安石榴苷对热应激后IEC-6细胞HSPs表达及凋亡影响

[目的]本试验旨在研究安石榴苷对热应激大鼠肠上皮细胞(IEC-6)损伤的预防作用.[方法]通过MTT法检测细胞活力,倒置显微镜观察细胞形态学变化;RT-PCR检测HSP27、HSP70、HSP90的mRNA变化;AO/EB检测细胞凋亡.[结果]筛选热应激最佳时间为42℃6h,安石榴苷预处理细胞低中高浓度分别为2.5、5、10 μmol/L;药物预处理细胞后细胞损伤及凋亡程度减轻,能够显著抑制HSP27、HSP70、HSP90的高表达.[结论]安石榴苷对IEC-6细胞热应激损伤具有显著预防作用,HSP27、HSP70、HSP90参与安石榴苷对IEC-6细胞热损伤预防作用的调控.     

LPS诱导奶牛子宫内膜上皮细胞氧化损伤模型的建立

[目的]采用脂多糖(LPS)作为刺激源,建立奶牛子宫内膜上皮细胞(BEEC)氧化损伤模型.[方法]体外培养BEEC并进行细胞鉴定,用不同浓度的LPS刺激细胞,在不同时间点用CCK-8法测定细胞存活率,以确定BEEC氧化损伤模型条件.倒置显微镜下观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)含量,比色法检测细胞中的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT).[结果]与空白对照组相比,当LPS浓度为80μg/mL,作用时间为12 h时,造成细胞损伤,其细胞凋亡率、ROS产生量和MDA含量明显高于对照组,SOD和CAT活性显著低于对照组.[结论]建立奶牛子宫内膜上皮细胞氧化损伤模型的条件为LPS作用浓度80 μg/mL,作用时间12 h.     

黑木耳多糖对体外高糖培养乳鼠心肌细胞的保护作用

[目的]探讨黑木耳多糖(Polysaccharides From Auricularia Auricula,PFAA)对体外高糖培养乳鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及其机制。[方法]将Wistar乳鼠原代细胞随机分为4组,即空白对照组;高糖组;0.4 mg/mL PFAA组;0.8 mg/mL PFAA组。用荧光显微镜测定各组细胞凋亡情况,RT-PCR法检测bcl-2、caspase-3基因表达量的变化。[结果]经PFAA干预后,凋亡细胞明显减少,bcl-2表达增加,caspase-3表达减少。[结论]PFAA抑制体外高糖培养的乳鼠心肌的凋亡,其机制可能与抑制caspase-3、激活bcl-2表达有关。     

昆仑雪菊对结肠癌细胞株体外抗肿瘤作用研究

[目的]探讨昆仑雪菊中总黄酮粗提取物、纯化物及总多糖对人结肠癌细胞株(HCT116细胞、CACO-2细胞)增殖的抑制作用.[方法]体外培养结肠癌细胞,采用不同浓度昆仑雪菊中总黄酮粗提取物、纯化物及总多糖对其进行干预,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪测细胞凋亡率.[结果] MTT法检测昆仑雪菊中总黄酮粗提取物、纯化物及总多糖对结肠癌细胞株的抑制作用具有浓度和时间依赖性;流式细胞仪检测昆仑雪菊总黄酮纯化物能增强结肠癌细胞株的凋亡率,且剂量与凋亡率呈正相关.[结论]昆仑雪菊总黄酮纯化物抗肿瘤活性优于总黄酮粗提物及总多糖,且对结肠癌细胞株的增殖有明显抑制作用,其作用机制可能与增强细胞凋亡有关.     

绿茶多酚诱导肝癌细胞凋亡时Caspase-3蛋白活性与mRNA的变化

[目的]研究绿茶多酚(EGCG)诱导肝癌细胞Hep-G2凋亡过程中半胱天冬酶-3(Caspase-3)蛋白活性与mRNA的变化。[方法]100 mg/L的EGCG处理Hep-G2细胞48 h,DAPI染色观察细胞形态学,用MTT检测EGCG对Hep-G2细胞生长的影响,流式细胞技术Annexin V-FITC PI法检测不同浓度EGCG诱导细胞的凋亡率,分光光度法检测Caspase-3的活性,用半定量RT-PCR法检测Caspase-3的mRNA变化。[结果]100 mg/L的EGCG作用Hep-G2细胞48 h后,荧光显微镜观察到细胞出现核碎裂和凋亡小体;MTT法检测到EGCG对肝癌细胞Hep-G2的生长均有显著抑制作用,呈浓度依赖性;Annexin V-FITC PI法检测到不同浓度的EGCG作用与肝癌细胞Hep-G2后,凋亡率较对照组明显升高,并随诱导浓度的增加而增加;不同浓度的EGCG处理组和不同时间EGCG处理组的Caspase-3活性和mRNA表达量均比对照组明显升高。[结论]Caspase-3蛋白活性与mRNA上调是EGCG诱导肝癌细胞凋亡的的重要原因和机制。     

洋葱鳞茎内表皮细胞凋亡诱导及观察

[目的]探讨氯化铝(AlCl3)作为凋亡诱导剂作用在洋葱鳞茎内表皮细胞上的效果.[方法]使用不同浓度的AlCl3作为离子胁迫诱导剂,对洋葱鳞茎内表皮细胞进行不同时间的处理,最后经DAPI荧光染色观察细胞形态变化.[结果]0.1和0.5 mol/L AlCl3处理洋葱鳞茎内表皮细胞2 h就可以诱导出细胞凋亡现象,而且随着处理时间的延长,到10 h时,细胞核凋亡在形态学上的变化和出现凋亡小体的现象更加明显.[结论]为AlCl3离子胁迫剂能使植物细胞线粒体的结构和酶活力改变并且释放的促凋亡因子的研究提供了相应的参考证据.     

酸枣仁黄酮对糖尿病大鼠肾损伤的保护作用

[目的]为了探讨酸枣仁黄酮对糖尿病大鼠肾损伤的保护作用及机制。[方法]采用腹腔注射链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型,连续灌胃给予酸枣仁黄酮28 d,收集大鼠尿液、血液及组织标本,检测大鼠体重、空腹血糖及肾功能、肾皮质中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性;采用原位末端标记法(TUNEL),检测肾脏细胞凋亡。[结果]酸枣仁黄酮连续干预28 d后,与糖尿病模型组相比,大鼠体重及空腹血糖无明显变化(P>0.05),但肾功能指标明显改善,肾皮质MDA含量显著下降(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.05);肾脏凋亡细胞数显著减少(P<0.05,P<0.01)。[结论]糖尿病可引起肾脏高水平的氧化应激和过度的细胞凋亡。酸枣仁黄酮可通过抑制肾组织氧化应激及肾细胞凋亡而发挥肾保护作用。     

三氧化二砷诱导大鼠睾丸生精细胞凋亡的研究

[目的]观察不同剂量的三氧化二砷对成年大鼠生精细胞凋亡的影响。[方法]40只健康雄性SD大鼠随机分成4组,分别为0.375、0.750、1.500 mg/kg 3个染毒组和对照组,灌胃法连续给药16周后对各组大鼠进行睾丸脏器系数、精子头计数,并计算每日精子生成量。采用甲基绿—派诺宁染色法和TUNEL法检测大鼠生精细胞凋亡情况。[结果]中剂量组(0.750 mg/kg)和高剂量组(1.500mg/kg)睾丸精子头计数和DSP均低于对照组;与对照组相比,中剂量组和高剂量组生精细胞凋亡指数(AI)均显著升高(P<0.01);生精细胞凋亡指数与每日精子生成量呈负相关(r=-0.563,P<0.01)。[结论]一定剂量的As2O3可通过促进生精细胞凋亡而导致精子生成量的减少,产生生殖毒性。     

灭多威诱导MDEC-07114细胞凋亡的初探

目的:探讨灭多威对家蝇胚胎细胞系MDEC-07114细胞凋亡的影响。方法:1、实验分组:不同浓度灭多威组(1 mg/mL组、2 mg/mL组、4 mg/mL组、8 mg/mL组),同时设正常组、1%丙酮组;2、HE染色法观察MDEC-07114细胞凋亡形态,并测定细胞凋亡指数;3、TUNEL检测MDEC-07114细胞凋亡。结果:1、不同浓度灭多威作用于MDEC-07114后,从2 mg/mL组开始见典型凋亡细胞,细胞凋亡指数增加,且随浓度的递增而逐渐升高;2、TUNEL检测:2 mg/mL组出现明显的绿色荧光,4 mg/mL组有所增加,8 mg/mL组荧光最强。结论:灭多威可诱导MDEC-07114细胞凋亡。     

γ-L-谷氨酰-S-烯丙基-L-半胱氨酸对肝星状细胞线粒体功能的影响

[目的]通过研究γ-L-谷氨酰-S-烯丙基-L-半胱氨酸(GSAC)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)线粒体功能的影响,探讨GSAC对肝纤维化的抑制作用.[方法]利用微板法测定GSAC对培养24h细胞线粒体代谢甲基噻唑基四唑(MTT)的影响,以罗丹明123作为染料,通过流式细胞仪检测线粒体膜电位.[结果] GSAC具有抑制HSC-T6线粒体代谢MTT的作用,IC5o值为0.835 mg/ml;GSAC引起线粒体膜电位崩溃,所有GSAC处理组(0.2、0.4与0.8 mg/ml)罗丹明123荧光强度极显著高于对照组.[结论]GSAC可破坏HSC-T6细胞线粒体功能,提示其对肝纤维化具有抑制作用.