多位点生物杀虫毒素BtA形成的HPLC分析

 基于多位点生物杀虫毒素理论和生物耦合技术，研制生物杀虫毒素BtA，为新生物农药的开发提供了一种新思路、新方法和新手段。将苏云金芽孢杆菌（B.t.）晶体进行酶解改造，形成带末端氨基的原毒素；将阿维菌素的羟基进行激活、衍生化，形成带羧基的阿维菌素衍生物（Abamectin-COONa）；再利用氨基-羧基偶联剂（EDC）进行两种生物毒素的生物耦合。利用反相液相色谱（HPLC）检测不同反应时间的BtA生物耦合体系，以确定生物耦合反应的发生；通过反应底物两两组合的分析比较，识别生物耦合产物BtA生成的色谱特征，分析生物耦合产物---多位点生物杀虫毒素BtA的产生过程。     

陕西小菜蛾对9种杀虫剂的抗药性监测

【目的】明确陕西关中地区小菜蛾田间种群对9种常用杀虫剂的抗药性现状,为抗性治理和田间有效防治小菜蛾提供依据。【方法】在室内采用生物测定法和区分剂量法,测定2012-2013年间陕西杨凌、宝鸡和渭南3个地区小菜蛾田间种群对阿维菌素、高效氯氰菊酯、丁醚脲、啶虫隆、溴虫腈、茚虫威、多杀菌素、Bt毒素Cry1Ac和氯虫苯甲酰胺9种常用杀虫剂的敏感性。【结果】陕西3个地区的小菜蛾田间种群对大部分供试药剂都产生了不同程度的抗性。宝鸡、渭南和杨凌种群均对高效氯氰菊酯产生了高-极高水平抗性,对阿维菌素产生了中等-高水平抗性,对溴虫腈和啶虫隆产生了低-中等水平抗性,对茚虫威、多杀菌素和氯虫苯甲酰胺的抗性水平相对较低,处于敏感-低水平抗性。对丁醚脲和Bt毒素的抗性各地差异较大,对丁醚脲的抗性,杨凌种群处于低-中等水平抗性,渭南种群处于中等水平抗性,宝鸡种群处于敏感性下降;对Bt毒素的抗性,宝鸡种群处于中等水平抗性,杨凌和渭南种群处于敏感性下降-低水平抗性。【结论】3个地区应停止使用已产生高水平抗性的高效氯氰菊酯和阿维菌素,减少已产生中等水平抗性药剂的使用次数,处于低水平抗性的杀虫剂可作为防治小菜蛾的主要药剂。在杀虫剂使用过程中应注意药剂的轮换使用,以延缓小菜蛾抗药性加剧。     

云南小菜蛾对阿维菌素的抗药性监测和药剂防治试验

抗药性监测结果表明：云南通海小菜蛾种群对阿维菌素的抗药性已增至46．1倍，昆明种群对阿维菌素的敏感性有所下降。对敌敌畏，各地种群仍有较高的敏感性，抗性不明显；对氯氰菊酯、灭多威则产生了数百倍的高度抗性。室内生测表明田间抗性小菜蛾对锐劲特、除尽和菜喜高度敏感。田间防治试验结果表明：阿维菌素对小菜蛾仍有较高的防治效果。     

害虫对转Bt基因作物的抗性及治理

转Bt基因作物可在植株体内表达来源于苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)的杀虫蛋白,在害虫控制中起着重要作用,但害虫也随之对Bt作物不可避免地产生抗性,逐渐威胁着Bt作物的可持续利用。了解Bt毒素的作用机理及害虫对Bt毒素的抗性机制将有助于制定行之有效的抗性治理策略,如高剂量/庇护区策略、多毒素策略、使用新的杀虫毒素和抗性监测等。这些策略或措施将有利于延缓害虫抗性,延长Bt作物的使用寿命,促进Bt作物的可持续利用。     

超强高科技杀虫剂——魔盾

产品特点本品是2006年度强力推出的。针对当前鳞翅目害虫小菜蛾抗性越来越强的特点，采用多位点偶合两种杀虫毒素，精心配制而成的双元复合杀虫剂。作用机理独特，具有触杀、胃毒作用。全面解除害虫抗性机制。阿维菌素的高渗透性，轻易解除害虫体壁保护屏障。能有效防治鳞翅目害虫。本品具有迅速、持效期长、毒性低、杀卵等特点，对十字花科蔬菜小菜蛾和菜青虫有很好的防治效果。     

新型生物农药--Bt杀虫剂

Bt即苏芸金杆菌的简称,Bt杀虫剂是利用Bt杀虫菌,经培养生产的一种微生物制剂.这种杀虫菌,在生长发育过程中产生芽孢并形成一种蛋白质毒素,在显微镜下观察,通常是不规则的菱形结晶,叫做伴孢晶体.当害虫蚕食了伴孢晶体和芽孢之后,在害虫的肠内碱性环境中,伴孢晶体溶解,释放出对鳞翅目幼虫有较强毒杀作用的毒素.     

一株对鳞翅目蔬菜害虫具有广谱高毒力的新Bt菌株

从河北省土壤分离出苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）MB-15菌株,利用室内生物活性测定的方法,与Bt标准菌株HD-1的杀虫毒力进行比较,结果发现该菌株胞晶混合液对棉铃虫(Helicoverpa armigera)、甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)、小菜蛾(Plutella xylostella)、斜纹夜蛾(Spodoptera litura)和菜青虫(Pieris rapae)等5种鳞翅目蔬菜害虫的毒力均高于标准菌株Bt HD-1胞晶混合液。对发酵液各组分活性的分析发现,该菌株的上清液对胞晶混合物的杀虫活性有明显的增效作用。光学显微镜下观察该菌株伴胞晶体为菱形,SDS-PAGE分析显示其伴胞晶体主要由130.0 kDa和65.0 kDa 两种晶体蛋白组成。利用PCR-RFLP对其杀虫基因型进行鉴定,结果表明该菌株含有cry1Ac、cry2Aa、cry1I和vip3Aa基因。推断该菌株是一株对鳞翅目蔬菜害虫的防治具有潜在的商业开发价值的Bt野生株。     

一株对鳞翅目蔬菜害虫具有广谱高毒力的新Bt菌株

从河北省土壤分离出苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)MB-15菌株,利用室内生物活性测定的方法,与Bt标准菌株HD-1的杀虫毒力进行比较,结果发现该菌株胞晶混合液对棉铃虫(Helicoverpaarmigera)、甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)、小菜蛾(Plutella xylostella)、斜纹夜蛾(Spodoptera litura)和菜青虫(Pieris rapae)等5种鳞翅目蔬菜害虫的毒力均高于标准菌株Bt HD-1胞晶混合液。对发酵液各组分活性的分析发现,该菌株的上清液对胞晶混合物的杀虫活性有明显的增效作用。光学显微镜下观察该菌株伴胞晶体为菱形,SDS-PAGE分析显示其伴胞晶体主要由130.0 kDa和65.0 kDa两种晶体蛋白组成。利用PCR-RFLP对其杀虫基因型进行鉴定,结果表明该菌株含有cry1Ac、cry2Aa、cry1I和vip3Aa基因。推断该菌株是一株对鳞翅目蔬菜害虫的防治具有潜在的商业开发价值的Bt野生株。     

广东小菜蛾对阿维菌素的抗性研究

广东省供港菜场小菜蛾对阿维菌素的抗性有逐年上升趋势，1992年抗性为2倍，1994年为12倍，1996年达20倍，广州内陆菜区与供港菜场1992和1999年小菜蛾对几种蔬菜常用药剂的抗性对比表明，2个菜区小菜蛾对阿维菌素，Bt制剂及昆虫生长调节剂定虫隆的抗性均有较大幅度地提高，而供港菜场小菜蛾的抗性更强，对敌敌畏，灭多威，氰戊菊酯及杀螟丹等有机化学农药的抗性，1992年1999年则差别不大，象氰戊菊酯这样近年较少使用的药剂，抗性有减弱的迹象，抗Bt品系小菜蛾对阿维菌素无交互抗性，对阿维菌敏感的小菜蛾在阿维菌素的选择压力下亦会产生抗性，连续选育20代，抗性倍达11．55倍，用阿维菌素选育的抗性品系对定虫隆产生了明显的抗性，说明它们之间存在交互抗性。     

小菜蛾对阿维菌素的抗性风险评估及交互抗性的室内测定

在室内用阿维菌素对小菜蛾进行抗性选育,结果表明：小菜蛾对阿维菌素的抗性发展先慢后快,经过20代14次选育,与敏感种群相比,抗性指数为20.92倍。应用域性状分析法,小菜蛾对阿维菌素的抗性现实遗传力为0.1303,在致死率为50%～99%的选择压力下,预计小菜蛾对阿维菌素抗性增长10倍,需要2.4～15.9代。这表明小菜蛾对阿维菌素产生高水平抗性的风险很大。交互抗性测定结果表明,阿维菌素抗性小菜蛾种群对甲维盐具有明显的交互抗性,抗性指数为8.85倍;对多杀菌素、茚虫威、氟虫腈和溴虫腈类药剂无交互抗性或交互抗性不明显。     

小菜蛾对辛硫磷的抗性选育及其乙酰胆碱酯酶和羧酸酯酶活力变化

在室内模拟田间药剂的选择压力,用辛硫磷对小菜蛾（Plutella xylostella）逐代处理,以选育其抗性种群,并测定乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase,AChE）和羧酸酯酶（carboxylesterase,CarE）的活性变化。选育至12代,对辛硫磷抗性增长到4.524倍。生化分析表明,抗性品系AChE和CarE活性均显著高于敏感品系。在抗性选育过程中,小菜蛾AChE酶活性增长迅速,其比活力由F0的0.035μmol/L·mg·min上升为F12的0.209μmol/L·mg·min;小菜蛾不同选育世代CarE酶活性差异显著,F12比活力增长到F0的12.944倍。     

小菜蛾对苏云金芽胞杆菌的抗药性研究

采用人工饲料感染法监测了我国不同地区小菜蛾田间种群对中国标准品Ｃｓ３ａｂ－１９９１的敏感性。结果表明：广东省深圳、东莞、广州的田间小菜蛾对苏云金芽胞杆菌产生了明显的抗性,最高抗性倍数分别为８．９,６．５,２．１。深圳的抗性小菜蛾种群在无毒条件下饲养,抗性会自然减退,经５代之后抗性消失。     

小菜蛾对阿维菌素的抗药性研究进展

小菜蛾是十字花科蔬菜的重要害虫,阿维菌素是目前防治这一害虫的当家产品。笔者对小菜蛾抗阿维菌素品系的选育、抗性监测、交互抗性、抗性遗传、抗性机理等方面的研究进展进行了综述。     

江苏部分地区小菜蛾对常规农药的抗药性

对江苏省南京、苏州、连云港和淮安等地区采集的小菜蛾进行室内抗药性测定，发现小菜蛾对溴氰菊酯、氯氰菊酯和氰戊菊酯的抗药性为78～324倍；对敌敌畏抗药性为10倍；对灭多威抗药性为25倍左右；对杀虫单、氟铃脲、宝路、抑太宝和锐劲特的敏感性下降。田间试验结果表明，菊酯类农药、敌敌畏和灭多威已失去防治小菜蛾的实际意义；氟铃脲和灭虫灵对小菜蛾有优异的防效；将杀虫单配成微乳剂可提高对小菜蛾的防效。     

田间小菜蛾对9种杀虫剂的抗药性测定

在室内采用浸叶法测定湖南3个蔬菜产区(长沙市长沙县、株洲市茶陵县和永州市祁阳县)的田间小菜蛾对9种药剂的抗药性。试验结果表明,小菜蛾对高效氯氰菊酯抗性达到极高水,对定虫隆、阿维菌素和茚虫威抗性属于高抗水平,对溴虫腈,甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和多杀菌素属于中抗水平,对氯虫苯甲酰胺和苏云金杆菌相对敏感。因此,这3个地区的小菜蛾防治应该减少溴虫腈、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和多杀菌素的使用,交替使用氯虫苯甲酰胺和苏云金杆菌,停止阿维菌素、茚虫威、高效氯氟氰菊酯的使用,以便延缓抗药性的产生与发展。     

生态控制配套措施对小菜蛾种群的控制研究

应用害虫种群系统的理论和方法,以苏云金杆菌(Bt)、赤眼蜂(Techogrammer confursam)、性诱剂为基本措施,辅以小菜蛾颗粒体病毒(Plutella xyloste UaGranulosisvirus,PxGV)、爱比菌素(Abamectin)和印楝素等非化学杀虫剂,组配成9种生态控制配套措施,评价其对小菜蛾的控制作用。其中7套措施可将小菜蛾种群趋势指数(Ⅰ)持续控制在1．0以下,不同地区可合理选择使用。     

美洲斑潜蝇对功夫抗性和敏感品系的选育

用功夫对美洲斑潜蝇3龄幼虫进行抗性品系（Cy-R）筛选，经50代选育，抗性指数提高到49．14倍，筛选前的LC50值为0.0152g/L，筛选后的LC50值为0.2506g/L。敏感品系选育试验表明，经10代筛选，抗性指数由筛选前的5．00倍降低至1．00倍。对功夫产生抗性的品系对灭扫利和速灭杀丁有交互抗性，而对杀虫单，毒死蜱，害极灭无交互抗性，其抗性倍数分别为6．30倍，4．07倍，1．41倍，1．35倍和1．05倍。     

Susceptibility of Ostrinia furnacalis to Bacillus thuringiensis and Bt Corn Under Long-Term Laboratory Selection

The susceptibility of the Asian corn borer, Ostrinia furnacalis to Bacillus thuringiensis (Bt) formulation and Bt corn was evaluated using insect bioassays for 6 years. Four strains of O. furnacalis were developed by laboratory selection from the laboratory strain reared on a non-agar semi-artificial diet. The RR-1 strain was exposed to a commercial formulation of B. thuringiensis subsp. kurstaki (Btk) incorporated into the artificial diet, the RR-2 strain was exposed to Bt corn (MON810)tissue incorporated into the diet, and the SS-1 and SS-2 strains were reared on the standard diet with or without non-Bt corn tissues material. Decreasing susceptibility of O. furnacalis to Bt and to Bt corn were found in each selected strain although the ED50 and larval weight fluctuated from generation to generation. The resistance of Bt-exposed strain (RR-1)to Btk increased 48-fold by generation 39; the Bt corn-exposed strain (RR-2) increased its resistance 37-fold to Btk by generation 24. No larvae of SS-1 survived when they were exposed to the leaves of Bt corn, Bt1 1 and MON810. However,2-54% of the RR-1 (generation 46) and RR-2 (generation 20) larvae survived a 3 day-exposure to the leaves of Bt1 1 and MON810. The survival of both selected strains on Bt corn silk increased by 10-69%, and the larval weights after many generations selection were increased by 15-22% compared with the unselected susceptible strain. The young larvae were much more susceptible to Bt than older larvae. The highest mortality occurred when the larvae were exposed to Bt at the neonate stage. All of the results suggested that ACB could not only develop resistance to Bt preparation but also to Bt corn. Bt had significant effects on the growth and development of Asian corn borer than on the larval mortality. In order to maintain the long-term effectiveness of Bt pesticide and Bt corn, the resistance management should pay much attention to the larvae that may have opportunities to grow and developed on non-Bt corn or alternate hosts before they attack the Bt corn plants and the survival of larvae after Bt application.     

几种杀虫剂对十字花科蔬菜芥蓝小菜蛾的防效试验

应用7种药剂不同浓度防治芥蓝小菜蛾(Plutella xylostella Linnaeus)。结果表明:0.5%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐乳油防效最好,速效性和持效性都较好;1.8%阿维菌素乳油、0.3%印楝素乳油、10%除尽悬浮剂、5%氟铃脲乳油和5%氟虫腈悬浮剂等药剂的防治效果也较好,持效期7d左右;生产上防治时可轮换或混合使用。