白粉菌重寄生菌的分离鉴定及其生防效果初评

从新疆石河子地区3种花卉上采集的150份白粉病株样本中分离出白粉菌重寄生真菌,对代表性菌株进行形态特征观察与ITS-rDNA序列分析：分离物的分生孢子器深棕色,多聚生,大小为（40.66～82.92）μm×（34.65～63.05）μm;分生孢子单胞、无色,两端含油球,大小为（3.88～5.67）μm×（2.19～2.75）μm;菌株的ITS-rDNA序列与Ampelomyces quisqualis序列的同源性达94%～100%,由此将其鉴定为白粉寄生孢（A. quisqualis）。测定该菌对荷兰菊白粉病菌的重寄生效能及控病效果,发现供试的12个菌株均可寄生于荷兰菊白粉病菌上,平均重寄生指数为26.21;菌株As-81和Rh-60对白粉病的防效较好,分别为46.62%和46.15%。     

一株红棕象甲寄生真菌的分离鉴定

为明确一株红棕象甲寄生真菌的归属,采用形态学及分子生物学方法,从产孢表型、分生孢子特征和ITS序列测定等方面对其进行了分析鉴定。结果表明:该菌分生孢子梗粗短,顶端具2～5个瓶状小梗,分生孢子呈长椭圆形或圆柱形,大小为4.8～9.3μm×2.2～3.1μm;ITS通用引物扩增该菌得到了预期的558bp条带,其与金龟子绿僵菌小孢变种的支持率高达100%。因此,将该红棕象甲寄生真菌菌株鉴定为金龟子绿僵菌小孢变种Metarhiziumanisopliaevar.anisopliae。     

进境美国大豆中大豆茎褐腐病菌的截获

 从进境的美国大豆豆秆样品中分离到2株疑似大豆茎褐腐病菌Phialophora gregata的分离物247-8和8300-5,2株分离物在PGM培养基上菌落圆形,边缘规则,白色至暗褐色,表面隆起,粗糙,轮纹状。分生孢子卵形至椭圆形,无色,平滑,单胞,平均大小4.3 μm×1.9 μm。分生孢子梗具有瓶梗状结构,无色,无隔膜或有隔膜,大小(5~16)μm×(2~3) μm,呈桶型或长颈瓶型。特异性引物BSRIGS1/2、BSR1/2和Pgl/4分别扩增分离物247-8的DNA得到预期1 022 bp、483 bp和499 bp的产物;分离物8300-5的DNA经PCR扩增分别得到834 bp、483 bp和499 bp的预期条带。2株分离物的ITS区序列完全一致,与GenBank中大豆茎褐腐病菌(登录号AB190396、DQ459387、DQ459386和AF132804)的序列相似性为100%。人工接种大豆幼嫩植株茎基部均产生大豆茎褐腐病菌的典型症状。根据分离物形态特征、PCR检测、序列分析以及致病性测试结果,将进境美国大豆样品中的分离物247-8和8300-5鉴定为大豆茎褐腐病菌P. gregata。     

线虫生防真菌淡紫紫孢菌PLHN鉴定及其生物学特性

从为害海南省茄子的根结线虫(Meloidogyne sp.)雌虫体内分离获得一株对根结线虫具致病性的真菌菌株PLHN,研究了该菌株的培养特性和形态特征。同时,克隆分析其r DNA-ITS区序列,并测定该菌株的生物学特性。结果表明,菌株PLHN在PDA上菌落呈淡粉紫色,富生粉质状分生孢子,菌落背面中心呈炒米黄色;分生孢子梗上轮生2～6个瓶梗,大小为(2.81±0.43)μm×(6.27±1.18)μm;分生孢子近圆形,无色,大小为(2.60±0.40)μm×(2.63±0.38)μm。该菌株rDNA-ITS区序列与Genbank中多个淡紫紫孢菌(淡紫拟青霉)菌株的对应序列相似性均达99%～100%。因此,将PLHN菌株鉴定为淡紫紫孢菌(Purpureocillium lilacinum)。该菌株最适培养基为PDA,菌落生长、产孢和孢子萌发的最适pH均为7.0,最适培养温度均为28℃,黑暗有利于该菌生长、产孢及孢子萌发。     

进境美国柚子中冬生疫霉的分离鉴定

从美国加州进境柚子表现褐腐症状的组织中分离到1个疫霉菌株9099,对其进行形态学特征观察、PCR检测、序列分析和致病性测定。试验结果表明,该菌株在V8培养基上菌落平贴,呈花瓣状;在PDA培养基上菌落边缘不规则,白色。孢子囊卵形或椭圆形,大小为(28.4~46.8)μm×(16.3~23.8)μm(平均37.5μm×19.4μm),长宽比为1.7~2.2∶1(平均1.9∶1)。菌株为同宗配合,卵孢子黄橙色,球形,满器,大小26.3~39.3μm(平均32.7μm),壁厚1~3μm。利用冬生疫霉(Phytophthora hibernalis)特异引物对PHIB1/PHIB2和751F/752R扩增9099的基因组DNA分别得到407 bp和616 bp的预期目标条带。菌株9099的ITS序列与Gen Bank中P.hibernalis的序列相似性为99.89%~100%。基于ITS序列构建的系统进化树显示菌株9099与P.hibernalis聚在同一个分支,亲缘关系最近。创伤接种柚子果实,接种处组织出现典型褐腐症状。根据形态学特征及ITS序列分析等,将菌株9099鉴定为P.hibernalis。     

澳洲坚果叶斑病病原鉴定及其生物学特性

通过症状观察、致病性测定、形态和培养性状观察、rDNA-ITS序列分析及生物学活性测定将分离到的病原菌鉴定为异色拟盘多毛孢Pestalotiopsis versicolor（Speg.）Steyaert。菌株JG01在PDA培养基上菌落白色、背面呈橘黄色花瓣状,分生孢子盘墨汁状散生在菌丝上,分生孢子长梭形,大小为18.3～27.4μm×5.6～7.7μm,4隔,中间3个细胞着色,分隔处颜色很深,顶端附属丝一般2～3根。ITS序列分析,菌株JG01与P.versicolor（AF405298）亲缘关系最近,同源性达到99.60%。在PDMA培养基上,25～28℃、pH 4.0～6.0、碳氮源分别为葡萄糖和酵母提取物的条件下菌丝生长最快,培养条件对菌株产孢的影响不明显。     

辽宁省大豆根腐病病原菌的分离鉴定及其生物学特性和对常用杀菌剂的敏感性

为明确辽宁省沈阳市大豆根腐病病原菌的分类地位,使用形态学特征和分子生物学技术对分离菌株进行鉴定,于室内对其最适生长温度、碳源及氮源进行测定,采用分生孢子悬浮液蘸根测定其对大豆品种合丰47的致病力,并采用菌丝生长速率法和分生孢子萌发率法测定16种常用杀菌剂对其的毒力。结果表明,从感根腐病大豆样品中共分离到31株镰孢菌菌株,基于培养性状从中选择3株疑似锐顶镰孢菌Fusarium acuminatum菌株进行鉴定和分析。这3株菌株在PDA培养基上形成的菌落呈白色绒毡状,产生黄色色素;大型分生孢子大小为3.3～7.2μm×29.0～62.0μm,小型分生孢子大小为2.5～5.7μm×9.1～16.8μm;结合翻译延伸因子(translation elongation factor,TEF)序列系统发育分析结果将3株菌株最终鉴定为锐顶镰孢菌F.acuminatum。该菌菌丝生长和孢子萌发的最适温度为25℃;最适生长碳源为葡萄糖和蔗糖,最适生长氮源为硝酸钠、硝酸钾和尿素;其对大豆合丰47的致病力较弱,发病植株的株高、根长和鲜重较空白对照显著降低了22.8%、12.2%和26.7%。在16种常用杀菌...     

进口智利李子上核果褐腐病菌鉴定

从进口智利李子上分离到一种引起李子果实腐烂的病原真菌,接种李子能引起果实变褐和腐烂。该真菌菌丝在PDA培养基上的生长最适温度为25℃,产孢少,菌落初始为浅灰色,边缘浅裂状,多次传代后逐渐变为浅白色,边缘整齐。分生孢子无色,单孢,柠檬形或卵圆形,大小11．5（9．5～14．7）μm×7．4（5．3～9．2）μm。ITS序列分析结果表明该分离物ITS区序列与GenBank中登录的16株舱laxa序列相似性分别为99．8％～100％,碱基的差异为0～1bp;与21株旭frueticola序列相似性为99．0％～99．2％,碱基的差异为4～5bp;与10株M.fructigena的序列相似性为97．5％～97．7％,碱基的差异为13～14bp。基于ITS序列的系统发育关系分析表明分离物sh675和GenBank中登录的16个M.laxa菌株属于同一个聚类群,相关的Mfructieola和M.fructigena属于另一个聚类群。M.laxa特异性引物ITS1Mix／ITS4Mlx能扩增分离物sh675的菌丝DNA,得到预期的356bp扩增产物。根据该真菌的菌落形态特征、分生孢子形态特征、ITS序列和PCR检测结果,将其鉴定为核果褐腐病菌（Monilinia laxa）。     

一株淡剑灰翅夜蛾病原性真菌莱氏绿僵菌的多基因序列鉴定

为明确从草坪害虫淡剑灰翅夜蛾Spodoptera depravata(Butler)罹病虫体分离得到的病原性真菌菌株DT2011N7的分类地位,通过形态学观察、BLAST序列比对以及基于ITS、β-tubulin和rpb2a的单基因序列分析和3个基因联合的多基因序列分析对菌株进行了鉴定。结果显示,菌株DT2011N7在萨氏麦芽糖酵母浸粉培养基上培养时,菌落初期呈白色,产孢后表面密布孢子呈淡绿色;分生孢子为椭圆形,大小为3.5~5.5μm×2.0~2.8μm。BLAST序列比对结果显示菌株DT2011N7与莱氏绿僵菌Metarhizium rileyi一致性最高,达99%~100%;在3个单基因及多基因系统进化树中,该菌株均与莱氏绿僵菌聚在同一进化分支中,自展值达99~100。结合形态学特征、同源性比对结果及系统进化树分析,将菌株DT2011N7鉴定为莱氏绿僵菌M.rileyi。     

基于形态学及多基因位点的枸杞褐斑病病原鉴定

枸杞Lycium barbarum Mill.是一种药食两用的名贵中药材,褐斑病是2010年在甘肃省枸杞种植区发生的由无性态类真菌新种枸杞小黑梨孢Stigmella lycii引起的新病害,据2015年-2018年调查,该病害已扩展至甘肃省各枸杞种植区,常年发病率45%～65%,严重度2～3级。本研究首次对枸杞小黑梨孢有性态形态进行描述,并结合分子生物学方法,确定该病病原菌的系统发育地位,为该病的防治提供一定的理论依据。枸杞褐斑病菌在离体培养条件下和越冬病叶上均可形成有性态。子囊壳球形至亚球形,大小185.6μm×176.6μm,有喙,喙的大小为(35.7～53.6)μm×(32.0～53.55)μm;子囊袋状,大小(103.2～165.7)μm×(15.7～22.4)μm,含8个子囊孢子;子囊孢子砖格状,大小(25.9～36.5)μm×(9.4～14.1)μm,平均31.2μm×12.3μm,具(4～)6～7个纵隔和1～3个横隔。通过ITS、LSU、RPB2和EF1-α多基因位点联合构建系统发育树,确定该菌为子囊菌门格孢腔菌目格孢腔菌科真菌。秋末冬初清洁田园,减少来年初侵染源,是有效防治枸杞褐斑病的关键措施。     

桑里白粉病菌重寄生真菌的分离与鉴定

为了解桑里白粉病菌的重寄生真菌种类,通过分离和寄生性验证,获得2个桑里白粉病菌重寄生真菌菌株HP8和HP9,这两个菌株寄生闭囊壳后,子囊及子囊孢子溃解。菌株HP8菌落绿色,菌丝体无色至褐色,菌丝有隔膜,分生孢子梗结节状膨大,分生孢子椭圆形、单胞、褐色或无色,ITS序列（MT463536）与尖孢枝孢Cladosporium oxysporum（MF135506）同源性为100%,系统进化树分析发现菌株HP8与尖孢枝孢（MF135506）聚在一起;菌株HP9菌落白色,菌丝无色,分生孢子月牙形、单胞、无色,ITS序列（MT463537）与刀孢蜡蚧菌Lecanicillium psalliotae（KC881072）同源性为99%,在系统进化树中,菌株HP9与刀孢蜡蚧菌（KC881072）聚在一起。结合形态特征和ITS序列分析,鉴定出菌株HP8和HP9分别为尖孢枝孢和刀孢蜡蚧菌。高通量测序结果表明,病桑叶在室内保存4个月后,桑里白粉病菌的重寄生真菌为刀孢蜡蚧菌。     

EF-1α基因作为苹果牛眼果腐病菌DNA条形码的评价研究

苹果牛眼果腐病菌(Neofabraea malacorticis、N. perennans、N. kienholzii和N. vagabunda)是我国重点关注的进境水果检疫性有害生物,相似的形态和生理特征使该类真菌的鉴定非常困难。本研究在EF-1α基因区域设计了一对通用引物(NS1/NS4),对不同地理来源的苹果牛眼果腐病菌及其近缘种菌株进行序列分析,考察EF-1α基因是否具备成为苹果牛眼果腐病菌条形码的特征与条件。结果显示, EF-1α基因在苹果牛眼果腐病菌上的PCR扩增和测序成功率均为100%,具有明显的种间和种内遗传变异间距(Barcoding Gap),系统树分析显示该基因片段对4种苹果牛眼果腐病菌及其近缘种具有很好的区分能力,因此认为EF-1α基因可作为苹果牛眼果腐病菌理想的DNA条形码候选片段。     

进境阿根廷大豆中苹果壳色单隔孢溃疡病菌的检测与鉴定

从阿根廷进境的一批大豆中分离到一株疑似苹果壳色单隔孢溃疡病菌菌株。该菌株在燕麦琼脂培养基(OA)上产生大量的分生孢子器及分生孢子;分生孢子长椭圆形,单胞,无色,继续培养3 d后变褐色,产生1隔膜,个别2隔膜;采用真菌通用引物(ITS4/ITS5)扩增和测序,该菌株与GenBank中已登录的苹果壳色单隔孢溃疡病菌16个菌株的ITS序列同源性最高,均为99%;菌株接种梨、苹果和大豆幼苗不同部位后,均发病。经形态特征鉴定、分子生物学检测及致病性测定,该菌株鉴定为苹果壳色单隔孢溃疡病菌。     

拟康宁木霉Tk1的分离鉴定、拮抗作用及其生物学特性

为了分离利用高效植物病害生物防治菌株，从广东药用植物金丝皇菊根部分离获得一株木霉菌株Tk1。经过形态观察、rDNA-ITS和EF-1α序列分析明确其为拟康宁木霉Trichoderma koningiopsis。用平板对峙培养法测定，该菌株对金丝皇菊枯萎病菌（尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum）和柑橘炭疽病菌（胶胞炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides）的抑制率分别为68.5%和77.1%，且在后期能完全覆盖或部分覆盖病原真菌。其无菌发酵液对金丝皇菊枯萎病菌的抑制率为45.55%。该菌株营养生长和产孢的最适碳源分别为乳糖和葡萄糖，最适氮源是酵母膏；在pH 4~11的培养基上均可生长、产孢，最适pH为7；12 h交替光照条件下菌丝的生长速度最快，全光照条件下产孢数量最大；该菌株的致死温度为73℃处理10 min。     

进境日本杜鹃中杜鹃花枯萎病菌的检疫鉴定

 自宁波口岸进境日本杜鹃花种苗上,采用常规平板分离法获得1株疑似杜鹃花枯萎病菌的菌株OV5。该菌株可在马铃薯葡萄糖琼脂和玉米粉琼脂培养基上生长,但在麦芽汁培养基上不生长。经培养可产生少量气生菌丝和大量小型分生孢子,小型分生孢子球状,直径 3.0 ~ 3.5 μm,在纺锤体状菌丝的尖端产生,易脱落,有时呈短链状。菌核卵圆形或饼形,明显杯状,凹面光滑,(1.5 ~ 6) mm × (2 ~ 8)mm × (0.5 ~ 1.5) mm,成熟时黑色。经rDNA ITS基因序列比对分析,发现该菌株与来源于CBS的2株杜鹃花枯萎病菌标准菌株的ITS基因序列同源性达99%以上,位于同一个发育分支。致病性测定结果表明,该菌株可侵染杜鹃花,引起典型杜鹃花枯萎病菌症状。上述研究结果表明,所截获病菌为杜鹃花枯萎病菌,这是我国首次截获该种检疫性真菌。     

禾谷镰孢菌γ-微管蛋白基因克隆及其与多菌灵抗药性关系分析

根据禾谷镰孢菌参考菌株NRRL31084(PH-1)的γ-微管蛋白基因核苷酸序列设计5对引物,采用PCR方法从禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)对多菌灵(MBC)的敏感菌株、室内诱导及田间多菌灵抗药性菌株中分段扩增测序,获得了γ-微管蛋白基因全序列.该基因全长1 868 bp,含有5个内元,编码一含493aa的多肽;与PH-1的γ-微管蛋白基因核苷酸序列同源性99%,存在10个差异核苷酸,与所编码的氨基酸序列同源性100%;与其它7种真菌的γ-微管蛋白基因所编码的氨基酸序列同源性为31%～72%.中国的2个敏感菌株和4个抗药菌株的γ-微管蛋白基因序列完全相同,认为多菌灵抗药性与该微管蛋白变异无关.     

进境哈萨克斯坦向日葵种子中向日葵黑茎病菌的鉴定

自进境哈萨克斯坦向日葵种子中,采用常规平板分离法获得1株疑似向日葵黑茎病菌Plenodomus lindquistii菌株LL4,通过生物学性状、ITS序列测定和比对分析及致病性测定等方法对其进行了鉴定。结果表明,该病菌在PDA平板上培养初期菌丝无色,分隔分枝多,后期菌丝褐色或深褐色,常膨大;分生孢子器暗褐色,分散或聚集,球形、近球形或不规则形,大小为71.2~361.8μm;分生孢子形态变化较大,无色,单孢,肾形至椭圆形,大小为3.6~8.2μm×2.2~3.7μm,常含有2个油球;培养期间未见有性阶段。基于ITS序列分析比对发现,菌株LL4与Gen Bank中多个向日葵黑茎病菌分离物序列同源性达99%以上,系统进化树显示其与其它向日葵黑茎病菌分离物聚在同一个分支。菌株LL4可侵染向日葵根茎部,造成典型黑茎病症状。表明分离获得的菌株LL4为向日葵黑茎病菌P.lindquistii。     

引起大豆苗期根腐病的大豆拟茎点种腐病菌鉴定

对10个引起大豆根腐病的真菌分离物进行鉴定。结果表明,这些分离物形态学上与大豆拟茎点种腐病菌相似。用ITS通用引物进行PCR扩增,该菌株与拟茎点种腐病菌MP4PL11PS(GenBank登录号HQ130441.1)同源性达98%。因此,确定该菌株为大豆拟茎点种腐病菌。     

洛阳牡丹新病害—柱枝孢叶斑病

为了明确河南省洛阳地区牡丹叶部一种新病害的病原种类,对采自田间的典型症状叶片进行了常规组织分离,对单孢菌株进行了形态鉴定、rDNA ITS序列分析及致病性测定.结果表明,病原菌在PDA培养基上菌落初期白色绒毛状,后期红褐色.分生孢子梗通常呈扫帚状,有2～3个分支,末端膨大呈泡囊状.分生孢子直棒状,两端钝圆,有0～1个隔膜,大小为(38.4～86.4)μm× (4.6～5.9)μm,平均60.1 μm×5.2 μm.离体叶片与活体植株接种结果表明,该菌均能侵染牡丹叶片并引起与田间相同的症状.据此将分离物鉴定为Cylindrocladium canadense,将该病害命名为牡丹柱枝孢叶斑病.     

江西瑞昌山药炭疽病菌的形态及分子鉴定

为了明确江西瑞昌山药炭疽病病原菌种类归属,本文从当地采集呈典型症状的炭疽病叶片进行了病原菌分离鉴定.通过组织分离获得8个在培养性状和分生孢子形态大小均一致且均具有致病性的分离株,8个分离株在PDA平板上菌落初为白色,后变为灰色至深灰色,菌落中央产生橘红色黏质分生孢子团.分生孢子无色,长椭圆形至纺锤形,单胞,大小为(15.6~18.0)μm×(3.6~6.0)μm.对其中之一的分离株YRRC-1进行rDNA-ITS区段扩增和序列测定,获得长度为536 bp的rDNA-ITS序列,该序列与胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)的对应序列同源性达100%.根据分离病菌的培养特征、形态大小和序列鉴定结果,认为瑞昌山药炭疽病菌属于胶孢炭疽菌(C. gloeosporioides).