苹果AFLP分析体系的建立

以１２个苹果砧枯木基因型为试材,建立了扩增酶切片段长度多态性（ＡＦＬＰ）分析体系,对其分析过程中ＤＮＡ提取、双酶切、连接、预扩增、标记和选择性扩增的效果进行了检测。用Ｐ３２Ｍ６４引物构建了供试苹果砧木基因型的ＡＦＬＰ指纹图谱。该指纹图谱拥有扩增条带１０５条,多态性带６７条（占６３．８％）,条带清晰可辨,扩增信号强,无背景干扰。讨论了ＡＦＬＰ分析的影响因素。     

玫瑰基因组AFLP反应体系的建立和优化

以玫瑰(Rosa rugosa)叶片为材料,利用改良的CTAB法,提取到了高质量的玫瑰叶片DNA,并建立了37个玫瑰品种和5个蔷薇品种的AFLP银染反应体系,首次在玫瑰DNA提取、酶切连接、预扩增、选择性扩增等实验过程取得了成功,得到了清晰的玫瑰品种的AFLP指纹图谱,为玫瑰基因库的建立、优良品种选育以及亲缘关系的系列研究奠定了理论基础.     

紫薇叶片DNA的提取及AFLP反应体系的建立

以紫薇叶片为材料,利用改进的酚一氯仿法,提取到了高质量的紫薇叶片DNA,并建立了20个紫薇品种和南紫薇的AFLP银染反应体系,首次在紫薇DNA提取、酶切连接、预扩增、选择性扩增等实验过程取得了成功,得到了清晰的紫薇品种的AFLP指纹图谱,为紫薇基因库的建立、优良品种选育以及亲缘关系的系列研究奠定了理论基础．     

青阳参叶片DNA的提取与AFLP反应体系的建立

以青阳参叶片12个样品为材料,利用改良的CTAB法,提取得到高质量的青阳参DNA,通过对AFLP分析过程中DNA的提取、酶切、连接、预扩增、选择性扩增、电泳和银染等诸多因素进行优化、分析,建立了一套适合青阳参的AFLP技术优化体系,得到了清晰的青阳参AFLP指纹图谱,为青阳参基因库的建立、遗传多样性研究等奠定了理论基础。     

悬铃木AFLP分子标记技术体系的建立

采用改进的CTAB方法,从悬铃木叶片中提取基因组DNA,所得DNA样品的A260/A280值为1.7～1.9,琼脂糖凝胶电泳主带清晰、DNA纯度高、较少降解、不含酶反应抑制剂,可被MseⅠ和PstⅠ两种限制性内切酶完全酶切,从20对引物中筛选出6对带型分布均匀、多态性高且分辨能力强的引物,分别为: M74P50,M89P57,M74P26,M36P16,M80P66,M23P66.通过酶切连接、预扩增、选择性扩增、银染等试验过程,成功建立了悬铃木AP反应体系,得到了清晰的指纹图谱,试验结果重复性好.     

节瓜基因组AFLP体系建立的研究

以节瓜雌性系K36和强雄系G为材料,从DNA提取、酶切连接、预扩和选扩等方面进行选择优化,建立高效稳定的AFLP分析体系,同时从64对AFLP引物组合筛选出多态性好的引物组合6对,并以该体系开展节瓜雌性性状分子标记和图谱构建等遗传分析研究。     

橡胶树AFLP银染体系建立前期的准备

以橡胶树杂交群体为材料,来寻找适合于研究橡胶树的AFLP技术体系的建立,优化是在多方面原因的,在众多关键因素的影响中,其中优化的关键前提为质量较高的基因组DNA。本实验采取CTAB改良法提取DNA为橡胶树的AFL,P技术后续工作顺利开展打下基础。     

堇菜属植物AFLP反应体系的建立

以堇菜属17种植物为试材,建立了适合堇菜属植物研究的AFLP反应体系.采用改良的SDS法提取堇菜属植物总DNA,对堇菜AFLP银染反应体系进行优化.在提取液中加人β-巯基乙醇,PVP可有效去除酚类等物质,以满足AFLP分析标记对基因组DNA的纯度高、完整性好的要求.37℃下酶切6h可以将基因组DNA完全切开,预扩增产物稀释35倍作为选择性扩增模板效果好,扩增产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,通过银染,能得到清晰的指纹式样.     

苹果砧木亲缘关系AFLP分析

 在构建苹果ＡＦＬＰ指纹图谱的基础上,分析了我国及世界苹果生产中２０个重要苹果砧木间的遗传差异和亲缘关系。根据ＡＦＬＰ扩增结果,计算出２０个苹果砧木间的平均遗传距离为０．５５±０．１４σ．按ＵＰＧＭＡ法进行了聚类分析,并绘制了亲缘关系树状图,表明苹果属（Ｍａｌｕｓ Ｍｉｌｌ）中的两个亚属的砧木被分别聚成了两个大组,即花秋苹果亚属（Ｓｏｒｂｏｍａｌｕｓ Ｚａｂｅｌ）大组和真正苹果亚属（Ｅｕｍａｌｕｓ Ｚａｂｅｌ）大组。前者包括拥有河南海棠血统的４个砧木;后者Ｍ系、ＭＭ系矮化砧木自成一个聚类小组。研究结果与已知苹果砧木间的系谱是一致的。表明应用ＡＦＬＰ技术能在ＤＮＡ分子水平上较好地揭示苹果砧木的遗传背景及其亲缘关系。     

芒果AFLP分子标记体系的建立

[目的]构建我国芒果主要栽培品种的AFLP分子标记体系。[方法]供试31个芒果品种为：Banganapalli、台农1号、桂热10号、Carabao、Nang Klang wun、泰国506、紫花、Keitt、粤西1号、斯里兰卡811、龙井大芒、红象牙、小菲、泰国504、Spooner、R2E2、串芒、鹦鹉芒、Irwin、金煌、Kent、海豹、Haden、Dashehari、Neelum、桂香、Ono、白象牙、Bambaroo、Macheso、Zill。以粤西1号芒果幼嫩叶片为材料探索提取高质量DNA的方法,为了获得更高质量和数量的基因组DNA,对曾杰的方法进行了下列改良：A、用2％的CTAB提取液,其他不变;B、用3％的CTAB提取液,但在提取后只用氯仿异戊醇提取2次;C、用3％的CTAB提取液,但在提取后用氯仿异戊醇提取1次;D、用3％的CTAB提取液,但在提取后用酚氯仿异戊醇提取1次。用供试品种中的台农1号、Carabao、Keitt、Kent对64对引物组合进行筛选,其中8个EcoRI引物分别是E—AAC、E—AAG、E—ACA、E—ACT、E—ACC、E—ACG、E—AGC、E;AGG,8个MseI引物分别是M-CAA、M-CAC、M-CAG、M-CAT、M—CTA、M-CTC、M-CTG、M-CTT。利用AFLP分子标记在DNA水平上对芒果进行遗传多样性研究。[结果]4种方法提取的DNA较完整,均可得到明亮清晰的主带。且综合比较,用B方法（即采用较高浓度的提取液,提取后用氯仿异戊醇提取2次）可获得高质量、高纯度DNA,可用于芒果AFLP标记分析。供试64对引物组合中适用于芒果种质资源AFLP分析的引物组合共14对,分别是E—ACC／M-CAC、E—AAC／M-CAT、E—AAG／M-CAC、E-AAG／MoCAT、E—ACA／M-CAC、E—ACA／M-CAG、E—ACA／M-CAT、E—ACA／M-CTA、E．ACT／M-CAC、E—ACC／M—CTC、E—ACC／M—CTG、E-AG＆M-CAG、E．AGC／M—CTA、E—AGC/M-CTC。这14对引物组合在31份芒果种质中共扩增出1761条带,其中多样性带比例为97％。平均每对引物产生125．8条带和121．6条多样性带。14对引物均可将上述31个品种完全区别开来,其中E—ACA／M-CAT和E-AGC／M-CTC引物组合多态性最大,达100％,可用于芒果品种指纹图谱构建。[结论]利用AFLP可以高效检测芒果种质资源分子标记多样性。     

南瑞苕AFLP指纹图谱的构建与聚类分析

以甘薯生产中主要应用的亲本材料南瑞苕及其子代品种为材料,用建立的AFLP分子标记体系进行研究,筛选得到5对多态性高、分辨力强的引物EATT、MCCA等,通过这5对引物构建出了南瑞苕的指纹图谱。用16对引物对47个与南瑞苕相关的品种进行聚类分析,统计DNA多态性条带后用UPGMA方法获得了聚类分析图,根据结果将47个品种分为5大类型,该实验结果为甘薯育种工作者了解各个品种的相互关系和进一步应用某一材料的优良性状选育品种奠定了基础。     

烟草AFLP银染分析体系的建立

以14个烟草品种为试材,初步建立了适合于烟草AFLP分析的银染分析体系:烟草基因组的DNA提取采用CTAB法;地酶切连接同步进行;预扩增选用E+A和M+C引物;选择性扩增选用E+3和M+3引物;扩增产物利用6%聚丙烯酰胺凝胶电泳,后用银染法检测。采用优化的体系,20对引物组合扩增出清晰的烟草AFLP图谱。     

茶树AFLP--银染技术体系与品种指纹图谱的建立

通过对影响茶树AFLP—银染技术体系的关键因素作对比研究，建立了一套优化的茶树AFLP分子标记体系．应用该体系研究不同茶树品种的AFLP指纹，结果同一引物对不同品种扩增及不同引物对同一品种扩增都呈现出十分丰富的多态性，图谱清晰，分辨率高。     

两个芒果品种的AFLP指纹图谱

对ＡＦＬＰ技术在芒果上的应用进行了尝试,并利用１６对引物构建了两个芒果育种亲本的指纹图谱,获得了两个品种间分子水平上的多态性信息。     

利用5个多态蛋白(酶)位点分析6个地方猪品种的遗传结构

利用5个多态蛋白（酶）位点碱性磷酸酶（Akp）、蛋白酶抑制物1（PI－1)、后白蛋白1（Po-1）、后白蛋白2（Po-2）和铜蓝蛋白（Cp）分析了清平猪、阳新猪、南阳黑猪、南城黑猪、东乡花猪、杭猪6个地方猪品种的遗传结构和遗传变异。6个品种的平均杂合度大小依次为：南阳黑猪（0.4142）、南城黑猪（0.3057）、阳新猪（0.3032）、东乡花猪（0.2606）、杭猪（0.2478）、清平猪（0.2416）,通过计算Nei（1978）标准遗传距离,用UPGMA进行聚类分析,6个品种聚成2大类：清平猪、南城黑猪、阳新猪、南阳黑猪聚成一大类;东乡花猪与杭猪聚成另一类。     

芒果AFLP分子标记体系的建立及应用

［目的］构建我国芒果主要栽培品种的AFLP分子标记体系。［方法］以4个芒果品种为材料探索提取高质量DNA的方法,并利用AFLP分子标记在DNA水平上对芒果进行遗传多样性研究。［结果］从64对选择性扩增引物中筛选获得14对多态性强、带型好、分辨率高的组合。应用所筛选的引物对芒果31个主要栽培品种进行指纹图谱分析,结果显示14对引物组合对31个品种扩增出的多态性比率达到97%。［结论］利用AFLP可以高效检测芒果种质资源分子标记多样性。     

用RAPD技术对三江白猪与其他三个品种猪的群体亲缘关系的分析

应用40条随机引物对四个品种猪,大白猪、长白猪、三江白猪及东北民猪的基因组进行亲缘关系的DNA多态性分析,结果筛选出12条效果良好的随机引物,并且通过RAPD技术方法和聚类统计分析得出结论;三江白猪、长白猪及东北民猪的亲缘关系较近,而大白猪与其它三种猪之间亲缘关系则相应的较远。     

AFLP技术及其在小麦遗传研究中的应用

AFLP（Amplified Fragment length Polymorphism扩增性片段长度多态性）是一种新的DNA分子标记,近年来已应用于小麦及小麦种质资源遗传多样性、种质指纹图谱构建及遗传材料鉴定、小麦遗传连锁图谱的构建、目的基因的分子定位、分子标记辅助选择等方面的研究。本文对AFLP技术原理及其在小麦遗传研究中的应用进展及前景进行了综述。