同一培养基不同微生物生长区别较大.选择了只含秸秆粉而不添加辅助物的培养基作为微生物是否降解秸秆的定性培养基,对分离的56株真菌以水稻、大豆和玉米3种秸秆进行降解定性鉴定,结果显示:该方法筛选的46株丝状真菌都能降解3种供试秸秆.     

利用DGGE指纹图谱技术考察不同营养条件下土壤微生物群落结构的变化

利用现代分子生物学技术,结合经典方法,克服传统的分离培养缺陷,探讨在不同营养条件下土壤微生物群落的基因多样性。经过直接从土壤中抽提总DNA,并对总DNA中16S rDNA及其中V6~V8可变区序列作PCR扩增、变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析等,发现不同处理条件下的土壤微生物的基因多样性变化与土壤微生物量的波动并不一致,说明微生物群落多样性与微生物量的关系并非线形。同时发现秸秆的添加更有利于土壤微生物群落的稳定。     

松花江底泥真菌的分离培养及分子鉴定

筛选出合适的培养基对底泥真菌进行计数,分析不同培养基的真菌数量与理化环境的差异性,并对典型真菌进行分离鉴定,探讨其解决环境问题的可能性.选用马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基、察氏琼脂(CA)培养基和沙保氏琼脂(SDA)培养基3种真菌培养基对底泥真菌进行分离培养,通过方差分析和主成分分析比较了各培养基之间可培养真菌数量的差别及其与环境因子的关系,并对代表性真菌分离纯化,进行真菌核糖体基因转录间隔区(ITS)序列的测序和进化树分析.在同一采样点之间,3种不同培养基的可培养真菌在数量上没有显著差别,而在环境因子的关联上,PDA培养基的可培养真菌数量与沉积物有机质浓度、硝氮、总氮显著相关,CA培养基的可培养真菌数量与硝氮显著相关,SDA培养基的可培养真菌数量与总氮相关,PDA培养基的可培养真菌数量与环境因子的相关性优于其他两种培养基;分离纯化得到20株代表性真菌,系统进化树表明所有的菌株能得到鉴定,实验结果显示ITS序列能很好地应用于真菌的鉴定及生态分析.     

葡萄黑痘病病原菌生长特性研究

[目的]探索葡萄黑痘病病原菌在不同培养条件下的生长情况,优化其培养条件,以缩短培养该菌纯培养物的周期,提高培养效率.[方法]通过常规培养手段,从患黑痘病黑巴拉多病叶上分离葡萄黑痘病病原菌,PCR扩增该菌ITS片段,经测序后在NCBI比较该片段序列.用同一规格培养皿培养病原菌,每隔7d观察并统计该病原菌在4种不同培养基组分、5个不同温度梯度、4个不同蔗糖浓度梯度、4种光照时间、5个不同pH条件下共计21 d的生长情况.[结果]分离到病原菌并扩增获得其ITS片段,经比对,该片段序列与NCBI已公布葡萄痂囊腔菌序列AY826763的相似度达99.9%,证实所分离病原菌为葡萄痂囊腔菌(Elsinoe ampelina).葡萄痂囊腔菌的生长最适培养基为PSA,其次是YEB;最适培养温度为25℃、最适蔗糖浓度为4.5 g/L、最适pH为8,在最适培养温度、蔗糖浓度和pH下病原菌的生长速度分别为0.07、0.03和0.01 cm/d;光照时间对葡萄痂囊腔菌生长影响不明显.[结论]葡萄痂圆孢菌生长受环境条件影响,通过培养条件优化能显著加快其生长速度,提高培养效率.     

高效絮凝剂产生菌的分离选育及培养条件优化

为了研究微生物产絮凝剂的最佳培养条件,由此提高微生物絮凝剂的絮凝率。以采集于山西省晋阳湖湖心岛和平定县玉米地10~15 cm深处土壤为试验样品,通过常规细菌分离和高岭土悬浊液法,从中筛选出编号为PY-M3和PY-F6絮凝活性较高的2株菌株。优化培养试验表明,菌株PY-M3的最佳培养条件为:培养时间72 h,碳源为葡萄糖,含量为2 g/50 mL,氮源为复合氮源,培养基初始p H值为7.0,培养温度为30℃,摇床转速180 r/min,碳氮比值45,接种量2%;在最佳培养条件下,其发酵液絮凝率从92.57%提高到94.43%。菌株PY-F6的最佳培养条件为:培养时间72 h,碳源为葡萄糖,含量为0.5 g/50 mL,氮源为酵母膏,培养基初始pH值为7.0,培养温度为30℃,摇床转速140 r/min,碳氮比值30,接种量3%;在最佳培养条件下,其发酵液絮凝率从95.95%提高到98.61%。     

微生物发酵生产β-葡萄糖苷酶

分别用土壤分离微生物和现有菌株发酵生产β－葡萄糖苷酶,经酶活力比较,筛选酶活较高的产酶菌株。其产酶条件为：以初始ｐＨ为５．５的麸皮、（ＮＨ４）２ＳＯ４等为发酵培养基,在３０℃条件下,于１４０ｒ／ｍｉｎ摇床转速下培养１２０ｈ,获较高酶产量,酶活达９．１２Ｕ／ｍｌ。     

应用正交实验法优化深红酵母产类胡萝卜素研究

利用微生物生产类胡萝卜素,近些年越来越受到人们的重视。通过研究应用正交试验法对一株分离自土壤中的深红酵母菌株产类胡萝卜素的培养条件和培养基进行了优化选择。在该优化条件下类胡萝卜素产量为０．３４５ｍｇ／ｇｄｒｇｃｅｌ,菌体生物量达７５０ｇ／１００ｍＬ培养基。     

温度和渗透压对苹果试管苗延缓生长法种质保存的效应

以富士、乔纳金试管苗为试材,通过在继代培养基中加入不同浓度的蔗糖、琼脂、甘露醇提高渗透压或置于不同温度下,筛选合适的延缓生长的条件。试验结果表明:低温条件抑制试管苗生长效果明显,适宜的低温处理为接种后在25℃培养室条件下缓苗5～10d移至8℃培养,可延长保存时间至1年半以上,茎尖成活率达100%;提高培养基琼脂、蔗糖浓度或添加甘露醇都能抑制试管苗生长,且随浓度增加,抑制作用愈发明显,但琼脂、甘露醇处理中有部分茎尖死亡;综合比较,8℃低温、60g/L蔗糖处理延缓试管苗生长效果较好。同一处理下品种间有差异,富士苹果延缓生长的效果好于乔纳金。