甘蓝型油菜NER游离小孢子培养优化体系的建立(摘要)(英文)

[目的]建立甘蓝型油菜NER游离小孢子培养优化体系。[方法]对甘蓝型油菜新胞质不育恢复系(NER)进行游离小孢子培养,并对小孢子培养的影响因素作了初步研究。将所取材料接种在NLN-13诱导培养基上培养,并统计总胚产量和子叶胚产量,比较不同基因型间胚状体诱导效果将诱导培养基NLN-13中添加0.05mg/L6-BA、0.05mg/LNAA及二者混用,分别统计平均总胚产量和平均子叶胚产量。研究液体单层悬浮培养和固液双层培养2种培养方式对培养方式对小孢子胚产量的影响;在诱导培养基中加入不同浓度的秋水仙碱,对平均胚产量作调查。[结果]不同遗传背景下的甘蓝型油菜NEA不育胞质恢复系(NER)胚产量差异显著,说明在相同试验条件下基因型的差异是造成胚产量差异的重要原因。提高小孢子胚发生能力试验表明,在诱导培养基上添加适当的6-BA和NAA有利于小孢子胚的发生;固液双层培养优于液体单层培养;在诱导培养基中添加秋水仙碱加倍处理小孢子胚产量与对照差异不明显。在诱导直接成苗前对子叶型胚进行12h/12h弱光照1～2d、在生根培养基中添加一定浓度的NAA等处理能提高小孢子胚成苗率。[结论]建立了一套新胞质不育材料的小孢子培养优化体系,为加速新型胞质不育恢复系材料NER转育后代基因型纯合奠定了基础。     

甘蓝型油菜游离小孢子培养技术研究

利用小孢子培养技术对 78个甘蓝型油菜材料进行了离体小孢子培养 ,其中 5个材料获得了再生植株 ;再生植株自然加倍率只有 1 6 .1 %左右 ,而人工加倍率可达 6 0 %以上。获得遗传稳定的纯合材料 47个 ,并对其进行了农艺性状鉴定及杂交转育和组合配制工作     

甘蓝型油菜小孢子培养影响因素的研究

本实验对四川成都生态区甘蓝型油菜进行游离小孢子培养,对小孢子培养的影响因素作了系统研究,结果表明：小孢子形成阶段的温度及昼夜温差、花蕾消毒液、小孢子培养浓度及株龄都是影响小孢子胚产量的因素,小孢子形成阶段的温度以10-15℃,昼夜温差5℃左右胚产量最高达到300枚/蕾,温度低于5℃或高于20℃胚产量都较低甚至不出胚;花蕾消毒液以0.1%的Hgcl2效果较好,培养浓度以3-4蕾/皿较好;2009年成都生态环境下,株龄从125天到150天,胚产量随着株龄增加而增加,到141天达到最高,后逐渐下降。     

春性甘蓝型油菜小孢子培养技术初探

通过小孢子培养，获得了了青油３３１的单位体植株。对甘蓝型油菜小孢子培养的初步研究表明，不同材料间小孢子的产胚量存在显著差异，春性材料的产胚量高于冬性材料。     

甘蓝型油菜小孢子加倍培养技术

利用小孢子加倍培养技术可以培育基因纯合、稳定的遗传材料,掌握该技术对加速育种进度有重要意义。从选取花蕾、游离小孢子分离、小孢子加倍培养、胚诱导培养、胚状体培养、再生苗培养、再生植株倍性鉴定等方面总结了甘蓝型油菜小孢子加倍培养技术。     

长江下游甘蓝型油菜小孢子的培养体系

自从德国学者首次报道甘蓝型油菜小孢子培养技术成功以来[1],该项技术已被迅速采用.小孢子培养能够得到基因型纯合的甘蓝型油菜株系(双单倍体,Double haploid),利用该技术可以迅速纯合保持系和恢复系[2],避免性状分离;也可以对远缘杂交后代通过加倍来稳定外缘染色体[3];还可以结合诱变技术进行油菜种质资源创新,目前已经获得品质和抗性性状非常优良的株系[4,5].     

甘蓝型油菜小孢子胚状体诱导的主要影响因素研究

对基因型、小孢子发育时期、高温起始培养、培养基等甘蓝型油菜游离小孢子培养诱导胚状体的主要影响因素,研究表明：基因型和小孢子发育时期起决定性的作用,不同品种间甚至同一品种内的个体间,诱导频率差异显著;适宜培养的小孢子发育时期为单核晚期;培养基中加入活性炭可提高胚状体诱导频率;起始培养高温热击促进胚状体诱导。成熟胚状体在无激素Ｂ５培养基中,直接再生出植株或经次生胚继代培养再生植株。     

人工合成甘蓝型油菜游离小孢子培养及其植株再生研究初报

利用游离小孢子培养技术对5个人工合成甘蓝型油菜品系进行了离体小孢子培养。从大田非控温控光条件下生长的供体植株第一朵花开后3～12d,取长度2．5～3．5mm的花蕾分离小鬼子,在NLN13液体培养基中进行薄层培养诱导成胚状体,然后用无激素的MS培养基诱导植株再生。对不同的供试材料、取蕾时期和培养基蔗糖浓度对小孢子胚胎发生能力的影响作了初步研究。供试的5个材料中有4个对培养有反应,但不同材料的小孢子胚胎发生能力有较大的差异。小孢子取样的时期以主花序第一朵花开后6d左右为宜,培养基蔗糖浓度以13％的效果最好。     

春性甘蓝型油菜小孢子培养技术研究

对一批春性甘蓝型油菜(Brassica napus)杂种F1及其亲本进行小孢子培养的结果表明,不同组合(基因型)出胚率差异比较大,2006年22份材料(基因型)中有21份出胚,其中40.91%的材料每蕾出胚数在5个以上,31.82%的材料每蕾出胚数在10个以上;杂交组合的出胚率大部分高于其亲本,主枝的产胚率绝大部分都高于其分枝;秋水仙碱不同处理中以0.6 g/L浓度处理5.0 h和3.4 g/L浓度处理1.5 h,植株成活率和加倍率最高;经秋水仙碱加倍后可育的植株大部分花粉活力较高,结实指数较高;而半可育的植株花粉活力低,并有50%的植株结实指数低于1。     

基因枪转化甘蓝型油菜小孢子体系的建立

以甘蓝型油菜花油3号、湘油15号为材料,优化了甘蓝型油菜小孢子再生胚状体的条件,建立起甘蓝型油菜小孢子的高效再生体系。在主花序第1朵花开后第4d从主花序上取4．0-4．5mm花蕾,每mL NLN培养基接种1个花蕾的小孢子,在32℃起始热激培养36h,胚状体产生频率最高,花油3号达24．80个胚状体／花蕾,湘油15号达16．50个胚状体／花蕾。用基因枪转化甘蓝型油菜花油3号和湘油15号的小孢子,PCR-Southem检测证明获得了转基因植株。在小孢子培养前进行基因枪轰击及在胚状体诱导培养时进行筛选,转化频率较高,花油3号可达2．1株转基因植株／花蕾,湘油15号可达1．2株转基因植株／花蕾。     

甘蓝型油菜新不育系恢复材料花药培养影响因素的研究（英文）

Some influential factors of anther culture were studied preliminarily by conducting anther culture of the restorers of new cytoplasmic male sterile(NER).Several results were obtain from this experiment and they were listed as follow:① MS cultrure medium with such hormones as 2,4-D 2 mg/L,6-BA 0.5 mg/L,NAA 0.5 mg/L was the best suitable for callus induction of NER.②The difference of induction rate was significantly different between different plant age groups.From the 110th day to 141th day,the induction rate was increased with the increase of age and the difference of induction rate reached 0.01 significant difference level.The induction rate reached the highest value in the 141th day then it declined gradually.③The combined use of 2,4-D and 6-BA with proper increase of 2,4-D was good for inducing callus.④The green plantlet induction rate of NER was increased when the concentration of 6-BA increased from 2 mg/L to 4 mg/L.Adding ZT from 0.5 mg/L to 2 mg/L,6-BA would led 2.47% increase of green plantlet induction rate.     

甘蓝型油菜新不育系恢复材料花药培养影响因素的研究

新不育系（NEA）材料是一种不同于波里马细胞质雄不育系（Polcms）的新胞质雄不育系,该不育系不育性彻底、性状一致、遗传稳定、蜜腺和柱头发育正常、叶色深绿、生长势强、配合力高。经过多年的努力研制出了新不育恢复系（NER）。该试验就这一特殊材料进行花药培养,研究影响该材料的花培影响因素,为以后培育大量花培植株构建DH群体,进行遗传性状、分子标记和基因定位研究以及迅速纯化单倍体等更好地利用该新材料打下基础。     

甘蓝型油菜新不育系恢复材料花药培养影响因素的研究

本试验用油菜新不育胞质恢复系为材料进行花药培养,对花药培养的一些影响因素进行了初步研究,结果表明:①NER愈伤诱导以MS基本培养基较好,附加激素为:2,4-D 2mg/L、6-BA0.5mg/L、NAA 0.5mg/L最佳。②株龄不同愈伤诱导率差异显著。从110 d到141d,出愈率随着株龄增加而增加,差异达到0.01显著水平。到141d达到最高,后逐渐下降。③适当增加2,4-D浓度,2,4-D与6-BA混用有利于愈伤的诱导。④将6-BA浓度从 mg/L提高到4mg/L新不育系恢复材料绿苗诱导率增加,在2mg/L6-BA的激素水平上添加玉米素(ZT)0.5mg/L绿苗诱导率增加2.47%。     

甘蓝型油菜NEA胞质不育双低恢复系选育研究

NEA是笔者所在课题组在远缘杂交的辐射诱变后代中发现的一类甘蓝型油菜胞质不育新材料,叶色深绿,营养体旺,不育性稳定彻底,群体不育株率和单株不育度均达100%,完全不同于核不育、Pol-cms和陕2A。恢复源的寻找是NEA育种利用的关键。利用丰富的油菜地方种质资源、创新资源及引进资源,采取辐射诱变和广泛测交方式,发现了能恢复NEA育性的基础材料,进一步的遗传研究表明,恢复NEA育性的是细胞核内一对显性基因。利用含恢复基因的基础材料,进行广泛转育,正反杂交、连续回交、复合杂交、聚敛杂交、测交、连续自交、配合力测定、单株品质测试,选育出一系列稳定纯合的NEA胞质双低恢复系,如NR67、NR722、NR403、NR1917、NR9482。     

甘蓝型油菜小孢子培养研究

1材料与方法 1．1材料与培养基以甘蓝型油菜NER为试材,分别于2006年9月、2007年9月、2008年9月种植于四川省农科院郫县农场。提取液（B5）：B5大量（KN032500mg／L＋MgSq250mg／L＋CaCl2·2H2O150mg／L＋NaH2PO4·H2O150mg／L）＋B5微量Ⅰ＋B5微量Ⅱ＋KI1000mg／L＋B5有机＋Fe—Salt肌醇100mg／L＋蔗糖130g／L（高压灭菌,置4℃冰箱中备用）。诱导基本培养基（NLN·13）：NLN-13大量＋MS微量Ⅰ＋NLN-13微量Ⅱ＋Fe—EDTA40．0mg／L＋甘氨酸2．0mg／L＋烟酸5．0mg／L＋VB60．5mg／L＋VB．0．5mg／L＋肌醇100．0mg／L＋生物素0．5mg／L＋叶酸0．5mg／L＋L-丝氨酸100．0mg／L＋谷氨酰胺800．0mg／L＋谷胱甘肽30．0mg／L＋蔗糖13％＋NAA0．5mg／L＋6-BA0．05mg／L。分化培养基MS：MS＋蔗糖2％＋琼脂粉6g／L。     

Identification of a Cytoplasmic Male Sterile Line NEA in Brassica napus L. and Its Genetic Studies

Male sterile NEA plants were identified in progenies of the radiated 92P×Aggregate-silique in Brassica napus L. In 1993. Their progeny plants from test crossing and open pollination were 100％ male sterile. The double-low male sterile lines JL-4 and JL-18 were bred through successive backcrossing of the double -low variety No. 4 and No. 18 in Brassica napus L. To NEA. Restorer lines 6720 and 6722 with significant heterosis in F1 were developed. The results from investigating the restoring-maintaining relationship and inheritance of the restorer gene indicated that JL-4 and JL-18 were different from both PolCMS and Shan 2A type,and their restorer gene was controlled by a pair of dominant genic genes.     

甘蓝型油菜隐性核不育基因的SRAP标记

根据SRAP引物设计规律设计了一套引物,结合混合集群分析法(BSA),对油菜隐性细胞核雄性不育两用系430AB的不育与可育DNA池进行筛选,用在不育和可育DNA池间存在差异的引物再对430AB群体进行检测,获得了与隐性核不育基因ms连锁的3个SRAP标记,即m11e33270、m16e7280和m16e17370,它们位于核不育基因的同一侧,遗传图距分别为4.7 cM、20.1 cM和26.4 cM.     

Analysis on Combining Ability for Characters of Male Sterile Lines in Rapeseed （ Brassica napus L.）

The male sterile line is very important in the hybrid breeding program of rapeseed. This study was conducted to evaluate the combining ability of many characters of male sterile lines in Brassica napus L. Ten recessive genetic male sterile (RGMS) lines were used as parents to produce 45 single cross hybrids by using a half diallel cross method. These 45 crosses and their 10 parents were evaluated at Guiyang during 2007-2008. The results showed that both general combining ability (GCA) and specific combiing ability (SCA) effects were important for all characters, but additive gene effects were more predominant than non-additive gene effects. Qianyou 8AB and You 2894AB gave respective highly significant GCA effects of 230.94 and 127.65 kg-hm-2 for seed yield. Lines You 2894AB, QH303-4AB, You 157AB and You 2341AB gave highly significant GCA effects for oil content of 0.99, 1.62, 1.20 and 1.53%, respectively. The crosses among lines Qianyou 3AxQianyou 8B, Qianyou 8AxYou 2894B, You 2894AxQianyou 6B, Qianyou 8AxQH303-4B and Qianyou 8Ax Qianyou 6B gave high SCA effects of 616.29, 398.71,356.48, 394.24 and 303.79 kg hm-2 for seed yield, respectively. All these crosses also gave high seed yield indicating that these crosses could be used in the breeding program.     

甘蓝型油菜雄性不育系性状关联性分析

[目的]评估甘蓝型油菜雄性不育系性状间的关系。[方法]采用半双列杂交方法,利用10个甘蓝型油菜隐性细胞核雄性不育系为材料配制了45个杂交组合。45的杂交组合和10个亲本材料于2007-2008年在贵阳种植并用于评估。[结果]植株高度、株有效角果数、初花期和成熟期与产量成显著正相关,相关系数分别为0.644,0.583,0.281和0.341;每角粒数与种子大小（千粒重）成显著负相关（-0.533）。株有效角数、每角粒数、千粒重和植株高度对产量的直接通径系数分别为0.5562、0.4074、0.4813和0.4017。[结论]株有效角数、每角粒数、千粒重和植株高度与种子产量成正相关,并对产量有较高的直接贡献。其它性状包括株分枝数、初花期、成熟期和含油量对产量的贡献较低。