离体培养条件下核桃器官发生和体细胞胚胎发生

采自幼树、成年树及成年树伐根萌条的嫩梢腋芽,在改良DKW培养基+6-BA1.0mg/L中可伸长生长;在加有6-BA1.0mg/L+IBA 0.01mg/L的继代培养基中,可保持腋芽的生长并形成不定芽。芽增殖率为每月600％左右。芽苗经5.0mg/L IBA处理7天,然后在含活性炭的无激素培养基中培养20天,有54％可生根成苗。5月中旬至6月上旬的幼胚,在改良DKW培养基+6-BA1.0 mg/L中,黑暗培养30天左右可产生体细胞胚,并可连续多代保持胚性分生能力。体胚在无激素的发芽培养基中黑暗培养7天左右可发芽成苗。胚性愈伤组织在悬浮振荡培养中可保持分生能力。     

刺槐未成熟合子胚的体细胞胚胎发生和植株再生

以刺槐不同胚龄的未成熟合子胚为外植体,采用混合正交试验设计,研究幼胚胚龄和不同外源激素种类及质量浓度对刺槐胚性愈伤组织的诱导和体细胞胚分化、萌发的影响.结果表明:开花后8周(55天左右)是胚性愈伤组织和体胚诱导的最佳外植体取材时期;MS+2,4-D 5.0 mg·L-1 +BA0.5 mg·L-1是诱导胚性愈伤组织的最佳培养基,出愈率最高为95.42％±0.02％;MS +NAA0.5 mg·L-1 +BA0.5 mg·L-1+谷氨酰胺250 mg·L-1+水解酪蛋白500 mg·L-1是体细胞胚诱导和分化的最佳培养基,直接体细胞胚发生率最高为92.40％±0.12％,通过愈伤组织诱导体细胞胚发生的频率最高为90.73％ ±0.49％.一旦形成球形胚,将培养物转接到不含任何生长调节剂的MS培养基上,体细胞胚经成熟萌发可进一步形成完整小植株.     

海南白花油茶花药再生体系的初步建立

适合本地种植的良种壮苗匮乏,是制约海南省油茶产业可持续发展的关键因素之一。为了通过花药体细胞胚发生途径来获得具主根的体细胞再生植株组培苗,从花粉发育时期的鉴别、初代愈伤组织诱导培养基和培养方式的筛选以及花药体胚植株的再生和移栽等方面进行探索,初步建立了海南白花油茶花药体细胞胚再生体系。结果表明:海南白花油茶未开花蕾的横径为1.19~1.30 cm时,花粉发育多处于单核靠边期,此期的花药是诱导花药胚性愈伤组织的合适外植体;适用于海南油茶花药胚性愈伤组织诱导的初代培养基为改良MS配以NAA和KT激素组合的培养基,适宜的培养方式为暗培养;花药胚性愈伤组织在NAA、BA和Zt激素组合的培养基上可再分化出体细胞胚和诱导体胚成熟。     

龙牙楤木组培苗的高效诱导研究

本实验优化了龙牙楤木组培苗木诱导的方法。包括体细胞胚的诱导、植株再生、再生植株生根和移栽等步骤,确定最佳的方案是:(一)取龙牙楤木叶柄,放置于含有2,4-二氯苯氧基乙酸(2,4-D)浓度为1.0 mg/L的MS培养基培养中,诱导胚性愈伤组织;(二)在含有同样浓度2,4-D的1/2 MS培养基中维持与增殖胚性愈伤组织浓度;(三)胚性愈伤组织在添加吲哚丁酸(IBA)3.0 mg/L的1/2 MS培养基中培养,得到成熟体细胞胚;成熟体细,胞胚继续在同样的培养基中培养萌发,获得再生植株;(五)再生植株生根培养基为不添加外源激素的1/2MS培养基。(六)生根组培苗室外移栽最优基质为V腐殖土:V蛭石=2∶3。结论:利用此方法最快可在45 d左右得到龙牙楤木移栽成活苗,此方法简便快速,更容易实现龙牙楤木苗木的工厂化生产。     

落叶松胚性愈伤组织悬浮培养体系的优化

【目的】以落叶松胚性系为研究对象,建立和优化适合落叶松胚性愈伤组织增殖的悬浮培养体系,在此基础上对悬浮组织进行体细胞胚的成熟诱导。旨在为实现落叶松胚性愈伤组织的快速增殖及体细胞胚的规模化繁育奠定基础。【方法】对已诱导获得的长白落叶松、兴安×日本杂种落叶松及日本×长白杂种落叶松胚性愈伤组织进行继代培养,取新鲜增殖的组织进行悬浮培养。采用L9(34)正交试验设计,以胚性愈伤组织的增殖量及增殖率为响应值对悬浮培养条件进行筛选和优化,并对选出的最适培养条件进行验证。以悬浮增殖的胚性组织进行体细胞胚成熟培养,统计体胚发生量。【结果】在落叶松胚性愈伤组织的悬浮培养过程中,接种量、震荡强度及培养时间对胚性组织增殖具有显著的影响。在一定范围内,落叶松胚性组织的增殖量及增殖率随初始接种量的增加而降低,随震荡强度的升高呈先增加后下降,而随培养周期的延长而增加。以4 g·L~(-1)接种于含2,4-D 0.15 mg·L~(-1)、6-BA 0.05 mg·L~(-1)及KT 0.05 mg·L~(-1)的BM培养基(SCM),在120 r·min~(-1)避光条件下悬浮培养,3个落叶松胚性系的胚性组织均能快速、稳定地增殖,培养15天的增殖率分别为2 569.42%、4 189.96%及3 001.67%,表现出较明显的种间差异。成熟培养方式对落叶松胚性悬浮组织的体胚发生量影响极显著(P=0.000)。悬浮培养获得的胚性组织接种到含琼脂6.0g·L~(-1)的固体增殖培养基(PCM)上继代15天后,转接到添加肌醇10 g·L~(-1)且无生长调节剂的1/4BM过渡培养基(TCM)上培养14天,再转入含有ABA 20 mg·L~(-1)、Ag NO35 mg·L~(-1)、PEG400080 g·L~(-1)的体胚成熟培养基上培养8周,体胚发生量显著提高(P=0.000)。在此条件下,3个落叶松胚性系OO-A1、GK-F1及KO-H的体胚发生量分别为(101.69±11.19)、(93.09±9.34)及(5.78±1.47)个·g~(-1)。【结论】悬浮培养能在短期内获得大量分散均匀、质量较高的落叶松胚性愈伤组织,且不会影响体细胞胚的发生和成熟。在BM液体培养基(SCM)中,接种量为4 g·L~(-1)、震荡强度为120 r·min~(-1)、暗培养15天,落叶松胚性组织的鲜质量可增加26.99~42.90倍。悬浮培养获得的胚性组织经固体增殖培养基(PCM)继代15天及过渡培养基(TCM)预培养14天后,再进行体胚成熟诱导可明显提高其体胚发生量。     

楸树体细胞胚胎发生研究

对楸树体细胞胚胎诱导进行了研究。结果表明：外植体类型、无菌实生苗苗龄对楸树体细胞胚胎发生影响显著,以15天苗龄幼苗的子叶为最佳诱导材料,以1／2MS＋6-BA2．00mg／L十NAA0．10mg／L培养基为体胚发生的最佳培养基;楸树体细胞胚胎发生20天左右可发育成完整幼苗,在不含生长调节剂的1／2MS培养基上生长良好。     

楸树体细胞胚胎发生研究

对楸树体细胞胚胎诱导进行了研究。结果表明:外植体类型、无菌实生苗苗龄对楸树体细胞胚胎发生影响显著,以15天苗龄幼苗的子叶为最佳诱导材料,以1/2MS+6-BA 2.00 mg/L+NAA 0.10 mg/L培养基为体胚发生的最佳培养基;楸树体细胞胚胎发生20天左右可发育成完整幼苗,在不含生长调节剂的1/2MS培养基上生长良好。     

抗松材线虫病赤松体细胞胚的发育和成熟萌发

【目的】研究脱落酸、PEG、肌醇、碳源、凝固剂及培养方式等对抗松材线虫病赤松体细胞胚发育及成熟萌发的影响。【方法】通过对抗松材线虫病赤松种质资源库的调查与分析,选用诱导和增殖状态良好的抗松材线虫病赤松无性系22#-1和13#-1为供试材料,通过不同培养条件的对比试验,筛选出最优的抗病赤松体细胞胚发育及成熟萌发条件。采用SPSS17.0等软件对体细胞胚进行统计分析。【结果】添加15 mg·L~(-1)ABA和140 g·L~(-1)PEG8000的LP培养基上,正常体细胞胚数达到171个·g~(-1),高于其他处理;在渗透剂方面,肌醇的浓度为8.0g·L~(-1)时,抗病赤松的正常体细胞胚数最多,达到179个·g~(-1),胚性愈伤组织直接放置于添加了肌醇的成熟培养基中,没有在中间过渡培养基中培养,因此可以缩短2~3周培养时间,在8周前后就形成了成熟的子叶胚;在碳源方面,添加60 g·L~(-1)麦芽糖的LP培养基上,正常的体细胞胚数达到235个·g~(-1),高于其他处理;在凝固剂方面,植物凝胶浓度为3.0 g·L~(-1)时,培养基凝固,软硬适中,产生的子叶胚生长良好,而培养基中添加了聚乙二醇(PEG),凝固剂琼脂从6.0 g·L~(-1)添加至12.0 g·L~(-1)时,培养基均不能凝固,愈伤组织无法生长,也无子叶胚形成;在培养方式方面,采用液-固增殖-固成熟方式培养时,胚性愈伤组织经11~12周发育为成熟体细胞胚,其中22#-1的正常体细胞胚数最多达到239个·g~(-1),高于其他处理;在体细胞胚萌发培养基上产生的体细胞胚的萌发率和植株转化率分别为67.2%和46.5%,再生植株移栽3个月后成活率为32.7%。【结论】将抗松材线虫病赤松胚性愈伤组织置于15.0 mg·L~(-1)ABA、140 g·L~(-1)PEG8000、8.0 g·L~(-1)肌醇、60 g·L~(-1)麦芽糖、3.0 g·L~(-1)植物凝胶的LP培养基上,以液-固增殖-固成熟培养方式培养,成功获得了正常的体细胞胚和再生植株,同时可缩短2~3周培养时间,加快抗松材线虫病赤松体细胞胚胎发生的进程。研究结果可为抗病赤松的大规模繁殖和工厂化生产提供技术支持。     

长白落叶松胚性愈伤组织诱导及体细胞胚胎发生

【目的】以长白落叶松的未成熟合子胚为外植体,进行胚性愈伤组织的诱导、增殖培养及体细胞胚胎发生的相关研究,揭示影响长白落叶松胚性愈伤组织诱导的关键因素,并探讨继代培养过程中添加不同种类、浓度的生长调节剂对胚性愈伤组织增殖及体胚发生的影响。【方法】采集长白落叶松3个家系优良单株的种子,诱导胚性愈伤组织,比较外植体采集时间、家系、2,4-D浓度及基本培养基对胚性愈伤组织诱导的影响。诱导出的胚性愈伤组织继代于含不同种类、浓度生长调节剂的增殖培养基,通过体胚发生途径获得体细胞胚。选取发育正常的体胚进行萌发,待体胚生根后移栽。【结果】不同时间采集的未成熟合子胚,其胚性愈伤组织诱导率存在较大差别,授粉后63天的合子胚诱导率为5.61%,授粉后70天诱导率为22.35%,而授粉后80天未诱导出胚性愈伤组织;‘长77-22’、‘长77-37’和‘长73-50’3个家系胚性愈伤组织的平均诱导率分别为6.69%,11.17%和3.11%;2,4-D浓度对长白落叶松胚性愈伤组织诱导具有一定影响,在一定范围内胚性愈伤组织的诱导率会随2,4-D浓度升高而升高,当其浓度为1.5 mg·L~(-1)时胚性愈伤组织的诱导率最高,达到11.11%,而当2,4-D浓度超过1.5 mg·L~(-1)时,胚性愈伤组织的诱导率则开始下降;BM,MS,S培养基均能诱导出胚性愈伤组织,其中,BM培养基的诱导率最高,S培养基的诱导率次之,MS培养基的诱导率最低。胚性愈伤组织在含2,4-D 0.3 mg·L~(-1)、6-BA0.1 mg·L~(-1)及KT 0.1 mg·L~(-1)的BM培养基上增殖15天可获得相对较多的胚性愈伤组织,增殖率为345.93%;在含2,4-D 1.5 mg·L~(-1)、6-BA 0.5 mg·L~(-1)及KT 0.5 mg·L~(-1)的BM培养基上培养14天,再经诱导可获得较多的体细胞胚胎,每克愈伤组织平均诱导179.87个体胚,并且这些体胚的萌发率及植株再生率相对较高,分别为75.00%,66.67%;再生植株移栽成活率为27.08%。【结论】不同长白落叶松家系的胚性愈伤组织诱导率不同,散粉后70天的合子胚适合诱导胚性愈伤组织,基本培养基为BM,添加2,4-D 1.5 mg·L~(-1)。胚性愈伤组织长期继代在含高浓度生长调节剂的培养基上易丧失胚性,且增殖速度慢,但体胚的发生量及萌发率相对较高;适当降低生长调节剂浓度利于愈伤组织保持胚性及增殖,但体胚的发生量及体胚的萌发率有所下降;当培养基中生长调节剂浓度较低时,不利于愈伤组织的增殖,但仍能使其胚性长期保持;采用浓度为0.5 mg·L~(-1)的NAA代替0.15 mg·L~(-1)的2,4-D有助于胚性愈伤组织的增殖,并能在一定程度上提高体胚的萌发率。因此,可根据不同阶段的培养目的,选择添加不同种类和浓度生长调节剂的增殖培养基进行继代。     

悬铃木体细胞胚胎发生及植株再生

以叶片为材料 ,研究了悬铃木的体细胞胚胎发生及其植株再生。结果表明 ,悬铃木幼苗叶片在WPM 0 1mg·L- 1 IBA 5 0mg·L- 1 BA培养基上的愈伤组织诱导率和胚性愈伤组织诱导率分别为 10 0 %和 89 1% ;2 5℃的温度有利于胚性愈伤组织在WPM 0 5mg·L- 1 BA培养基上进行体细胞胚胎发生 ;黑暗低温处理 (10℃ ) 3d不但可以促进体细胞胚胎的发生过程 ,而且可以提高其发生频率。     

天山云杉体细胞胚的成熟及萌发条件

【目的】建立天山云杉体细胞胚成熟及萌发阶段的适宜培养条件,为该树种的体细胞胚大规模繁殖和工厂化生产提供基础。【方法】以天山云杉成熟合子胚为外植体所诱导形成的胚性愈伤组织为材料,通过14个株系、4种成熟培养基、接种量(100、150、200mg的新鲜胚性愈伤组织)、ABA浓度(1.9、3.8、7.6、19、38μmol·L^-1)等体细胞胚成熟培养条件,以及对不同起源(体细胞胚、合子胚和种子)的幼苗形态特征的比较,筛选出最优的天山云杉体细胞胚成熟与萌发条件。采用SPSS18.0等统计软件对体细胞胚进行统计分析。【结果】1)天山云杉14个株系诱导体细胞胚的结果表明,不同株系在同一成熟培养基上诱导体细胞胚的数量存在差异;其中4个株系及其接种量对体细胞胚形成数量影响的结果表明,不同株系及其接种量诱导体细胞胚的数量也存在差异,当接种量为100mg时,T36株系的体细胞胚诱导数量最高,为3470±546个,显著高于其他接种量和株系(P<0.05)。2)在4种不同成熟培养基上,均形成了成熟的体细胞胚,在1/2BLG+30g·L^-1麦芽糖培养基上形成的体细胞胚数量高于其他培养基,分别为2044个(T6株系)和2282个(T36株系),且与其他培养基差异显著(P<0.05)。3)不同ABA浓度对天山云杉体细胞胚诱导数量的影响无显著性差异(P>0.05),在ABA浓度为1.9~38μmol·L^-1时,其体细胞胚平均诱导数量为2850~2913个,其中以7.6μmol·L^-1ABA的浓度处理效果较好,平均获得2913个正常体细胞胚,高于其他处理。4)将不同起源(体细胞胚、合子胚和成熟种子)萌发的小植株进行对比,结果表明,体细胞胚和合子胚幼苗发育阶段基本一致,但合子胚的幼苗比体细胞胚的幼苗约大1倍,但二者间差异不显著(P>0.05);体细胞胚与合子胚子叶的平均数量一致,二者无显著差异(P>0.05),多数幼苗子叶数量为7~8个。【结论】天山云杉体细胞胚成熟阶段的适宜培养条件为胚性愈伤组织接种量100mg,1/2BLG培养基添加7.6μmol·L^-1的ABA及75%PEG4000、30g·L^-1麦芽糖,并添加750mg·L^-1的L-谷氨酰胺或50mg·L^-1L-天冬酰胺。不同株系在诱导体细胞胚的数量上存在差异。体细胞胚再生植株与合子胚植株在形态上相似。研究结果可为天山云杉体细胞胚的大规模繁殖和工厂化生产提供基础。     

胡桃楸体细胞胚诱导的初步研究

以胡桃楸授粉后不同时期的幼胚及后期培养出的子叶、胚根和胚轴为外植体,进行体细胞胚诱导研究。结果表明,授粉后13周左右的胚轴切块在培养基DKW+6-BA 1 mg·L-1+KT 2 mg·L-1+IBA 0.05 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1上暗培养,每10 d继代1次,培养60 d左右,从胚轴切块表面直接产生体细胞胚,诱导率20%左右。其它胚龄的胚轴体胚诱导率低,而不同时期的子叶、胚根和种胚均未诱导出体胚。     

杂交鹅掌楸体细胞胚胎发生研究

以杂交鹅掌楸幼胚为外植体,进行体细胞胚胎发生研究.比较了亲本基因型、发育阶段、培养条件、生长调节物质和渗透压等对体细胞胚胎发生的影响.结果表明在以1/2MS培养基为基本成分,添加2.0～3.0mg@L-12,4-D的培养基上能够成功诱导胚性愈伤组织.以蔗糖为渗透剂,提高渗透压有利于体细胞胚胎发生;以MS为基本培养基附加ZT 1.0～4.0mg@L-1对体细胞胚胎诱导最有效;ABA的使用能有效控制畸形胚的产生;基因型、幼胚发育阶段及光照条件对体胚发生起着重要作用.     

培养基成分对黑松体胚发育成熟的影响

【目的】对日本抗性黑松体细胞胚成熟的影响因子进行研究,探究各因素在体细胞胚发生过程中的作用,为进一步提高体细胞胚发生的质量和数量提供理论依据。【方法】胚性细胞团在固体增殖培养基上继代生长10天,使用灭菌(75%乙醇擦拭、紫外灭菌30 min)的电子天平称量1 g胚性细胞团,采用50 mL无菌量筒(紫外灭菌30 min)量取30 mL培养液中于100 mL的三角瓶中,将1 g胚性细胞团转至100 mL的三角瓶中,手动搅拌至细胞团分散,置于90 r·min^-1摇床上,25℃黑暗培养7～8天。随后,取3 mL沉淀悬浮细胞进行继代增殖,每星期继代增殖一次至胚性细胞全部均匀散落于培养液。将继代4次的胚性细胞充分摇匀,取2 mL(鲜质量约200 mg)胚性悬浮细胞喷洒在不同组分麦芽糖(30、45、60 g·L^-1)、脱落酸(ABA)(0、5、10、20、30、50 mg·L^-1)、聚乙二醇(PEG8000)(0、50、75、100、125、150 g·L^-1)、活性炭(AC)(1、2、3 g·L^-1)、琼脂(琼脂6、8、10、12 g·L^-1,植物凝胶2、2. 5、3、3. 5 g·L^-1)以及麦芽糖、ABA、PEG 3因素的组合固体成熟培养基上。【结果】以#1337为材料的体细胞胚成熟发育过程中,麦芽糖45 g·L^-1,获得的体细胞胚数量显著增多。ABA浓度为5～20 mg·L^-1,体细胞胚数量呈显著上升趋势,ABA为20 mg·L^-1时,获得的体细胞胚最多。125 g·L^-1PEG8000为体胚发生最佳浓度; AC 2 g·L^-1时,胚性细胞形成结构完整、数量较多的成熟体胚;成熟培养基中添加琼脂粉,培养基不能凝固,植物凝胶更适合作为成熟培养基凝固剂。3 g·L^-1植物凝胶为抗性黑松体胚发育成熟的最佳浓度。在设计的9种成熟培养基组合中(胚性细胞#1337、#1537、#1637),胚性细胞产生体细胞胚最多的成熟培养基组合为麦芽糖45 g·L^-1、ABA 10 mg·L^-1、PEG8000 125 g·L^-1。在不同的麦芽糖、ABA和PEG组合中,不同无性系生产体细胞胚数量呈现出不同的变化趋势:胚性细胞系#1337体胚发育成熟的最佳组合为麦芽糖45 g·L^-1+ABA 10 mg·L^-1+PEG 125 g·L^-1;#1537和#1637体胚发育成熟的最佳组合为麦芽糖30 g·L^-1+ABA 10 mg·L^-1+PEG 125 g·L^-1;在3个无性系中PEG的极差最大,对抗性黑松体细胞胚发育成熟的影响最大。【结论】抗性黑松体胚发育成熟过程中,麦芽糖45 g·L^-1、ABA20～30 mg·L^-1、PEG8000 125 g·L^-1、AC 2 g·L^-1和植物凝胶3 g·L^-1对体细胞胚成熟都具有促进作用。30 g·L^-1麦芽糖、10 mg·L^-1ABA、125 g·L^-1PEG为抗性黑松体胚发育成熟的最佳组合。     

杂交榛子体细胞胚发生研究

不同培养基、激素种类及浓度和外植体对杂交榛子体细胞胚直接和间接诱导的影响的结果表明,MS培养基为杂交榛子体细胞胚发生最佳培养基;激素对杂交榛子体细胞胚直接诱导无显著影响,均可诱导成熟植株;筛选出杂交榛子愈伤组织培养最佳培养为:MS+6-BA2.0 mg/L+NAA1.5 mg/L;再生植株分化最佳培养基为:MS+6-BA2.0mg/L+N AA1.5 mg/L转入MS+6-BA 5.0 mg/L+N AA 0.01+GA3 0.5 mg/L;杂交榛子体细胞胚发生以子叶诱导率最高,以龙榛胚性愈伤组织诱导率最高。     

外源激素对日本落叶松体细胞胚发生不同阶段的影响

【目的】探究外源激素对日本落叶松体细胞胚发生不同培养阶段的影响,优化日本落叶松的体细胞胚发生条件并提高体细胞胚的质量,为研究外源激素调控落叶松体细胞胚发生的生理机制提供数据支持,为落叶松的规模化繁育和遗传改良奠定基础。【方法】首先确定生长曲线的延迟期、对数期和平台期,然后根据生长曲线,采用正交设计研究胚性胚柄团在2,4-D 0.15、0.30、0.50 mg·L-1、6-BA 0、0.15、0.30 mg·L-1和ABA 0、0.50、1.00 mg·L-1浓度下培养7天、14天、21天的鲜质量增长情况和14天的体胚发生能力,采用析因设计研究悬浮细胞在2,4-D 0.15、0.30、0.50 mg·L-1和6-BA 0、0.15、0.30 mg·L-1浓度下培养7天、14天、21天的细胞鲜质量增长情况和14天的体胚发生能力,结合鲜质量增长和体胚发生能力2种结果确定胚性胚柄团增殖和悬浮细胞生长的最佳激素浓度。最后,以不含GA3、IAA的体细胞胚诱导培养基为对照,分别研究了GA3和IAA 0、10、20、30、40 mg·L-1对体细胞胚发生的影响。【结果】7、14、21天分别处于日本落叶松胚性胚柄团增殖和悬浮细胞生长的延迟期、对数期和平台期。在胚性愈伤组织增殖阶段,2,4-D、6-BA、ABA对胚性胚柄团增殖和体胚发生能力的影响显著(P0.05),最佳的激素浓度是2,4-D 0.15 mg·L-1+ABA0.50 mg·L-1;在悬浮培养阶段,2,4-D、6-BA组合对悬浮细胞生长和体胚发生能力的影响显著(P0.05),最佳激素浓度是2,4-D 0.15 mg·L-1+6-BA 0.15 mg·L-1; GA3、IAA对成熟子叶胚的数量的影响均显著(P0.05),10～20 mg·L-1GA3或IAA时成熟子叶胚数量显著升高,而更高的GA3或IAA浓度将会抑制体胚发生。【结论】外源激素可有效调控日本落叶松的体细胞胚发生,适宜增殖阶段胚性胚柄团增殖和体胚发生能力保持的激素组合为2,4-D 0.15 mg·L-1+ABA 0.50 mg·L-1,适宜悬浮培养阶段细胞生长和体胚发生能力保持的激素组合为2,4-D 0.15 mg·L-1+6-BA 0.15 mg·L-1,添加GA3或IAA 10～20 mg·L-1可以显著提高成熟子叶胚的数量。     

三倍体毛白杨叶片培养和快速繁殖

采用三倍体毛白杨嫩叶进行组培快繁，以附加NAA的MS培养基诱导的愈伤组织，可产生大量胚状体细胞，转接培养后能形成组培苗。组培苗在MS＋IBA0.25mg/L 0.5%碳粉的培养基上20d左右开始生根，经过炼苗处理，即可移栽到大田定植。     

白皮松种胚的休眠萌发特性研究

对经低温层积处理和无预处理的白皮松种子离体胚以及带全胚乳和部分胚乳的胚进行培养试验 ,离体胚分别培养在含不同浓度蔗糖的有或无GA3的琼脂培养基或滤纸上 ;带全胚乳胚和部分胚乳胚培养在滤纸上。结果表明 ,无预处理种子的离体胚培养在滤纸或低浓度的蔗糖琼脂培养基上均不能萌发出胚根 ;当蔗糖浓度为 3 0 %时 ,2 0 %的胚可萌发出胚根 ;在 3 0 %～5 5 %范围内 ,随着蔗糖浓度的增加 ,胚根萌发率及萌发速度呈上升趋势 ,萌发率可达 40 % ,发芽指数可达 6 5 %·d- 1 ;继续增加蔗糖浓度不能使其余 60 %的胚萌发。无预处理在滤纸上培养的带全胚乳胚 92 0 %可萌发 ,带 1 2或 2 3胚乳的胚 74 7%可萌发 ,带 1 3胚乳胚仅下胚轴伸长 ,胚根不萌发 ,去除内外种皮及胚乳包被的胚 (裸胚 )没有解除休眠 ,而下胚轴在任何培养基质上都能迅速伸长。低温层积处理 3 6d和GA3处理种子离体胚在低浓度蔗糖 (分别为 0 2 %与 0 4% )琼脂培养基上可萌发 ,低温层积胚在蔗糖浓度为 3 0 %时萌发率 90 % ,发芽指数为 2 6 3 %·d- 1 ,GA3处理胚在蔗糖浓度4 0 %～ 5 0 %时萌发率 60 % ,发芽指数为个 7 5 %·d- 1 。经低温层积处理的种子离体胚在 3 0 %蔗糖琼脂培养基上 70 %胚第 3天萌发出胚根 ,但同样处理的带全胚乳胚在第     

白刺花胚性愈伤组织诱导及体细胞胚发生

【目的】探讨不同植物生长调节剂对白刺花胚性愈伤组织诱导的作用,以及培养基中氮源和无机盐浓度对白刺花体细胞胚发生和植株再生的影响,以期建立白刺花体细胞胚发生、发育及调控技术体系,为白刺花种苗快速繁殖体系建立及遗传转化研究提供参考。【方法】以白刺花叶片为外植体,研究生长调节剂2,4-D(1.0、2.0、3.0、4.0 mg ·L -1 )、NAA(0、0.5、0.8、1.0 mg ·L -1 )、6-BA(0.2、0.5、1.0、2.0 mg ·L -1 )和TDZ(0、0.2、0.5、1.0 mg ·L -1 )组合对胚性愈伤组织诱导,及NAA(0、0.2、0.5 mg ·L -1 )、6-BA(0、0.5、1.0 mg ·L -1 )和TDZ(0、0.2、0.5 mg ·L -1 )组合对体细胞胚发生的调控作用,筛选最优生长调节剂组合;并研究培养基中KNO 3和NH 4NO 3比例对体细胞胚发生的作用,及MS培养基中无机盐浓度(1/5MS 、1/4MS、1/3MS、1/2MS)对体细胞胚萌发的影响,筛选最佳的体细胞胚发育及成熟萌发条件。【结果】白刺花叶片外植体胚性愈伤组织诱导适宜培养基为MS + 2,4-D 3.0 mg ·L -1 + NAA 0.5 mg ·L -1 + 6-BA 0.2 mg ·L -1 + TDZ 1.0 mg ·L -1 +蔗糖40 g ·L -1 +琼脂7.0 g ·L -1 ,诱导率为42.0%。采用MS基本培养基时,最佳的体细胞胚发生培养基为MS + NAA 0.5 mg ·L -1 + 6-BA 1.0 mg ·L -1 + TDZ 0.5 mg ·L -1 +蔗糖40 g ·L -1 +谷氨酰胺100 mg ·L -1 +琼脂7.0 g ·L -1 ,体细胞胚发生率为78.46%,总胚数为对照的3.6倍;MS培养基中,KNO 3浓度提高1倍、NH 4NO 3降至1/2时,体细胞胚发生率可提高至91.33%,总胚数为采用MS基本培养基时的1.4倍;1/3MS培养基有利于体细胞胚的萌发,萌发率为82.75%,幼苗长势良好,单株平均鲜质量为76 mg,幼苗驯化移栽1个月后成活率达90%以上。【结论】白刺花叶片接种于添加2,4-D、NAA、6-BA和TDZ不同组合的诱导培养基上,可脱分化形成愈伤组织或胚性愈伤组织,2,4-D浓度对愈伤组织形态和质地有较大影响。TDZ有利于体细胞胚的形成,适宜浓度的生长素与细胞分裂素组合及硝态氮和铵态氮的比例对体细胞胚的形成和发育具有调控作用,降低MS无机盐浓度可提高体细胞胚萌发率,本试验体系的再生植株移栽成活率达90%以上。     

杂交落叶松体细胞胚胎发生的初步研究

本文报道杂交落叶松体细胞胚胎发生的初步结果。该实验系统和系列培养基在西加云杉、日本落叶松和马尾松的种胚和幼嫩组织的体细胞胚胎发生试验中有效。种胚和来源于２８￣４２天无菌实生苗下胚轴、子叶和胚根幼嫩组织不同位置切段接种到ＳＥＩＭ培养基，除ＣＴ和ＨＴ外，所有外植体愈伤组织（Ｃ）的诱导率为１００％；胚性愈伤组织（ＥＣ）的诱导率为３．３０％￣５８．２０％，胚性愈伤组织接种到ＳＥＭＭ培养基，经３￣５次继代培