芒果采后病害拮抗菌的筛选、鉴定及其生防效果研究

采用平板对峙法从芒果叶片与果实分离筛选芒果采后主要病害病原菌(胶孢炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides Penz.,芒果蒂腐病菌Botryodiplodia theobromae Pat.)的拮抗菌,对抑菌效果好的拮抗菌进行采后病害防治试验,并采用形态及培养特征观察、生理生化测定结合16S DNA序列分析进行鉴定。发现菌株A1稀释10倍的LB菌液对芒果采后炭疽病防效为80.05%、对蒂腐病的防效为74.18%,平均防效达到77.12%,防效明显。菌株C13对芒果采后炭疽病和蒂腐病防效次之,防效分别为71.73%和54.24%,平均防效达到62.99%。经鉴定A1为荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens Migula,C13为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis strain。     

植物萃取物对芒果的保鲜效果

测定4种植物萃取物对芒果炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides Penz）和芒果蒂腐病菌（Botryodiplodia theobromae Pat）的抑菌活性以及对芒果主要采后病害的防治效果。结果表明,在0.4 mg·mL^-1浓度下,厚朴酚,姜黄素、阿魏酸3种萃取物对芒果采后病原菌均有一定的抑制活性,其中厚朴酚对该2株病原菌的平均抑制率高达89.41%。在2 mg·mL^-1浓度下,4种萃取物对芒果采后病害均有一定的防治效果,其中姜黄素对芒果炭疽病和蒂腐病的防效分别为76.56%和80.95,效果优于药剂对照。     

多粘类芽孢杆菌XZ-2的生物学特性及其对3种大豆病原菌的拮抗作用研究

【目的】XZ-2是江苏徐淮地区徐州农业科学研究所油料研究课题组分离到的1株大豆内生多粘类芽孢杆菌,为明确该菌株的发酵条件及其对3种主要大豆病害的室内生防潜力。【方法】本文采用单因素试验对XZ-2进行了生物学特性研究并采用平板对峙培养法和显微观察研究该菌株对引起大豆主要病害的3种病原菌大豆疫霉病菌、大豆炭疽病菌和大豆菌核病菌的拮抗作用。【结果】XZ-2在pH值6~8生长情况最佳,在氯化钠浓度0~15 g/L生长情况相对较好,对光暗不敏感,致死温度为100℃,10min;XZ-2发酵液对3种大豆病原菌均有较强的拮抗活性,抑菌带直径分别为22.3,24.2和23.6 mm;显微观察发现XZ-2发酵滤液对大豆疫霉病菌、大豆炭疽病菌和大豆菌核病菌的菌丝具有明显的抑制作用,受抑制的菌丝膨大、畸形,分枝增多;24 h后对照大豆炭疽病菌孢子萌发而XZ-2发酵滤液处理的大豆炭疽病菌孢子不萌发,说明XZ-2发酵滤液可抑制大豆炭疽病菌孢子萌发。【结论】XZ-2对大豆疫霉病菌、大豆炭疽病菌和大豆菌核病菌等3种病菌菌丝均有较强的抑制作用并可抑制大豆炭疽病孢子萌发,说明该菌株对供试的3种大豆病害具有较好的生防潜力,值得进一步研究和推广。     

芒果蒂腐病拮抗放线菌A10和A17的分离、鉴定和特征化研究

为丰富芒果蒂腐病拮抗菌资源,寻找替代化学杀菌剂的无毒无污染的采后防治方法,使用平板稀释法、划线纯化法、纸片扩散法从芒果树根际土壤中分离筛选对蒂腐病有拮抗作用的放线菌,明确其分类地位,优化其发酵条件,测试活体防效。共筛选到两株对采后芒果蒂腐病菌可可球二孢(Botryodiplodia theobromae Pat.)有较强抑菌活性的拮抗放线菌A10和A17,其中A17对另一种引起芒果蒂腐病的病原菌芒果拟茎点霉也有拮抗作用。经形态特征、生理生化特性和分子鉴定初步判断,2株放线菌均为链霉菌属(Streptomyces)。A10菌株的发酵培养基和发酵条件优化后为:2.5%乳糖,2.0%蛋白胨,初始pH 8.0,摇床转速200 r·min^-1,培养时间120 h;A17菌株的发酵培养基和发酵条件优化为:2.0%可溶性淀粉,2.0%蛋白胨,初始pH 7.0,摇床转速200 r·min^-1,培养时间120 h。活体实验中,第4天时,无菌水处理的对照组果实发病率和发病指数分别为81.7%、52.5,A10处理组分别为43.3%、21.7,A17处理组分别为36.7%、17.5,450 mg·kg^-1咪鲜胺处理组分别为16.7%、12.2,说明两株菌均对蒂腐病的发生和病斑扩展有一定的抑制效果,且A17对病斑扩展的抑制效果和450 mg·kg^-1咪鲜胺处理无显著差异。研究表明,这两种菌株均对蒂腐病菌有一定的拮抗作用,可进一步深入研究。     

甜瓜枯萎病拮抗内生细菌筛选

从2~5叶期甜瓜根茎部共分离纯化了内生细菌81株,平皿对峙试验结果表明,有6株内生细菌对甜瓜枯萎病菌的生长有明显的拮抗作用,其中Z46,Z53,Z54和Z56菌株的拮抗性较强。上述4株拮抗菌的5倍发酵滤液对镰刀菌的抑制率分别为62.8%,66.8%,63.0%,64.7%。温室内防效试验结果表明,Z56对甜瓜枯萎病的防效最高,200倍和400倍发酵液的防效分别为80.0%和60.0%,同时对寄主具有明显的促生作用。说明Z56菌株具有潜在生防功能。     

苹果树主要病害内生拮抗真菌的筛选及拮抗特性

【目的】筛选苹果树腐烂病菌Valsa malimiyabe与苹果树炭疽病菌Glomeralla cingalata的内生拮抗真菌,并研究其抑菌效果。【方法】分离发病地区健康苹果树的根、茎及其根际土壤中的拮抗内生真菌,室内抑菌试验测定其对苹果树腐烂病菌和苹果树炭疽病菌的抑制作用;发酵培养试验检测其内生真菌中抑菌物质的耐热性。【结果】分离到的18株内生真菌分属3个属,其中茎分离到的内生真菌的种类和数量较多;对峙试验表明,对苹果树腐烂病菌和炭疽病菌的抑菌率高于60%的有8株,其中菌株J2、J16、J17对苹果树腐烂病的抑制率分别为82.75%、84.31%和82.35%,菌株T1对苹果树菌株炭疽病的抑制率为80.67%。拮抗真菌J2、J16、J17、J24、T1发酵液对2种病原菌分生孢子萌发的抑制率均不小于39.55%,最高达69.75%;在121℃时,J11和T1无菌滤液的热稳定性较好,而J2无菌滤液在100°C时就失去了生物活性。【结论】拮抗真菌J2、J11、J16、J17、T1均对苹果树腐烂病菌及苹果树炭疽病菌有较强拮抗作用,可为开展这2种病害的生物防治研究提供潜在资源。     

芒果炭疽病拮抗菌的筛选及防治效果研究

针对芒果炭疽病菌进行了拮抗菌的分离和筛选．并且采用有效菌株的发酵液进行了平板培养基抑菌试验以及采后芒果果实炭疽病防病试验。结果从24个菌株中筛选得到1株有效抑制炭疽病菌的芽孢杆菌M35,其抑菌圈大于13mm,而且其发酵液对炭疽病菌也有明显的抑制作用;果实防病试验结果也显示,该菌株对于芒果采后炭疽病有显著的防治效果,且随着该拮抗菌菌悬液浓度的增加,防病效果提高,在浓度为1×10^8CFU／mL时,发病率为45％,病斑直径为14．1mm。     

一种从土壤中筛选植物病原真菌拮抗细菌的新方法初步研究

以微孔滤膜为核心手段,研究采用滤膜空斑法从土壤中筛选芒果炭疽病菌拮抗细菌的可行性。结果使用该方法从土壤中筛选到9个对芒果炭疽病菌有疑似拮抗作用的细菌,经试验确认其中2个菌株对芒果炭疽病菌具有良好的拮抗作用。表明从滤膜空斑中确实可以挑取到对芒果炭疽病菌具有抑制效果的细菌分离物,证明用滤膜空斑法从土壤筛选抑制芒果炭疽病菌菌丝生长的细菌是可行的。     

农用植物酵素液中梨树腐烂病菌拮抗细菌的筛选和防病效果

从农用植物酵素液中筛选对梨黑腐皮壳菌（Valsa pyri）具有抑菌活性的细菌菌株,明确其对梨树腐烂病的防治潜力,以梨黑腐皮壳菌为靶标菌,通过平板对峙培养和牛津杯法从分离自农用植物酵素液的细菌中筛选拮抗菌株,并分析拮抗菌株对病原菌孢子萌发和菌丝生长的影响及防病效果。结果表明,从农用植物酵素液中分离的68株细菌中初筛出15株对梨黑腐皮壳菌具有抑菌作用的细菌,占分离菌株数的22.1%,抑菌率为41.25%～74.14%。经过复筛,4个菌株（gjfn2、gjfn4、PFN41、PGY-FX67）的发酵液和除菌发酵滤液抑菌率分别大于70%和60%,显著高于其他菌株。采用形态特征、生理生化特性及16S rRNA和gyrA基因序列分析,将gjfn2、gjfn4和PGY-FX67鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）,PFN41鉴定为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。4个拮抗菌株发酵液和除菌发酵滤液对梨黑腐皮壳菌分生孢子的萌发有明显的抑制作用,gjfn4、PFN41菌株发酵液及除菌发酵滤液对梨黑腐皮壳菌分生孢子的抑制率36 h均可达到100%,并使梨黑腐皮壳菌菌丝形态畸形、弯曲、末端膨大。离体枝条法防效测定结果表明,4个菌株的发酵液防效均达到79%以上,除菌发酵滤液防效均达到73%以上,其中gjfn4菌株的防效最佳,其发酵液、除菌发酵滤液及除菌发酵滤液50倍稀释液对梨树腐烂病防效分别均达到84.79%、81.57%和67.27%。由此表明,从农用植物酵素液中筛选获得的拮抗细菌菌株具有防治梨树腐烂病的良好潜力。     

苹果树皮内生菌对苹果树腐烂病的防治效果

从苹果树皮中分离出1株对苹果腐烂病病菌具有较好拮抗作用的内生细菌——B5014。该菌株对腐烂病病菌的抑菌率达55.59%,显著高于其他菌株;通过对菌株B5014发酵滤液进行不同浓度稀释后发现,随着浓度的不断降低,菌株B5014发酵滤液对腐烂病病菌菌丝生长、孢子萌发的抑制率不断下降;田间试验表明,在接种时间较短(10 d)时,B5014细菌悬浮液原液处理可以与生产中常规使用的80%代森锰锌800倍液防效基本持平,但到接种20 d时,防效低于常规化学防治方法。     

香蕉枯萎病菌和芦笋茎枯病菌的拮抗放线菌筛选与鉴定

从江西井冈山地区采集的土壤样品中分离获得76株放线菌,通过对峙培养法筛选出菌株S15对香蕉枯萎病菌Fusarium oxysporum、芦笋茎枯病菌Phomopsis asparagi有强抑制作用,该菌培养滤液对稻瘟病菌Magnaporthe oryzae、番茄灰霉病菌Botrytis cinerea、大豆炭疽病菌Colletotrichum truncatum、水稻纹枯病菌Rhizoctonia solani、柑橘炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides、香蕉黑星病菌Cladosporium cucumerinum、番茄早疫病菌Alternaria solani、黄瓜炭疽病菌Colletotrichum orbiculare、玉米大斑病菌Setosphaeria turcica等多种重要的植物病原真菌也均有较强的抑制作用,拮抗谱较宽。根据其形态特征、培养特性、生理生化特性和16S rDNA序列同源性分析,S15被鉴定为链霉菌属波卓链霉菌Streptomyces bottropensis。     

芒果不同品种茎叶粗提物对植物病原菌的抑菌作用

采用生长速率法测定了芒果不同品种茎叶粗提物对芒果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides Penz)、芒果蒂腐病菌(Botryodiplodia theobromae Pat)、香蕉炭疽病菌[Colletotrichum musae(Berk & Curt)Arx]、香蕉枯萎病菌(Fusa...     

两株解淀粉芽孢杆菌的鉴定及对抗多菌灵可可球二孢菌的拮抗作用#br#

海南地区芒果蒂腐病主要由可可球二孢菌（Botryodiplodia theobromae）引起，从海南芒果上分离获得2株拮抗细菌（HBW和HBR），采用形态学、生理生化特性和分子检测等方法对菌种进行鉴定，通过离体活性测定法评估其对10种植物病原真菌的拮抗活性，并进一步比较了细菌悬液和无菌培养滤液对具有不同多菌灵抗性的可可球二孢菌株的抑菌效果。结果表明， 拮抗细菌HBW和HBR均属于解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens），对10种植物病原真菌均具有较强的抑制作用。HBW和HBR的细菌悬液和无菌培养滤液对具有不同多菌灵抗性的可可球二孢菌均有较好的抑制效果，且培养滤液的抑菌效果优于悬浮液。其中，20%的稀释滤液最高抑制率可达100%。由此表明，解淀粉芽孢杆菌HBW和HBR菌株具有较高的开发应用潜力。     

5种精油对植物病原菌的抑制活性研究

采用生长速率法测定了黄皮叶、金橘叶、柚子果皮、番石榴叶、芒果叶5种植物精油对水稻稻瘟病菌(Phyricularia grisea)、西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)、香蕉枯萎病菌(Fu-sarium oxysporum f.sp.cubense)、芒果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、芒果蒂腐病菌(Bot-ryodiplodia theobromae)抑菌活性。结果表明:在1g/L质量浓度下,5种精油对病原菌均有明显的抑制活性,其中黄皮叶精油对水稻稻瘟病菌的抑制率高达93.85%,优于其他几种精油;黄皮叶精油不同质量浓度对4种病原真菌的毒力测定结果表明,其对芒果蒂腐病菌的EC50最低,为0.21g/L。     

草莓根腐病拮抗细菌的分离筛选与鉴定

为筛选和鉴定草莓根际土壤中对草莓根腐病菌(Colletotrichum gloeosporioides)有拮抗作用的细菌,采用平板对峙培养法,对从北京市昌平区小汤山草莓种植基地土样中分离到的306株菌株进行初筛,复筛后获得了1株拮抗效果好且具有较好稳定性的菌株GF-98,其抑菌带宽度为9.3 mm。此外,菌株GF-98的抑菌谱较广,对草莓根腐尖孢镰刀病菌、草莓灰霉病菌、草莓根腐石楠拟盘多毛孢病菌等9种植物病原真菌均有较好的抑菌效果。在显微镜下观察发现,菌株GF-98的代谢产物对草莓根腐病菌有致畸作用,包括菌丝缩短、粗细不均、分枝增多扭曲、细胞原生质浓缩等现象。16S rDNA基因分析以及生理生化鉴定等方法表明,菌株GF-98为多粘类芽孢杆菌(Peanibacillus ploymyxa)。     

兰花炭疽病拮抗细菌8-59菌株的分离与鉴定

从各地采集的土样中筛选对兰花炭疽病病原菌胶孢炭疽菌(Colletoichum gloeosporioides)具有拮抗活性的菌株。从土样中分离到720株菌株,初筛获得具有拮抗作用的菌株32株,经过复筛,选出1株具有较高拮抗活性的菌株8-59。对8-59菌株进行形态鉴定、生理生化特征鉴定和16S rDNA序列分析,菌株8-59与花域芽孢杆菌(Bacillus vallismortis)很相近。根据16S rDNA序列相似性分析,此菌株与花域芽孢杆菌标准菌株DSM 11031的16S rDNA序列相似度达99.49%。鉴定该菌株为花域芽孢杆菌。     

一株猪源芽孢杆菌益生菌的筛选与鉴定

以大肠杆菌(Escherichia coli)为病源指示菌,从养猪场健康成年猪粪便中分离、筛选出8株对其有抑菌活性的芽孢杆菌。经培养特征、形态观察、生理生化试验以及16S rDNA序列分析,通过对照《常见细菌鉴定手册》确定L-7菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),16S rDNA序列相似度为99.58%,是一株比较理想的潜在益生菌。     

油茶炭疽病拮抗内生细菌的筛选

从健康的油茶叶中分离得到内生细菌菌株156株,经平板对峙法初筛,筛选到油茶炭疽病菌菌丝生长有抑制作用的有25株,再通过发酵法复筛,筛选到1株具有较强拮抗作用的菌株Y13,其抑菌直径达10mm以上．对Y13进行形态学和生理生化指标分析,初步鉴定为芽孢杆菌．抗菌谱测定表明,该菌对黄瓜枯萎病菌、水稻纹枯病菌、番茄早疫病菌、油茶叶枯病菌等4种病原真菌也具有较强的抗菌活性．     

文心兰炭疽病生防潜力菌的鉴定及其抑菌性的测定

为获得对文心兰（Oncidium hybridum）炭疽病具有生物防治潜力的菌株,前期从健康文心兰“博大1号”叶片中分离得到1株内生菌株WB75,通过平板对峙法和发酵液抑菌性判定该菌具有防治炭疽病的生防潜力。平板对峙结果表明,菌株WB75对胶孢炭疽菌的抑制率为58.79%。菌株WB75的发酵原液和高温处理后的发酵液对胶孢炭疽菌的抑制率分别为77.69%和41.26%,由此推测WB75抑菌活性物质的热稳定性较差。菌株WB75对8种（热带生炭疽菌Colletotrichum tropicicola、鹰嘴豆枯萎镰刀菌Fusarium delphinoides、腐皮镰孢菌Fusarium solani、隔孢假壳科真菌Paraconiothyrium thysanolaenae、尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum、画眉草弯孢菌Curvularia eragrostidis、芒果球座菌Guignardia mangiferae、巨座壳科真菌Muyocopron alcornii） 文心兰致病菌（12株）均有较好的抑制作用,抑制率38.42%～91.53%。通过生理生化特性和16S rDNA、gyrA和gyrB多基因序列比对,鉴定菌株WB75为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。这株解淀粉芽孢杆菌是对文心兰病害具有拮抗作用的潜在生防菌。     

紫花苜蓿根腐病生防菌的筛选、鉴定及发酵条件优化

【目的】筛选获得对紫花苜蓿根腐病病原菌具有拮抗作用的菌株,并对其发酵条件进行优化,为紫花苜蓿根腐病生物防治提供菌株资源。【方法】以青藏高原的紫花苜蓿根际土壤为研究对象,以紫花苜蓿根腐病5种病原菌为靶标,利用稀释涂布法分离细菌;利用平板对峙法筛选对苜蓿根腐病病原菌具有拮抗作用的菌株;利用平板对峙法和菌丝生长速率法测定拮抗菌株对5种苜蓿根腐病病原菌的抑菌活性;通过形态学观察、生理生化测定和16S rDNA序列分析确定拮抗菌株的分类地位;利用单因素试验和正交试验对拮抗菌株发酵条件进行优化。【结果】从紫花苜蓿根际土壤中共分离纯化出92株细菌,从中筛选出16株对供试病原菌具有较强拮抗作用的菌株,其中菌株LJ3-1的抑菌效果最强,且具有广谱抑菌活性。对菌株LJ3-1发酵滤液的抑菌活性测定结果显示,其发酵滤液对供试病原菌的抑制率为44.9%~77.4%。结合菌落形态特征、生理生化测定和16S rDNA序列分析结果,将菌株LJ3-1鉴定为枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）。对菌株LJ3-1的发酵条件优化结果显示,其最适发酵培养基组分为3%葡萄糖、 1%酵母浸粉和0.5% NaCl;最适发酵条件为初始pH 6.5~7.0、培养温度35 ℃、 250 mL锥形瓶装液量80 mL、接种量3%、培养时间36 h、转速180 r/min。在优化后的发酵培养条件下,菌株LJ3-1对燕麦镰刀菌 （Fusarium avenaceum）的抑菌活性由76.5%提高至89.3%。【结论】菌株LJ3-1对紫花苜蓿根腐病5种病原菌均具有良好的拮抗作用,可作为研制苜蓿根腐病生物防治菌剂的候选菌株。