霍乱弧菌毒素佐剂对雏鸡口服免疫的影响

将霍乱弧菌毒素与一些抗原同时给小鼠和兔口服时能增加其体液免疫应答，本试验旨在研究霍乱毒素对鸡是否也是一种有效的粘膜佐剂，选择破伤风类毒素作为抗原模型，以ＥＬＩＳ测定肠道排泄物、胆汁及血清样品的免疫应答，给雏鸡口服２０μｇ或５０μｇ霍乱毒素的同时给破伤风类毒素时产生明显的抑制反应，但口服１００μｇ破伤风类毒素时似科能产生粘膜耐受性，但口服２０或５０μｇ霍乱毒素时其粘膜耐受性明显消失，于是认为雏鸡使用     

鸡毒支原体HS株pMGA1.2重组蛋白的免疫保护性研究

为评价鸡毒支原体(MG)HS株p MGA1.2重组蛋白(rp MGA1.2)的免疫保护效果,本研究检测了rp MGA1.2对MG黏附体外培养的鸡胚气管环粘膜的抑制作用,同时以重组霍乱毒素B亚基(r CTB)作为粘膜免疫佐剂,对rp MGA1.2免疫的SPF鸡进行了攻毒试验。结果表明,rp MGA1.2能够有效的竞争性抑制MG定植于体外培养的鸡胚气管纤毛;而且rp MGA1.2经滴鼻点眼途径免疫SPF鸡能够诱导产生特异性体液免疫和呼吸道粘膜免疫,对2×109 ccu MG-HS攻击的保护率为67%。因此,rp MGA1.2具有较强的免疫原性,具有作为疫苗抗原的潜力。     

口服疫苗与粘膜免疫

新城疫病毒疫苗伴料口服可以感染肠道粘膜。这种方法是诱发粘膜免疫而不是系统免疫。有资料表明家禽的粘膜免疫系统与哺乳类的有着相似的功能,后者能够局部产生分泌型IgA并可将产生IgA的细胞从肠粘膜转移到其它粘膜。粘膜免疫还具有抑制而不是诱导全身免疫的功能。循环抗体的产生很可能与仅作用于肠道的新城疫疫苗引起的保护作用无关。如果疫苗病毒能通过其他途径进入机体或是以后鸡只遇到强毒并耐过感染则很可能产生全身免疫。     

新型免疫佐剂--免疫刺激复合物(ISCOM)的研究进展

免疫刺激复合物(immunostimulating complex,ISCOM)是由抗原物质与由皂树皮提取的一种糖苷QuilA及胆固醇按1：1：1混合后自发形成的一种具有较高免疫活性的脂质小泡。每个小泡直径40nm,约含10～12个分子的蛋白质。ISCOM是一种全新的抗原递呈系统,对机体有免疫增强作用,具有佐剂和抗原递呈的双重功能。应用于多种细菌、病毒和寄生虫病的疫苗,具有产生“全面”免疫应答的效力,可长期增强特异性抗体应答。     

CTA1-DD蛋白在枯草芽胞杆菌中的分泌表达

有研究证实,霍乱毒素(CT)A1亚基与葡萄球菌G蛋白的D肽偶联构建的融合蛋白CTA1-DD具有良好的佐剂效果。为了获得重组CTA1-DD蛋白在枯草芽胞杆菌中的表达,将CTA1-DD基因连接到表达载体pHT43中,构建重组枯草杆菌表达载体pHT43-CTA1-DD。将重组载体转化到枯草芽胞杆菌WB600中,用IPTG诱导重组菌表达,发酵液离心后取上清液,通过SDS-PAGE和Western blot方法分析蛋白表达情况。发酵上清液经Ni-IDA琼脂糖树脂纯化,与流感病毒HA抗原混合后共同滴鼻免疫小鼠后采集小鼠血清和支气管肺泡灌洗液检测IgG和IgA的抗体水平。结果显示：重组CTA1-DD蛋白在枯草芽胞杆菌中能够分泌表达,在发酵罐中发酵36 h情况下蛋白表达量最高,目的蛋白大小在42 kDa左右,蛋白产量最高能到700μg/mL,Western blot检测目的蛋白正确表达。重组蛋白经过Ni-IDA琼脂亲和层析纯化后与HA抗原混和滴鼻免疫小鼠,ELISA结果显示CTA1-DD蛋白组针对HA抗原能够诱导更高的血清IgG和黏膜IgA抗体水平,说明枯草芽胞杆菌表达的CTA1-DD蛋白具有佐剂活性...     

大肠杆菌不耐热肠毒素的分子生物学及粘膜免疫佐剂效应

大肠杆菌不耐热肠毒素(Heat-Labile,LT)是由产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenicEscherichiacoli,ETEC)分泌的一种外毒素。LT既有较强的免疫原性又有较强的粘膜佐剂效应,其毒力较霍乱毒素(choleratoxin,CT)小而被认为是替代CT的最有潜力的粘膜免疫佐剂。本文从LT的分子结构、分子生物学特性、免疫原性、粘膜佐剂效应及其作用机制以及LT的粘膜免疫佐剂的应用等方面进行了讨论。     

黏膜免疫佐剂的筛选Ⅱ.ELISA检测

以鸡新城疫为模型,用ELISA法检测SPF雏鸡对左旋咪唑、霍乱毒素B亚单位(CT-B)、白细胞介素-2(IL-2)、明矾、蜂胶等黏膜免疫佐剂的血清学应答。结果表明,霍乱毒素B亚单位佐剂新城疫疫苗使雏鸡分泌产生的IgA最多,与其他组的差异显著(P0.05);血清和外分泌液中抗体含量较高,差异极显著(P0.01)。     

壳聚糖黏膜佐剂促进黏膜免疫的研究进展

近年来通过黏膜部位释放抗原物质的新型免疫方法受到了越来越多的关注,其中鼻腔免疫被认为是最有前景的给药途径,佐剂可以提高或优化对通过黏膜或系统途径接种抗原的免疫应答,新的黏膜佐剂和传递系统是疫苗领域的研究热点,本文就纳米载体-壳聚糖作为特殊的黏膜免疫佐剂和PEG交联壳聚糖季铵盐智能水凝胶体系作为新型的鼻腔免疫传递系统作一...     

犬新孢子虫可溶性抗原联合CpG ODN诱导小鼠体内的先天性免疫应答

为观察犬新孢子虫可溶性抗原联合Cp G ODN免疫BALB/c小鼠,诱导小鼠的先天性免疫应答,探讨Cp G ODN的佐剂效果。本研究按照每毫升104、105、106、107个虫体制备了犬新孢子虫可溶性抗原,联合Cp G ODN腹腔接种小鼠,注射后1 h、2 h、6 h、12 h收集血清,经ELISA检测IL-6和CCL2水平。结果显示,可溶性抗原联合Cp G ODN产生的IL-6和CCL2约是单抗原组的4~6倍和4~14倍,IL-6集中于免疫注射后2 h产生,而CCL2从免疫后2~12 h一直持续升高,且都具有浓度依赖性。表明犬新孢子虫可溶性抗原联合Cp G ODN可以刺激小鼠产生很强的先天性免疫应答,为进一步研究犬新孢子虫感染宿主的免疫应答机制奠定基础。     

A型流感病毒核衣壳蛋白研究进展

A型流感病毒核衣壳蛋白参与病毒生活周期的多个阶段,影响病毒的转录、复制、装配及转运功能。另外,核衣壳蛋白是细胞毒性T淋巴细胞(CTL)识别的主要抗原,CTL通过识别MHC类分子递呈的核衣壳蛋白抗原肽而清除感染的流感病毒。与核衣壳蛋白有关的CTL免疫逃避的研究证实了CTL反应对于控制病毒感染的重要性。由于核衣壳蛋白诱导产生的细胞免疫反应能针对同型不同亚型的流感病毒株产生交叉反应,将核衣壳蛋白作为疫苗成分有可能提供更加广泛、有效的保护作用。因此,对流感病毒核衣壳蛋白的深入研究,将有利于理解流感的发病机理,并为设计有效的流感疫苗奠定理论基础。     

LT粘膜佐剂对鸡新城疫疫苗的免疫增强作用研究

研究大肠杆菌热敏性肠毒素突变体蛋白(heat-labile enterotoxin,LTRG)对鸡新城疫(Newcastle disease virus,NDV)疫苗经不同途径接种效果的影响.以NDV LaSota株作为共免疫原,与LTRG重组蛋白经滴鼻、口服及肌肉注射三种途径接种雏鸡,通过血清IgG抗体、HI抗体及粘膜分泌型IgA抗体水平变化,评价不同途径接种LTRG对NDV疫苗的免疫效果的影响.结果显示:①三种途径接种,LTRG均能显著增强NDV疫苗的免疫抗体水平,免疫雏鸡血清抗体和粘膜抗体水平均高于NDV疫苗单独免疫组;②LTRG对NDV疫苗免疫增强作用,以滴鼻接种最显著:二、三免后LTRG+NDV滴鼻组与NDV组血清IgG、粘膜IgA差异均显著(P＜0.01、P＜0.05);LTRG+NDV口服与NDV组血清IgG差异不显著(P＞0.05)、粘膜IgA差异板显著(P＜0.01);LTRG+NDV肌注与NDV组IgG差异不显著(P＞0.05)、粘膜IgA差异显著(P＜0.05);③三种免疫途径比较:血清IgG抗体水平差异均不明显(P＞0.05);滴鼻、口服免疫可诱导雏鸡产生较高的粘膜IgA抗体、血清HI抗体.由此可见:LTRG粘膜佐剂对NDV疫苗免疫增强作用,以粘膜(滴鼻、口服)途径接种效果最为显著,能诱导高水平的粘膜IgA抗体及血清抗体.     

PRRSV GP5和M蛋白滴鼻免疫小鼠后特异性抗体的中和活性分析

为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5和M蛋白滴鼻免疫小鼠后产生的特异性抗体的中和活性,研究以原核表达的重组蛋白GP5和M为抗原分别与霍乱毒素B亚基(CTB)佐剂按10∶1的比例混合制备成CTB黏膜佐剂疫苗,滴鼻免疫小鼠,于首次免疫后0,7,14,21,28,35,42 d收集唾液和血清样品,利用间接ELISA方法分别检测免疫小鼠唾液中特异性抗体IgA,结果均于28 d时S/N值达到最高,ELISA效价均为1∶2;血清中特异性抗体IgG分别于21,28 d时S/N值达到最高,ELISA效价均为1∶800。通过本实验室建立的基于PAM细胞中和试验方法分别检测唾液中特异性抗体IgA和血清中特异性抗体IgG中和滴度均1∶2,结果表明PRRSV GP5和M蛋白滴鼻免疫小鼠后产生的特异性抗体未达到免疫保护作用的中和抗体水平。     

IBDV灭活病毒口服接种雏鸡后诱导的保护性免疫

本研究检测了口服福尔马林灭活的传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）对雏鸡的免疫效果。灭活ＩＢＤＶ悬浮于含碳酸钠的ＰＢＳ中，当口灌服后，这种抗原可使雏鸡产生一种抗ＩＢＤＶ血清抗体，这些雏鸡可以抵抗病毒的攻击，当用ＥＬＩＳＡ检测时，证实血清中ＩＢＤＶ特异抗体的免疫球蛋白属于ＩｇＧ，曾报道霍乱毒素对哺乳动物有很地的粘膜辅助特性，但不能增强血清抗体应答，雏鸡经口接种，随后经非肠道途径接种抗原可使抗体应答增强。     

如何进一步提高猪肺炎支原体疫苗的功效

尽管目前对猪肺炎支原体的免疫机制尚未完全清楚,但接种疫苗确实能有助于减少肺部损伤的大小和持续时间。疫苗中的抗原成分和佐剂成分对产生免疫应答至关重要。非产毒素性脂多糖似乎可促进体液和细胞介导的对猪肺炎支原体疫苗的反应。     

兽用免疫佐剂的研究现状及发展趋势

免疫佐剂具有调节免疫系统功能,使机体对抗原特异性免疫应答达到非特异性增强或改变,对免疫反应类型改变或使抗原免疫原性增强,但自身没有抗原性物质.佐剂对抗原及参与免疫应答细胞产生作用,通过对巨噬细胞活性的增强,T、B细胞反应促进来发挥自身作用.抗原表位可由佐剂突出,对免疫应答具有较强的诱导;一些会缓慢释放颗粒化抗原,而实现免疫应答的持续诱导.随着研究的深入,很多物质都被发现具有佐剂功能,主要有以下几类.     

不同类型免疫佐剂的作用比较

“免疫剂”(Immunoadjuvant)是一种能与特异性抗原结合 ,能比疫苗单独使用时产生更强的免疫应答的物质。免疫佐剂通常是指与抗原物质同时注射或预先注射后 ,能非特异地增强或改善动物机体对抗原物质免疫应答的物质。1　抗原传递系统佐剂1.1　弗氏佐剂　弗氏佐剂 (Freund′s Adju-vant,FA)分为弗氏完全佐剂 (FCA)和弗氏不完全佐剂 (FIA)。FCA是标准的诱生体液和细胞免疫佐剂 ,可诱导 Th1型细胞因子 ;FIA则是典型的只诱导 Th2型细胞因子 ,诱生抗体的佐剂。除少数兽用疫苗使用 FIA(如口蹄疫疫苗 )外 ,很少用于动物免疫。FCA的副作用 …     

新城疫、传染性支气管炎活疫苗喷雾免疫技术

喷雾免疫是利用气压使稀释的疫苗雾化,并均匀地悬浮于空气中,雾化的疫苗随呼吸进入鸡体呼吸道,呼吸道粘膜接受侵入抗原的刺激,进而产生免疫应答,呼吸道粘膜大量产生分泌型抗体IgA,分布在粘膜表面起粘膜免疫保护作用,使鸡获得免疫力。只有预防呼吸道疾病的疫苗才可以通过喷雾方式进行免疫,如鸡新城疫Ⅱ系、Ⅳ系和V4等弱毒疫苗和鸡传染性支气管炎弱毒疫苗（m20、28／86和4／91等）等。     

牛乳房炎乳头粘膜IgA阳性细胞的分布

牛乳房炎由乳头口感染各种病原微生物后引起。伴随感染乳头粘膜和乳腺见嗜中性白细胞和淋巴细胞侵润并增加了乳汁中白血球数，乳房乳汁经抗原作用后不但免疫球蛋白浓度上升，而且．免疫球蛋白数增加，因而诱导乳腺和乳头发生局部免疫。我们已知，消化道和呼吸道的粘膜，由于分泌型IgA可阻止病原体的定居，说明乳房炎病原菌的最初感染部位是从乳导管头部粘膜开始。本文通过对已判定为分泌乳房炎乳的乳头及乳房炎乳头的乳导管头部粘膜分泌IgA细胞（IgA阳性细胞）进行了免疫组织化学检查，并对发生乳房炎时粘膜免疫有关的IgA阳性细胞的变化…     

鼻黏膜免疫研究近况

鼻黏膜免疫是一种诱人的免疫途径 ,因为鼻腔内含有丰富的血管 ,故鼻腔接种既能产生黏膜免疫 ,又能产生系统免疫。同时 ,由于大多数病原体的感染发生在胃肠道、呼吸道及生殖道等黏膜表面 ,因共同黏膜免疫系统的存在 ,鼻黏膜又是该系统的重要组成部分 ,鼻黏膜免疫可在远距离黏膜部位产生免疫反应 ,起到抗黏膜感染的作用。鼻腔接种操作简单 ,不需要专门器械 ,并可避免由于注射而带来的交叉感染。故鼻黏膜免疫吸引着世界众多学者的研究和探讨。1　鼻黏膜免疫机理鼻腔接种后 ,抗原到达黏膜下层淋巴系统 ,被摄取、递呈 ,激活T细胞 ,辅助B细胞进行…     

DNA疫苗的研究进展

大约十年前,人类进入第三次疫苗革命阶段,其起始标志是Wolff在一次实验中偶然发现,他将裸露的DNA注射到肌肉中结果得到了表达的蛋白产物.自1993年起,Robinson首次报道了禽流感病毒(AIV)DNA疫苗研究成功,紧接着Ulmer证实了表达流感病毒核蛋白的质粒DNA不仅能诱导小鼠的特异性细胞免疫反应,而且可对不同血清亚型的异源流感病毒产生交叉免疫保护.在大量实验工作的基础上,一种新的疫苗——DNA疫苗诞生了,其概念可表述为将编码某种抗原蛋白的外源基因(DNA)与质粒重组后,直接导人动物细胞内,并通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白,诱导宿主细胞产生对该抗原蛋白的免疫应答,从而达到预防和治疗疾病的目的.