白菜低温要求型晚抽薹性的相关序列克隆与分析

为了阐明低温要求型晚抽薹的分子机制,本研究利用易抽薹大白菜BY和晚抽薹芜菁"M.M"杂交获得的81个DH系群体为试材,从中选择了6个极早抽薹和6个极晚抽薹的株系分别组成早抽薹池和晚抽薹池.以两池和双亲为样本,以无低温和3～5℃处理25 d后获得的mRNA为模板,反转录为cDNA,利用256对AFLP引物组合进行cDNA-AFLP分析,筛选与晚抽薹性相关的特异片段.对其中3条差异表达、且丰度较高的cDNA片段进行了克隆测序.序列测定和Blast分析表明,p65m47 cDNA片段与C2结构域蛋白基因有80%的同源性,期望值为7e-17,C2结构域蛋白在细胞的信号转导中起着很重要的作用;p66m55 cDNA I片段与拟南芥AT1G32530 cDNA有85%的同源性,期望值为5e-36,它编码蛋白结合位点/泛素连接酶/锌指结合蛋白;p66m55 cDNA Ⅱ片段与拟南芥AT1G65590 cDNA有87%的同源性,期望值为4e-37,它编码B-N-乙酰已糖胺水解酶.     

利用分子标记鉴定白菜细胞质雄性不育类型的研究

通过对9份白菜细胞质雄性不育材料的不育胞质类型进行分子标记鉴定,以期为今后更好的利用分子标记来进行辅助育种奠定基础。通过CTAB法提取白菜的基因组DNA,根据GenBank中orf138基因保守序列设计2对特异引物,对9份白菜基因组DNA进行PCR扩增,将扩增出条带的PCR产物进行测序,在NCBI中进行同源性比对,最终确定其不育胞质类型。结果表明：2对特异引物PI/PII和PIII/PIV只在4份白菜雄性不育基因中均扩增出条带,在另外5份材料中未扩增出条带,与田间育性鉴定相符,获得4份白菜Ogura胞质雄性不育的分子标记;在GenBank中用BLAST进行同源性比对分析,发现L1-CI、L3-CI、L3-F1 3个不育材料的特异片段与已报道的青花菜Ogu CMS所具有的Ogu orf138基因（Genbank登录号：HQ149728）同源度高达100%,L1-F1的同源度达99%,出现了一个变异位点,另外5份材料的胞质不育类型有待进一步研究。通过该方法鉴定出9份材料中有4份材料是萝卜胞质雄性不育的材料,得到了4条分子标记,该结果可为白菜细胞质雄性不育的分子鉴定提供了新的标记,也为今后利用分子标记辅助育种奠定了基础。     

大白菜TPS基因家族鉴定及其在高温胁迫下的表达分析

为明确大白菜TPS(BrTPS)家族成员信息及对高温胁迫信号的响应,本研究利用生物信息学方法,在大白菜基因组数据库中鉴定了BrTPS基因家族成员,并对其理化性质、进化特征、蛋白结构及在高温胁迫下的表达模式进行分析。结果表明,大白菜全基因组含有15个TPS基因家族成员,分布于8条染色体上。除BrTPS14和BrTPS15外,其余成员各含有1个TPS和1个TPP结构域,并且所含motif的排列顺序也完全一致。理化性质分析发现,15个成员的氨基酸长度介于129~1459 aa之间,分子量大小在14.73~165.83 kD之间,大部分BrTPS蛋白为酸性蛋白和亲水蛋白,以无规则卷曲作为二级结构主要构成元件。进化分析表明,大白菜TPS基因家族成员可分为2类,其中ClassⅠ包含5个成员,ClassⅡ包含10个成员。本研究对高温胁迫前后不同组织和持续高温胁迫下叶片中的表达分析,发现大部分的BrTPS基因可对高温胁迫产生响应,但在表达规律上存在差异。这些研究结果为后续研究大白菜TPS基因提供一定参考。     

不结球白菜(Brassica campestris ssp. chinensis Makino)种质资源SRAP遗传分化分析

利用SRAP分子标记分析了国内外64份不结球白菜种质资源的DNA遗传多样性和遗传分化。21对引物组合共检测出215个位点，其中112个为多态性位点，多态性比率达52.09%，平均每对引物组合产生10.24个位点和5.33个多态性位点。不结球白菜各类型中普通白菜的Nei’s基因多样性指数（0.1410）和遗传丰富度[(190) 88.37%]最高；各生态区域中江淮流域不结球白菜的Nei’s基因多样性指数（0.1451）和遗传丰富度[(185) 86.05%]最高；国内的Nei’s基因多样性指数(0.1293)和遗传丰富度[(188) 87.44%]分别高于国外。遗传变异估算表明，不结球白菜遗传分化系数58.22%，大部分变异存在于种群间；基因流为0.4031，说明群体间基因流动较少，遗传分化程度较高。以遗传相似系数0.872为截值，可把不结球球白菜分为Ⅵ个类群。     

大白菜SSR检测体系的优化

以不同地区栽培的5份大白菜品种为试材,从PCR反应组成、扩增程序、电泳检测等环节对SSR技术进行了优化,建立了一套适用于大白菜品种鉴定的SSR-PCR体系.即10 μL反应组成为:1×buffer;2.50 mmol/L MgCl2;0.10 mmol/L dNTPs;0.35 μmol/L SSR引物;1.00 ng/μL模板DNA和0.40 U Taq酶.适宜的扩增程序为72℃热启动3 min,94℃预变性2 min后进行20个迫降循环:94℃变性60 s,68℃退火60 s,72℃延伸45 s(-1℃ /2 cycles);再进行20个循环:94℃变性60 s,58℃退火60 s,72℃延伸45 s,72℃延伸10 min.应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶(银染)电泳检测并取得很好的效果.选用108对芸薹属SSR引物,对这5份品种的基因组进行扩增,筛选出具有2条以上特异扩增条带的SSR引物22对.用这些引物对5份品种进行扩增,初步分析了SSR标记的多态性及用于大白菜指纹分析的潜力.     

白菜黑腐病种子带菌检验方法的研究

研究结果表明,利用吸水纸种植法,白菜黑腐病种子带菌检验只需三步就能完成.1.子叶上“V”字形病斑的出现;2.病斑切开后有菌液渗出;3.在淀粉牛肉汁琼脂培养基上,发亮的淡黄色菌落周围有淀粉水解晕斑.与目前广泛应用的水琼脂种植检验法和洗涤检验法比较,此法经济、简便、有效.     

基因型和供体植株生长环境对大白菜游离小孢子胚胎发生的影响

１７个用于大白菜常规育种的基因型在ＮＬＮ－１３液体培养基中进行游离小孢子培养，结果有１６个基因型经由小孢子胚胎发生途径获得小孢子胚。这些基因型包括从早熟晚熟的各种类型。各基因之间在小孢子胚胎发生频率方面存在很大差异，产量最高的两个基因型Ｔ１１和ＣＣ１１，平均每百花蕾分别达３５９２８和３４１３２个胚。供体植株生长环境对小孢子胚胎发生具有明显影响；在１０／２０℃（液／昼）的部分控温温室生长的供体植株，     

Screening for resistance to black rot in a Spanish collection of Brassica rapa

Productivity and quality of crops of Brassica rapa L. in north‐western of Spain are highly affected by black rot, caused by the bacterium Xanthomonas campestris pv. campestris (Pammel) Dowson (Xcc). Several races of Xcc have been described in this area, being the race 6 the most frequent in B. rapa crops and races 1 and 4 the most frequent in B. oleracea crops. The control of the disease can be aided by the employment of resistant varieties. The aim of this work was to find sources of resistance to Xcc in a collection of open‐pollinated varieties of B. rapa from north‐western Spain. Resistance was evaluated in 191 landraces. Partial resistance to races 6, 1 and 4 and complete resistance to race 4 were identified in several landraces. Several accessions exhibited partial resistance to the three races. Sources of resistance were identified in landraces of different crops of the species (turnips, turnip greens and turnip tops). These landraces could be grown after selection for resistance or they can be donors of resistance genes in breeding programmes.     

紫菜苔色素的提取工艺研究

以紫菜苔为材料,研究紫菜苔色素的提取和纯化工艺,为紫菜苔色素的推广应用提供理论基础和试验数据。结果表明,水浴提取的最佳工艺条件:水浴温度90℃,水浴时间3.0h,水浴固液比1:5,提取率2.6%。微波提取的最佳工艺条件:微波时间5min,微波火力中高火,微波固液比1:5,提取率1.2%。     

大白菜CMS96细胞质雄性不育分子特性研究

大白菜CMS96细胞质不育系是由大白菜株系与甘蓝型油菜细胞质不育源杂交、多代回交后获得的。该不育系生长势旺、不育性稳定,不育度和不育株率均为100%,蜜腺正常,在大白菜杂种一代生产中具有广阔的应用前景。为了定位大白菜CMS96细胞质不育所属的类型和获得其不育有关的特异序列,依据atp9、coxI、orf138和orf224保守序列设计4对引物,对3组11份大白菜材料线粒体DNA进行PCR扩增,每组材料内包含同核异质PolCMS、OguCMS、CMS96三种大白菜不育系和一种共用保持系。结果表明,atp9和coxI引物在所有材料中均有扩增产物,供试材料间没有差异;而orf138和orf224引物扩增产物存在差异。orf138引物仅在全部OguCMS和CMS96不育系中扩增出309bp特异带,而保持系和PolCMS不育系没有扩增产物;orf224引物仅在所有PolCMS中扩增出689bp特异带,而保持系、OguCMS和CMS96不育系没有扩增产物。同时,对保持系和不育系花组织mRNA进行RT-PCR分析,进一步验证了orf138和orf224引物扩增产物的特异性和一致性。同源性分析结果表明,利用orf138引物所获得的309bp大白菜mtDNA特异片段均与萝卜OguCMS、甘蓝型油菜OguCMS萝卜体细胞杂种所具有的Oguorf138高度同源,二者有172个核苷酸完全相同,有58个氨基酸完全相同;orf224引物所获得的689bp大白菜mtDNA特异片段与甘蓝型油菜的Polorf224高度同源,二者有677个核苷酸完全相同,有225个氨基酸完全相同,同源性均达到100%。初步认为大白菜OguCMS和CMS96不育系具有相似性,OguCMS萝卜所具有的orf138是导致二者不育的原因;Pol甘蓝型油菜所具有的Polorf224是导致大白菜PolCMS不育的原因。     

春化天数对大白菜、小白菜现蕾和开花的影响

采用0，15，20，25，30d5种不同春化处理天数对5份大白菜和5份小白菜抽薹和开花的影响进行了研究。结果表明，对大白菜而言，冬性强的和较强的材料（B，D，E），春化时间以20d为宜，冬性弱的材料（A，C）以15d为佳，冬性强的材料初花天数为50d左右，冬性弱的材料为37d。对小白菜而言，春化天数以15d为佳，冬性强的材料初花天数为46d，其他为38d左右。春化天数长，开花略早，但差异不显著。在试验中，小白菜除J的冬性较强外，其他各材料冬性相差不大，不易分开，这可能与小白菜现蕾和开花需一定光照有关。可见小白菜在春化天数满足条件下，光照才是影响现蕾和开花的关键因子。     

大白菜混系品种初步研究

该文通过对2年6个大白菜混系品种试验结果分析，阐述了混系品种的增产效果及应用的可能性，并对混系品种的选配及增产的理论基础进行了初步探讨。     

聚乙二醇对白菜种子春化的影响

研究了ＰＥＧ（聚乙二醇）对白菜种子春化的影响，结果表明，无论是ＰＥＧ４０００或ＰＥＧ６０００，均以２００ｇ／Ｌ浓度最适，不仅能有效地抑制低温春化处理过程中胚根或胚轴的伸长，而且也不影响种子春化的效果，种子春化处理后室温下催芽１天能显著地提高播种出苗率，ＰＥＧ对不同白菜种类的种子春化均有良好的效果。     

不同有机生态型基质在上海青无土栽培上的应用研究

为探索菇渣与锯木屑替代草炭作为蔬菜基质栽培的可行性,采用草炭、菇渣、锯木屑和珍珠岩作为基质原料,并研究了不同原料配比在上海青无土栽培上的应用效果。研究结果表明:处理1(草炭:菇渣:锯木屑:珍珠岩=2:2:2:1)和处理5(草炭:菇渣:锯木屑:珍珠岩=4:2:2:1)两种基质配比的上海青植株生长形状均优于CK,处理1和处理5的根系活力、Vc含量均高于CK,硝酸盐含量均低于CK,处理1和处理5的叶绿素含量均高于CK。由此可见,采用菇渣、锯木屑和珍珠岩进行适当配比可研制出适合蔬菜种植的栽培基质,另外,处理1和处理5中的栽培基质可以作为上海青蔬菜栽培基质推广应用。     

白菜型油菜WRKY基因片段的克隆与表达分析

WRKY转录因子能广泛地参与植物的生物与非生物胁迫反应。为了研究WRKY转录因子在ABA诱导下的表达调控,首先利用同源克隆法在白菜型油菜中克隆WRKY基因和Actin基因片段, 用BLAST和DNAMAN软件对核酸及氨基酸序列进行分析;通过荧光定量PCR技术检测白菜型油菜WRKY基因在ABA处理条件下的相对表达趋势;然后利用相对定量PCR技术（real-time relative quantification PCR,以下简称RT-qPCR）检测WRKY基因在ABA(100 μM)诱导不同时段的差异表达。在白菜型油菜中克隆到一段中克隆到一段长度为680 bp的WRKY基因片段和一段长度为933 bp的β-actin基因片段。RT-qPCR实验结果表明,BcWRKY能被ABA诱导表达,且在诱导1 h后表达量最高。本实验文成功地克隆了白菜型油菜的WRKY转录因子基因和Actin基因片段,并证明了白菜型油菜WRKY基因的表达受ABA的影响。     

遵义县白菜不同配方施肥效果初探

为指导农户生产,进行了6个不同施肥量比较试验.结果表明：白菜施肥量为清粪水1500kg/667m2,尿素20kg/667m2,普钙50kg/667m2,氯化钾13kg/667m2,单产高,经济效益好,可在遵义县推广.     

Identification of stable maintainer and fertility restorer lines for 'Polima' CMS in Brassica campestris

‘Polima’ cytoplasmic male sterility (CMS) was transferred from ‘Polima’ Brassica napus ‘ISN 706’to five different cultivars of Brassica campestris (‘Pusa kalyani’, ‘Pant toria’, ‘Candle’, ‘Tobin’ and ‘ATC 94211′) by repeated backcrossing. It was observed that, while ‘Polima’ CMS manifested complete and stable male sterility in the nuclear backgrounds of ‘Pusa kalyani’, ‘Pant toria’, and ‘Tobin’, the cultivars ‘Candle’ and ‘ATC 94211’possessed the restorer gene for this CMS in the heterozygous condition. An analysis of F₁ and F₂ generations of ‘Polima’‘Pusa kalyani’בCandle’ and ‘Polima’‘Pusa kalyani’בATC 94211’ revealed that restoration is controlled by a single dominant gene. Identification of stable maintainers and restorers of ‘Polima’ CMS could facilitate the development of hybrid varieties in B. campestris.     

菜心核基因雄性不育系转育研究

以白菜核基因雄性不育系(简称核不育系)03S025为不育源,根据大白菜核基因雄性不育系“复等位基因遗传假说”设计转育方案,通过杂交、自交等方法,向菜心可育品系03S001(翡翠油青菜心)中转育核不育基因,获得了新的菜心100%核不育系及其相应的甲型两用系和临时保持系。     

十字花科蔬菜黑腐病菌（Xanthomonas campestris pv. Campestris）AFLP分析体系的建立及优化

以英国华威大学收集的十字花科蔬菜黑腐病菌野油菜黄单胞菌野油菜致病变种（Xanthomonas campestris pv.campestris）的6个生理小种菌株为材料,优化了该类菌种的AFLP分析体系包括DNA的提取、Mse I/EcoR I酶切时间、扩增反应体系的组成及染色方法等步骤,建立了一套适于该菌种的AFLP分析体系。该体系中各最优因素为：酶切体系为50 μL,模板DNA用量为600 ng,酶切体系中Mse I和EcoR I各加入5 U,酶切温度为37℃,反应时间为4~6 h;预扩增产物稀释10倍进行选择性扩增;检测方法为银染法,银染液中硝酸银含量为8 g/L且染色时间是15 min时效果最佳,该体系的建立为该类菌种的分子水平遗传多样性研究提供了技术支撑。     

中国白菜小孢子离体培养和双单倍体植株再生

摘 要: 采用略加修改的NLN培养基（无机大量元素1/2）和甘蓝型油菜小孢子的胚状体诱导方法,培养了5个中国菜用小白菜品种和1个中国大白菜品种的小孢子,进行了双单倍体的诱导。结果表明,不同品种的小孢子产胚量差异很大,在接种的6个基因型中,有5个诱导出胚,诱导成功率83.33％ 。其中的中萁青抗热605产胚量最高,是8.676个胚／10蕾。这些胚在添加了NAA和PP333（多效唑）的B5培养基发育成健壮的小植株。关于6个基因型的小孢子胚胎发生能力,还有待进一步研究。