家蚕传染性软化病病毒荧光定量PCR检测技术及浙江省流行病学调查

荧光定量PCR检测技术可实现对病原微生物的早期或快速检测,根据家蚕传染性软化病病毒(BmIFV)的RNA序列,设计了具有物种特异性的引物和探针,建立了荧光PCR检测BmIFV的方法。将设计的引物和探针同时对BmIFV、家蚕微孢子虫(Nb)、家蚕核型多角体病毒(BmNPV)、家蚕浓核病病毒(BmDNV)和桑叶进行特异性验证,结果显示只有BmIFV得到阳性结果。该方法对含BmIFV目标片段质粒的检测灵敏度达10~(-3)ng/μL,对目标病毒的检测灵敏度为3.4ng/μL。同时,对浙江省嘉兴市秀洲区、湖州市南浔区、嘉兴市桐乡市、嘉兴市海宁市、杭州市淳安县5个蚕区家蚕感染BmIFV情况进行了流行病学调查,结果显示这5个蚕区BmIFV感染率约为3.6%,为浙江省家蚕传染性软化病防治提供参考。     

家蚕病毒性软化病病毒抗血清的研制及应用

从蚕区农户分离了一株家蚕病毒性软化病病毒,暂命名为BmIFV-CHN001。利用蔗糖密度梯度及差速离心法提纯该病毒,将提纯病毒免疫家兔3次,得到BmIFV抗血清。所制备的抗血清采用琼脂双扩散法检测养蚕农户家蚕样本,调查该病毒病在浙江蚕区的感染现状,调查显示农村饲养家蚕具有较高的感染率。     

传染性软化病病毒感染家蚕中肠上皮细胞的免疫电镜观察

家蚕传染性软化病病毒(Bombyxmoriinfectious flacherie virus,BmIFV)专一地侵染家蚕中肠上皮组织,造成中肠上皮细胞的超微结构发生病变,在染毒家蚕的中肠杯形细胞内形成特异性小泡体和电子稠密体等特异性结构。电镜观察显示,在感染早期,微绒毛膜、线粒体附近及相邻两个细胞的细胞膜和内质网中较易发现胶体金颗粒(10 nm)的吸附;其后在微绒毛中间和细胞质中,以及内质网和特异性小泡体的界限膜附近出现或较多存在,但线粒体和特异性小泡体的内部未见金颗粒的吸附。因此可以认为:家蚕传染性软化病病毒主要在染毒细胞的各细胞器膜附近出现。     

5种家蚕病毒的密码子及密码对使用模式分析

通过分析5种家蚕病毒基因组密码子和密码对使用模式,初步探讨5种家蚕病毒的基因组进化和对宿主的适应策略。采用生物信息学方法对碱基含量(GCall、GC1、GC2、GC3、GC3s)、有效密码子数(ENc)、相对同义密码子使用度(RSCU)、密码对(codon-pair)等进行统计分析的结果表明:5种家蚕病毒的密码子偏好性均较低,病毒间的碱基组成及ENc值差异较小,碱基组成对密码子使用模式影响较小;不同病毒选择不同的偏好性密码子,不同病毒的密码对偏好性程度不同,其中,家蚕类葡萄斑点病毒(Bombyx mori macula-like virus,BmMLV)密码对偏好性最强,家蚕质型多角体病毒(Bombyx mori cypovirus,BmCPV)和家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)密码对偏好性最弱。聚类分析表明BmCPV和家蚕浓核病毒(Bombyx mori densovirus,BmDNV)的密码子使用模式相似,BmNPV和家蚕传染性软化病病毒(Bombyx mori infec-tious flacherie virus,BmIFV)的密码子使用模式相似;BmMLV、BmNPV和BmDNV的密码对使用模式相似,BmIFV和BmCPV的密码对使用模式相似。5种病毒的偏好性密码子和偏好性密码对不同,显示不同病毒的密码子和密码对的进化路径不同,对宿主的适应策略不同。     

关于家蚕病毒病的高温疗法的研究

讲演者基于对感染软化病病毒的家蚕幼虫用高温处理抑制发病的效果在组织学方面的研究(INOUE and TANADA,1977),对于感染了软化病病毒(IFV)、小型软化病病毒(SFV)以及细胞质多角体病病毒(CPV)等各种病毒的家蚕幼虫的高温疗法进行了研究。     

单克隆抗体诊断家蚕浓核病

<正> 养蚕中流行的家蚕浓核病,是造成蚕茧歉收的原因之一。本病是由家蚕浓核病病毒(BmDNV)感染蚕体后引起发病的,这种病毒是一种没有包涵体的昆虫病毒,与过去报导的传染性软化病病毒(IFV)不同,浓核病病毒为直径21nm的球状粒子,病毒核酸为单链DNA,侵入家蚕中肠,在园筒细胞核内形成病毒粒子,而传染性软化病病毒为单链RNA,直径约27nm的球状粒子,侵染家蚕中肠杯状细胞,在细胞质内形成病毒粒子。     

关于DNV佐久株的研究综述

前言1929年法国的 Paillot 提出家蚕的空头性软化病是由病毒引起的。从此就结束了蚕的空头性软化病由细菌引起的历史。1960年将由此病毒引起的软化病正式命名为:病毒性软化病或传染性软化病。而此病毒即命名为:传染性软化病病毒。通过蚕病学者们的大量研究,确认此病毒属于微核糖核酸病毒科(Picornaviridae)、肠道病毒属(Entero-virus)的病毒。然而松井(1973年)、古田(1973年)、Himeno等(1974年)、清水(1974年)相继发现了能引起家蚕软化病症,而又不同于原先发现的传染性软化病病毒的新病毒。这些新发现的病毒当时就分别称为:松井株、古田株、姬野株、伊那株。其中姬野株被认为是传染性软化病病毒粒子的未成熟型,而松井、古田、伊那株则是完     

家蚕传染性软化病病毒(桐乡株)5′端非编码区基因的克隆及序列分析

为了探讨家蚕传染性软化病病毒的复制与翻译机制,利用cDNA 5′末端快速扩增(5′-RACE)技术获得了家蚕传染性软化病病毒桐乡分离株(Bombyxmoriinfectious flacherie virus,BmIFV-2)的5′端非编码区(non-coding region,NCR)。序列比较分析发现:BmIFV-2的5′-NCR由155个核苷酸组成,A+U含量达60.64%,其中包含1个起始密码子AUG;与坂城分离株(BmIFV-1)的5′-NCR相比,BmIFV-2的5′-NCR在5′末端缺少1个核苷酸,但核苷酸识别率为100%(即单核苷酸变异率为0),而且这个缺少的核苷酸并不影响其5′-NCR的二级结构。与已经证实具有内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)活性的Iflavirus属的2种病毒EoPV(Ectropis obliquapicor-na-like virus)和VDV-1(Varroa destructorvirus 1)的5′-NCR相比,BmIFV的5′-NCR可能也具有IRES活性。     

家蚕浓核病毒的研究

<正> 家蚕浓核病与传染性软化病由于其外部症状,发病规律及病毒形态均十分相似,因而长期以来两者混淆不清。七十年代中期日本把家蚕浓核病毒(DNV)作为传染性软化病病毒(FV)的一个毒株,七十年代后期通过对病毒的生化分析才确认这是两类完全不同的病毒,最近在日本除浓核病毒伊那株外,又分离出了山梨标及佐久株,这些病毒虽然都是以单链DNA为核酸的浓核病毒,但其抗原性、病原性及病毒结构蛋白分子量则各不相同。我国在1959年先于日本证实生产上所发生的家蚕空头性软化病是由病毒引起,1979年起我们开始对本病毒进行了较系统而深入的研究。     

家蚕脓病软化病隐性感染的研究 (Ⅰ)五龄起蚕低温冲击及五龄期高温饲育的蚕病发生与稚蚕期接种血液型脓病病毒的关系

家蚕感染脓病软化病后,能否长期潜伏于体内,并不表现病征,在遭遇不良环境条件的袭击时,这种潜伏的病毒,迅速增殖,使蚕病突然暴发呢?也就是脓病软化病有否隐性感染呢?这是探明环境诱发脓病软化病的实质的一个重要问题。Kridge(1958)提出家蚕     

家蚕病毒性软化病的研究进展

就家蚕病毒性软化病的病原发现、病毒的蛋白构成、病毒基因组的基本结构、结构蛋白的编码域、多元蛋白序列、翻译起始中相关的RNA元件和细胞因子、蛋白质的加工处理、复制机制,以及流行病学等的研究进行了综述。通过BmFV与其它小RNA病毒(或类似小RNA病毒)的比较,认为开展病毒侵染相关的细胞因子研究、病毒基因的功能和病害流行机制等的研究将是十分有意义的工作。     

五龄期添食几种药物对蓖麻蚕软化病防治效果比较

在蓖麻蚕生产中，软化病（细菌性胃肠病和细菌性败血病的总称）发生得比较多，尤其在五龄期发病严重，对生产威胁较大，本试验用消特灵、绿迪奥、蚕用绿霉素、大蒜白酒液（自制）蚕药在蓖麻蚕五龄期分别添食，结果表明以上药液添食后，五龄蚕期病死蚕率比对照区明显降低。     

微粒子病家蚕消化道内肠球菌的分布

从健康家要、感染微粒子病家蚕,以及感染细菌性肠道病家蚕的消化道分离了200株肠球菌,并进行了数值分类学鉴定,以探讨家蚕消化道中肠球菌的生态学分布和家蚕微孢子与肠球菌的相互关系。研究结果表明:与健康蚕相比,4龄或5龄起蚕添食微孢子的微粒子病家蚕消化道内,肠球菌的数量分别增加5.5×10~5倍和0.74×10~2倍;菌种数从6个分别下降为3个和4个;生化表型数从27个分别下降为13个和14个;在菌种分布上,Ent.avium的分布频率从健康蚕的56％分别下降至20%和38%,而Ent.faecium的分布频率从健康蚕的2％分别上升至40％和16%;分离菌株共有59个生化表型。     

辽宁地区樗蚕的生物学特性及人工饲育技术研究

樗蚕(Samia cynthia Walker et Felde)是一种珍贵的泌丝及食用昆虫资源。通过室内及野外人工饲育的方法,观察分布在辽宁地区的樗蚕的形态特征和生活习性,发现与分布于其它地区的樗蚕存在不同程度的差异。辽宁地区的樗蚕年发生1-2代,喜食臭椿(Ailanthus altissima)、山花椒(Zanthoxylum schinifollum)、枣树(Zizyphus jujube)、黄檗(Phellodendron amu-rense)等的树叶,幼虫4眠5龄,龄期经过25-37d,饲料种类不同可造成龄期差异;以蛹滞育。人工饲育樗蚕可采用小蚕室内育,大蚕野外育的饲养形式;种茧保护可采用柞蚕(Antheraea pernyi)的种茧越冬保护技术与方法,春季种茧出库后在温度20～23℃、相对湿度75%～85%的条件下暖茧,成虫交配时间超过4h的卵孵化率较高;樗蚕的主要病害有细菌性软化病、白僵病、微粒子病,春、秋季野外饲养的樗蚕易被蚕饰腹寄蝇(Blepharip azebina)寄生危害。樗蚕茧丝的纤度为1.80～3.60dtex,茧层丝胶练减率平均为25%,茧丝中的丝素蛋白约78%。     

The epidemiology of toxoplasmosis on Iowa swine farms with an emphasis on the roles of free-living mammals.

Multiparous sows from 19 central Iowa swine farms were tested for antibodies against Toxoplasma gondii by the modified direct agglutination test. Antibody titers of 1:32 or greater were considered positive. Rodents, domestic cats, opossums (Didelphis virginiana), raccoons (Procyon lotor) and striped skunks (Mephitis mephitis) were live-trapped on each farm and similarly tested for antibodies. The overall prevalence of T. gondii antibodies in the species tested was 39/273 (14.3%) swine, 31/74 (41.9%) cats, 2/588 (0.3%) house mice (Mus musculus), 0/21 mice of the genus Peromyscus, 0/9 Norway rats (Rattus norvegicus), 1/34 (2.9%) opossums, 4/14 (28.6%) raccoons and 2/7 (28.6%) striped skunks. The overall prevalence was significantly greater in adult cats versus juvenile cats, adult male cats versus adult female cats, and adult raccoons versus juvenile raccoons. The prevalence of T. gondii antibodies in sows was compared with the prevalence in each non-swine species on a farm basis in order to identify existing associations. The prevalence in sows (and each of the non-swine species) was also analyzed on a farm basis for association with farm characteristics or swine management practices, including the degree of confinement of swine, population size and average parity of breeding female swine, estimated cat population size, and estimated mouse and rat abundance. Average titers of seropositive animals were compared on a species basis. The prevalence in sows which were totally and continuously confined was lower than that in sows which were not totally and continuously confined. The prevalence in sows from farms with an average parity of less than 2.0 was significantly lower than that in sows from farms with an average parity of 2.0 or greater. These results suggested that the prevalence of T. gondii antibodies in swine increased with age and that prevalence in swine could be reduced through total confinement. No associations could be established between prevalence in sows and prevalence in non-swine species or other farm characteristics/swine management practices. However, the high prevalence of T. gondii antibodies in cats suggested that fecal contamination of the environment by cats may be the most significant source of toxoplasmosis for swine. The extremely low prevalence of T. gondii antibodies in house mice suggested that this species was not an important source of T. gondii for swine in Iowa.     

Foot lesions in finishing pigs and their associations with the type of floor.

The associations between individual foot lesions and different types of floor were investigated in 4038 finishing pigs on 21 units. The overall prevalence of foot lesions was 93.8 per cent and the prevalence ranged from 79.4 per cent to 100 per cent on different units. Analysis showed that pigs kept on bedded floors, with either sparse or deep straw, had a lower prevalence of sole erosions, heel erosions and heel flaps and a higher prevalence of white line lesions, false sand cracks, wall separations and toe erosions than pigs kept on bare solid concrete floors. Partially slatted floors were associated with an increased prevalence of heel erosions, heel flaps, white line lesions, wall separations and false sand cracks, and totally slatted floors were associated with an increased prevalence of sole erosions and heel flaps.