利用稻瘟病菌粗毒素筛选水稻抗病突变体

从江苏省稻瘟病不同优势小种菌株的液体培养液中提取稻瘟病菌粗毒素,以本地区较感病中粳稻新品系L119为材料,研究不同稀释浓度粗毒素对水稻种子萌发、成熟胚愈伤组织诱导及分化的影响;在诱导和分化培养基中分别加入适宜的稻瘟病菌粗毒素进行胁迫培养,以获得抗病性有所增强的变异植株。结果表明,种子萌发后胚芽的长度随着粗毒素浓度的提高而降低,在浓度达到1 m L/10 m L时种子萌发完全受到抑制。种胚愈伤组织的生长随着粗毒素浓度的增加受抑制程度逐渐增强,在浓度为25%时无愈伤产生;愈伤组织在分化时对粗毒素较敏感,在粗毒素浓度为5%时分化成苗数急剧下降。对诱导、分化2个阶段双重粗毒素胁迫培养的组培再生植株进行田间抗病性鉴定,抗病性较对照品种有所提高,说明利用稻瘟病菌粗毒素对水稻成熟胚组织的胁迫培养可以诱导愈伤组织的抗病性变异。     

稻瘟病菌及其粗毒素对水稻愈伤组织毒害的初探

稻瘟病菌用毒素对水稻愈伤组织具有毒害作用，表现为降低水稻愈伤组织的诱导率及生存率．稻瘟病菌孢子能在不同抗性的水稻愈伤组织上萌发定殖并侵染细胞．不同基因型水稻品种，不论抗性如何，其愈伤组织与稻瘟病菌都呈亲和性，没有专化性表现．在愈伤组织水平上以稻瘟病菌粗毒素为选择压筛选抗病个体，可能无效．     

粳稻抗稻瘟病细胞突变体筛选技术体系的建立

选取较感病主栽品种“辽粳454”作为研究材料,以稻瘟病病菌粗毒素为选择压,进行抗稻瘟病细胞突变体筛选,以期获得优良粳稻品种的抗病系。试验结果表明:经粗毒素处理后,对粳稻种的胚根、胚芽、愈伤组织成活率及愈伤组织分化率都有一定的抑制作用。但愈伤组织在生植株的抗性显著提高。     

稻瘟病菌粗毒素的制备及其致病力的测定

同一条件下制备的稻瘟病菌粗毒素对水稻种子萌芽，种子胚芽，胚根的伸长都有明显的抑制作用并随粗毒素浓度的升高，抑制率增大，对水稻愈伤组织也有明显的毒害作用。     

禾谷镰刀菌粗毒素对小麦幼胚培养特性及再生R1、R2代植株的抗赤霉病性影响

研究了禾谷镰刀菌粗毒素对小麦幼胚培养特性的影响和再生R1、R2代植株的抗赤霉病性变异,结果表明,粗毒素对3个不同基因型幼胚的愈伤组织诱导、胚芽萌发及胚性愈伤组织形成和绿苗分化的影响有相同的趋势。①毒素浓度为6.0g/L时,愈伤组织生长受明显地抑制,但胚芽萌发生长受到促进,低于此浓度时,毒素对愈伤组织的生长有一定的促进作用;②毒素对胚性愈伤组织形成和苗分化均有较大的抑制作用,其中对前者的抑制作用最强;③适宜的粗毒素筛选浓度为1.5￣4.5g/L,在这一浓度范围内对愈伤组织形成无影响,而对胚性愈伤组织和苗分化有明显抑制,但又能使其保持有一定的分化能力。④经毒素筛选的抗耐毒素细胞系再生R1代植株中,抗病穗的比例明显提高,R2代再生植株的抗赤霉病性分离,并趋向于感病方的分离。     

稻曲病菌粗毒素的初步研究

稻曲病菌在生长过程中能产生有毒物质，本文研究了稻曲病菌粗毒素的制备及生物测定方法。结果表明，以PD为液体培养基振荡培养21d后经离心、过滤、高压灭菌制得的粗毒素对水稻种子的萌发、幼苗生长及愈伤组织的生长具有毒害作用。其可以作为抗性突变体筛选的选择压力进行抗稻曲病育种。     

水稻抗稻瘟病变异体离体筛选及在育种中应用

以水稻成熟胚、花药等外植体诱导愈伤组织，并在继代和分化阶段附加5种不同浓度的稻瘟病菌粗毒素进行胁迫培养，结果表明：不同基因型的水稻在诱导过程中诱翕率差异显著：在继代和分化阶段，毒素浓度的变化对愈伤组织的增殖和分化影响很大，处理差异显著；粗毒素浓度在30％和40％之间，达到或接近愈伤组织最大耐受范围，选择效果好；利用筛选的抗稻瘟病变异体材料进行常规选育，获得了抗性得到提高的两个稳定品系辽农2号和辽农7号，抗病性较原品种提高了1－3个等级，水稻抗稻瘟病变异体筛选技术在育种中具有实用价值。     

稻瘟病菌毒素对水稻愈伤组织成活率及其超微结构的影响

稻瘟病菌不同生理小种毒素对水稻愈伤组织的生长具有抑制作用,并降低愈伤组织的成活率。猪瘟病菌毒素对水稻愈伤组织的毒害作用,可通过超微结构观察到,随毒素处理时间的延长,受害程度趋于严重。可引起水稻愈伤组织细胞质壁分离、线粒体双层膜与嵴模糊、线粒体空泡化、质膜断裂等受害情况。不同抗性品种表现出不同的受害程度,感病品种较抗病品种对稻瘟菌毒素敏感,细胞结构受破坏较重。     

尖孢镰刀菌粗毒素对水稻种子萌发及根系生长的影响

尖孢镰刀菌是水稻立枯病病原菌之一。利用尖孢镰刀菌对水稻种子萌发及幼苗根系胁迫处理,研究表明:毒素对水稻种子萌发和胚根、胚芽的生长起着抑制作用。胚芽对毒素较为敏感,其次为种子萌发率,而胚根对毒素的抵抗能力相对较强。毒素对水稻根系的毒害作用明显,毒素浓度越高,处理时间越长,水稻根系相对电导率越高;但毒素浓度高于50%,48 h处理后相对电导率不再变化。     

稻瘟病菌粗毒素的定量生物测定法研究

利用诱致秧苗萎蔫、抑制胚芽生长、抑制胚根生长和抑制种子萌发等毒素生物测定方法都能有效地对稻瘟病菌粗毒素进行定量测定，而以后两种方法效果较佳。粗毒素制剂的不同ｐＨ值不同处理温度和时间以及处理前胚根的长度对抑制胚根生长法的定量测定结果都有影响。     

转基因抗穗发芽小麦的获得

以易穗发芽小麦幼胚为受体,用基因枪法对TrxS反义基因(目的基因)和Bar基因(标记基因)进行了共转化;通过对轰击后的小麦幼胚进行愈伤组织诱导、胚性愈伤组织分化和生根培养,获得再生植株;经分子检测证实在3个受体材料上获得转基因再生植株和可遗传的转基因后代.通过培养皿籽粒发芽试验、离体整穗保湿发芽试验和温室模拟降雨穗发芽试验,均证明转基因后代材料具有延缓籽粒发芽和抗穗发芽的特性.     

新疆雪莲组培苗的染色体观察

[目的]为雪莲的组织培养奠定细胞学基础。[方法]以新疆雪莲无菌苗的根部、下胚轴、真叶及种胚为外植体进行组织培养,观察愈伤组织和不定芽阶段的染色体变异。[结果]4种外植体形成的愈伤组织细胞中有二倍体、少量四倍体、六倍体、非整倍体及其他倍性细胞。以种胚为外植体的愈伤组织中染色体数目异常的频率最高,但愈伤组织不出芽或出芽量极少,且芽形态不正常。以根部、下胚轴和真叶为外植体的愈伤组织出芽比例高,茎尖、根尖细胞染色体大多数为二倍体,少数为嵌合体,嵌合体苗中四倍体细胞比例很小。愈伤组织中存在异常的有丝分裂现象,不定芽中难以发现。[结论]雪莲组织培养中的染色体变异是由激素引起的,非整倍性的愈伤组织细胞分化能力低。     

二次回归正交设计在灰楸离体培养中的应用

为建立灰楸离体繁殖体系,应用二次回归正交设计与SPSS软件分析,建立灰楸组培继代培养增殖系数、增殖芽长度、增殖芽数、愈伤组织横向膨大、愈伤组织纵向膨大、叶数,生根培养生根率、根长、发根数、发芽数、芽长等回归方程,通过对各方程进行模拟寻求,确定6-BA、IBA、NAA在继代与生根培养中的用量范围。结果表明:灰楸组培继代培养6-BA用量的最佳范围为1.343~1.356 mg·L~(-1),IBA用量在0.11~0.294 mg·L~(-1);一定质量浓度的6-BA在继代培养中起主要的诱导分化作用;IBA对诱导分化芽数有显著的回归关系,与其它指标无显著关系;分化芽叶数的多少与6-BA与IBA无显著关系。灰楸组培生根培养IBA用量的最佳范围为0.272~0.329 mg·L~(-1),NAA为0.027~0.033 mg·L~(-1);一定质量浓度的IBA主要促使根系与芽长生长,对生根率与发芽数无显著作用,NAA起着主要的诱导根系发生作用,与生根率、发芽数有显著的回归关系;生根苗叶数的多少与6-BA与IBA无显著关系;IBA用量在0.272~0.329 mg·L~(-1)、NAA在0.027~0.033 mg·L~(-1)范围内,灰楸组培生根率可达96%以上,可靠性为95%。灰楸离体培养适宜的继代培养基为DKW+6-BA 1.343~1.356 mg·L~(-1)+IBA 0.11~0.294 mg·L~(-1)+琼脂4.5 g·L~(-1)+蔗糖25 g·L~(-1)(p H=5.8);生根培养基为1/2MS+IBA 0.272~0.329 mg·L~(-1)+NAA 0.027~0.033mg·L~(-1)+琼脂5.0 g·L~(-1)+蔗糖10 g·L~(-1)(p H=5.8)。     

小红参愈伤组织的诱导及分化

通过不同外植体、基本培养基、暗培养、激素对小红参愈伤组织诱导和分化的试验研究,结果表明诱导小红参愈伤组织产生的最佳条件为:以真叶和顶芽(或侧芽)为外植体,在MS BA 0.2 mg/L NAA 3.0mg/L培养基上,进行暗培养,愈伤诱导率达95%。芽形成的愈伤组织组织在MS BA 5.0 NAA 1.5~2.0中均能分化出幼苗,分化率达100%,但叶形成的愈伤组织未能分化出苗。     

柱花草间接再生体系的研究

[目的]研究柱花草的间接再生体系。[方法]以＂热研2号＂柱花草为材料,研究激素、培养方法、培养条件对外植体脱分化与再分化的影响。[结果]2.0 mg/L NAA能加快柱花草外植体愈伤组织启动,0.1～0.3 mg/L BA有利于外植体脱分化和愈伤组织形成,并能促进芽的再生。NAA与BA配合使用能改善愈伤组织的质量,提高生长速度,促进芽的形成。高浓度NAA与适当浓度BA配合能分化丛生芽。低温短光照预处理能加快外植体愈伤组织启动。低温短光照预处理和昼夜温差预处理均能明显提高外植体分化成芽率,暗培养能促进愈伤组织分化和芽的生成。[结论]NAA与BA配合使用时表现出互作效应,其互作效应受光温条件的影响。     

多效唑在三系杂交水稻种子生产上的应用研究

多效唑是一种植物生长延缓剂,能抑制赤霉素的生物合成和相应的由其所控制的生理效应.将多年的试验结果和眉山水稻种子生产实际结合,探讨多效唑在水稻苗期、生长发育转化期、花期（生殖生长初期）、生殖生长中后期的应用,及对穗萌的影响,以期阐明在三系杂交水稻种子生产上怎样应用多效唑.     

长寿花组织培养与人工种子的研究

笔者初步研究了长寿花人工种子的制备,包括胚性愈伤组织及胚状体的诱导、人工种子的包埋和萌发。胚性愈伤组织诱导的最适培养基为:MS+2,4 D2mg/L+BA0 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L;胚状体诱导的最适培养基为:MS+BA2mg/L+NAA0 2mg/L+活性炭4g/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L;用无激素MS培养基配制的4%海藻酸钠溶液包埋胚状体,并用2%的CaCl2·2H2O溶液作聚胶化因子,制成人工种子;将人工种子在无激素的MS固体培养基上萌发,萌发率达96%。利用石蜡切片法对胚状体的发生发育过程进行了观察。     

对节白蜡愈伤组织诱导的研究

[目的]寻找有效的种苗快速繁殖途径,保护濒危的对节白蜡。[方法]以对节白蜡顶芽做外植体,接种于添加不同浓度2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)和6-苄基腺嘌呤(6-BA)的MS固体培养基上,比较其愈伤组织的诱导率及长势。[结果]取用0.1%的氯化汞消毒10 m in的顶芽做外植体较理想;树龄对顶芽形成愈伤组织没有明显影响,而激素的种类和它们在MS固体培养基上的浓度对对节白蜡愈伤组织的诱导有显著影响。试验结果表明MS+2.0 mg/L 6-BA+1.5 mg/L 2,4-D为最佳培养基,产生的愈伤组织生长快,将此愈伤组织继代培养可加速增殖,能在短期内获得大量遗传性一致的再生植株。[结论]采用生长良好的愈伤组织进行大规模快速繁殖是保护、开发、利用对节白蜡的最优途径。     

魔芋快繁体系建立和人工种子研制

附加1mg/1NAA 和1mg/1BA 的 MS 培养基,既适于花魔芋块茎愈伤组织诱导,也适于继代培养。愈伤组织在0.05mg/1NAA 和1mg/1BA 培养基上,芽分化率较高。在无植物生长调节剂的培养基上,芽生长较快且粗壮。在未消毒土壤中,加有多种抗菌剂的魔芋芽型人工种子的转化率为12.5％,比不加抗菌剂的人工种子转换率高1倍多。     

铬胁迫对大豆种子萌发和幼苗生长的影响

[目的]为预防大豆早期铬伤害提供依据。[方法]用不同浓度的铬处理大豆种子,研究铬对大豆种子萌发率、发芽势及幼苗生长的影响。[结果]随着Cr6+浓度从0增至5mg/L,发芽率从91.44%增至92.59%,发芽势从89.13%增至89.54%。Cr6+浓度从10mg/L增至160mg/L时,发芽率和发芽势分别降至74.94%和73.64%。低浓度铬处理的大豆幼苗根长、芽长及生物量比对照有少许的增加。15mg/L的Cr6+抑制大豆幼苗的生长,且随着浓度的提高抑制效应逐渐增强。Cr6+浓度达到100mg/L时,根长与芽长分别为对照的28.61%、31.33%。Cr6+对大豆幼根生长的抑制作用大于对芽生长的抑制作用。[结论]铬处理对大豆种子萌发及幼苗生长具有一个低浓度下的刺激效应和高浓度下的抑制效应,浓度10mg/L以下的铬对大豆种子萌发及幼苗生长有促进作用。