应用Dot-ELISA检测鸡毒支原体血清抗体

应用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测鸡毒支原体血清抗体＠郭建华＠陈明勇＠陈德威￥中国农业大学实验动物研究所应用Ｄｏｔ┐ＥＬＩＳＡ检测鸡毒支原体血清抗体郭建华＊陈明勇陈德威（中国农业大学实验动物研究所,北京海淀１０００９４）鸡毒支原体（ＭＧ）为慢性呼吸道病（ＣＲＤ）的...     

应用PPA—ELISA检测鸡毒支原体血清抗体

应用ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ检测鸡毒支原体血清抗体,其结果与血凝抑制试验和ＥＬＩＳＡ符合率为１００％,是一种特异,敏感,简单,快速的检测方法。     

应用PCR检测鸡蛋卵黄膜中鸡毒支原体的研究

鸡毒支原体（ＭＧ）是鸡慢性呼吸道病（ＣＲＤ）的病原,可引起呼吸罗音、咳嗽、鼻漏,在火鸡常引起窦炎。其可引起蛋鸡产蛋率下降,肉鸡品质下降、废弃率增高,是养禽业中危害严重的传统病之一。尤其当其与大肠杆菌、鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性喉气管炎病毒等并发时,造成的经济损失更严重。ＭＧ感染可以导致种鸡受精率降低［１］和经卵垂直传播［２,３,４］。从而使孵化率降低和后代成为ＭＧ阳性鸡群,这是该病原感染率非常普遍的重要原因,同时也给该病原的控制和净化带来了困难。因此确诊蛋鸡是否正在经卵传递ＭＧ…     

鸡传染性鼻炎ＰＣＲ和阻断ＥＬＩＳＡ试剂盒的研制与应用

用鸡传染性鼻炎ＰＣＲ试剂盒可直接检测病料中的病的ＤＮＡ、可测出１pg的DNA和１０^2-10^3个细菌，这可疑病料的检出率是传统的细菌分离方法的２－３倍，可重复性好，特异性为１００％，在４℃可保存１２个月，在－２０℃可保存１５个月。阻断ＥＬＩＳＡ试剂盒可检测副鸡嗜血杆菌型特异性抗体，其种特异性为１００％，重复性好，试剂盒在３７℃可保存７d以上，４℃可保存１０个月，－２０℃可保存１年以上，用两个诊断试剂盒检验１５５份可疑病料、２１９１份血清，ＰＣＲ的阳性率为３２．３％；Ａ型抗体阳率为２７．４％，Ｃ型抗体阳性率为１１．５％。     

鸡毒支原体烯醇化酶单克隆抗体研制及黏附阻断

通过对鸡毒支原体烯醇化酶的克隆和原核表达,利用表达产物免疫小鼠,制备单克隆抗体,以超声波裂解的MG全菌作为筛选抗原,结果获得了6株特异性单抗,分别命名为：1A4、2D7、2E4、2F4、384和3D8。经间接ELISA、免疫荧光试验及Western blot检测发现：1A4具有荧光效价和高滴度的ELISA效价,但无免疫印迹效价;而其他5株单抗,免疫印迹呈阳性,但无表面染色的活细胞免疫荧光。在所有6株单抗中,仅1A4单抗有MG细胞黏附抑制作用,可导致MG的黏附率降低34．40％,而且1A4与其他5种单抗混合后,则黏附率可下降57．69％。这些抗体的制备将为烯醇化酶生物学活性研究奠定基础。     

应用PCR-RFLP分析鉴定鸡毒支原体

本试验合成１对引物,对鸡毒支原体（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｇａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍ,ＭＧ）、滑液支原体（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｓｙｎｏｖｉａｅ,ＭＳ）１６ＳｒＲＮＡ和２３ＳｒＲＮＡ基因的间隔区序列进行ＰＣＲ扩增,然后分别用ＲｓａⅠ、ＤｒａⅠ对上述扩增产物限制性酶,所获得的片段进行琼脂糖凝胶电泳。     

鸡毒支原体PCR检测方法的建立

目前临床上常见的支原体主要为鸡毒支原体（MG）和鸡滑液囊支原体（MS）。由于MG和MS经常发生混合感染,给临床诊断和治疗带来极大的困难。为了快速诊断MG,特别是致病性鸡毒支原体,本研究针对MG的pvpA基因设计特异性引物,通过优化反应条件,进行灵敏性试验、特异性试验和重复性试验,建立快速高效检测MG的PCR方法。结果表明,该检测技术具有较好的灵敏性、特异性强且CV<3%,具有很好的符合性。     

应用PCR技术对鸡毒支原体感染鸡病原的检测

应用已建立的检测MG和MS的PCR方法，对人工接种鸡毒支原体后2－20天的SPF鸡气管棉拭样品和气管、肺、肝、脾、胸肌、腿肌等器官和组织进行了检测；对现场采集的样品同样作PCR检测。结果表明，上述人工样品均检测到病原，以气管棉拭样品检出量多；现场样品PCR阳性检出率为10．28％，分离培养的阳性率为2．8％，阳性符合率为100％。     

上海某地区鸡毒支原体血清学调查

本研究应用酶联免疫吸附试验连续2年对上海某地区2018和2019年养殖鸡进行鸡毒支原体血清学调查,样品采集覆盖大部分乡镇街道。结果显示,各区域均受鸡毒支原体侵害,且部分地域呈高阳性率。提示养鸡业相关人员需重视,并将鸡毒支原体免疫计划列入日常管理工作中。     

间接血凝抑制试验检测血清和卵黄中鸡毒支原体抗体的研究

将13只正处于产蛋期的试验鸡在接种疫苗前后分别采血、分离血清；收集鸡蛋，分离蛋黄，并分别用16％NaCl、8％柠檬酸纳和氯仿处理后，检测鸡毒支原体(MG)间接血凝抑制(HI)抗体。结果表明：接种疫苗前的血清和16％NaCl、8％柠檬酸钠和氯仿处理卵黄抗体平均效价分别为4.7，4．4，4．1和4.2 log2；第一次接种疫苗后的血清和16％NaCl、8％柠檬酸纳和氯仿处理卵黄抗体平均效价分别为7．4、6．7、7．1、6．9log2；第二次接种疫苗后第1次采集的血清和16％NaCl、8％柠檬酸钠、氯仿处理卵黄抗体平均效价分别为10．4、9．6、10．1、9．710g2，第2次采集的血清和16％NaCl、8％柠檬酸钠、氯仿处理卵黄抗体平均效价分别为7．9、7.1、7．6和7．4log2。8％柠檬酸钠处理后的卵黄抗体效价最高，与血清抗体效价最接近。血清HI抗体效价与卵黄HI抗体效价具有良好的一致性和相关性，用卵黄可以代替血清进行HI试验。     

应用单克隆抗体酶联免疫斑点试验检测抗传染性喉气管炎抗体

本文提出以硝酸纤维膜作为固相载体,辣根过氧化物酶标记的抗传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,邻苯二胺为底物,检测ＩＬＴＶ抗体的免疫斑点试验方法（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。该方法较常规方法敏感,特异、省时。该方法的建立为鸡群疫病监测,免疫鸡群抗体水平的检测提供了新的可靠方法。     

卵黄抗体在病毒性疾病防治中的应用

病毒性传染病一直以来对动物与人的危害极大,而常见抗病毒药物对细胞有较大毒性,且病毒容易发生变异,因此给抗病毒药物的研制增加了难度。卵黄抗体因其获取方便、获得量大、生产工艺相对简单、可进行规模化生产、性质稳定,因此广泛应用于动物与人的病毒性疫病防治中。论文阐述了卵黄抗体的产生、结构、优势、作用机理等内容,并对卵黄抗体在动物与人病毒性疾病防治中的应用和已商品化的产品现状进行了综述,汇总研究之不足,若卵黄抗体能得到更深入的研究,克服不足,在今后的应用过程中将具有更加广阔的前景。     

鸡蛋粉在猪生产中的应用研究进展

鸡蛋粉是一种良好的蛋白质资源,富含免疫活性物质,在减少动物腹泻、增强机体免疫力方面具有重要功效。本文综述了鸡蛋粉的生产工艺、营养价值以及鸡蛋粉和特异性卵黄抗体在猪生产中的应用现状。     

基因A型和C型鸭甲型肝炎病毒卵黄抗体的研制及应用

旨在研制基因A型和C型鸭甲型肝炎病毒(DHAV)单价及二价高免卵黄抗体,以满足实际生产中基因A型和C型DHAV单独或混合感染防控的需要。采用基因A型和C型DHAV强毒株作为抗原制备单价和二价油乳剂灭活疫苗免疫接种高产蛋鸡,制备了高效价的基因A型和C型DHAV单价及二价高免卵黄抗体,卵黄抗体鸭胚中和效价在1∶204与1∶281之间,单价及二价卵黄抗体防治试验证明,所制备的卵黄抗体防治效果良好。     

节瘤拟杆菌K-凝集试验方法的建立

根据节瘤拟杆菌(D.nodosus)特异的表面抗原———K抗原具有凝集反应的特性,建立了检测抗节瘤拟杆菌抗体的方法———K-凝集试验方法。节瘤拟杆菌液体培养物接种兔,制备节瘤拟杆菌阳性血清;福尔马林灭活肉汤培养物制备抗原,结果表明,该方法使用方便、特异性强。     

鸡蛋黄碱性磷酸酶的性质

对鸡蛋黄碱性磷酸酶的热稳定性和抑制特性进行了测定，结果表明，蛋黄碱性磷酸酶对热不稳定，５６℃作用１５ｍｉｎ其活性丧失５５％，易受尿素，左旋咪唑和ＥＤＴＡ抑制，不易受Ｌ－苯丙氨酸和Ｌ－色氨酸抑制。     

大肠杆菌病纯化冻干卵黄抗体对大肠杆菌感染新生仔猪的治疗试验及药理机制研究

用仔猪大肠杆菌病纯化冻干卵黄抗体处理ETECK88、K99和987P菌株感染新生仔猪表明:本药剂中的IgY与ETEC菌毛相结合,改变了ETEC的细胞膜结构,阻止了ETEC在仔猪小肠内的定殖,妨碍了ETEC的正常代谢,最终实现了对仔猪大肠杆菌病的防治目的。     

不同饲养方式对鸭蛋成分和蛋黄色泽影响的研究

采用单因素试验设计,研究圈养、网上平养和放养3种不同饲养方式对鸭蛋成分和蛋黄色泽的影响。常规方法检测鸭蛋成分。结果表明：饲养方式对蛋清干物质含量有显著的影响（P〈0.05）,放养鸭的蛋清干物质含量显著低于圈养和网上平养（P〈0.05）,圈养和网上平养之间差异不显著;饲养方式对蛋黄干物质含量影响不显著（P〉0.05）,但放养组最低,圈养组稍高,网上平养组最高;饲养方式对蛋清氨基酸的绝对含量有显著的影响（P〈0.05）,放养鸭蛋的蛋清氨基酸总量低于圈养鸭和网上平养鸭（P〈0.05）,圈养鸭和网上平养鸭差异不显著;但饲养方式对蛋清各种氨基酸占氨基酸总量的比值影响较小;饲养方式对蛋黄色泽、蛋黄干物质脂肪含量和鸭蛋风味有显著的影响（P〈0.05）,放养鸭的蛋黄色泽等级和蛋黄干物质中脂肪含量显著高于圈养鸭和网上平养鸭（P〈0.05）,鸭蛋风味也优于圈养鸭和网上平养鸭;圈养和网上平养之间差异不显著;综合评价3种饲养方式的蛋鸭所产的鸭蛋,总的营养物质含量相差不大,但放养鸭蛋口感好,味道美。     

兔自家大肠杆菌高免卵黄抗体的研制与应用

采用灭活菌苗进行基础免疫、加强免疫,灭活油乳剂疫苗进行超强化免疫和维持免疫程序。通过微量凝集试验方法,研究了鸡抗兔大肠杆菌高免卵黄抗体的消长规律及临床应用。结果表明,超强化免疫5周后,抗体效价达到高峰,9周后抗体效价逐渐下降。同一剂量卵黄抗体效价达26时,肌注2 mL/kg体重,连用3 d对兔大肠杆菌感染的治愈率达90%。成品卵黄抗体的效价应达到26、安全性检验、无菌检验阴性方可用于临床治疗。卵黄抗体在血清中维持高浓度可持续1周,然后逐渐下降。在冷冻环境下可保存1年,其抗体效价保持在有效水平。与头孢噻肟进行的对比田间治疗试验,卵黄抗体的治愈率显著高于头孢噻肟。