阿魏侧耳的栽培技术

阿魏侧耳的栽培技术陈忠纯（福建三明真菌研究所，三明市，３６５０００）１前言阿魏侧耳（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｅｒｙｎｇｉｉ或Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓｆｅｒｕｌａｅ），又名阿魏蘑菇，是近年来驯化栽培成功的一个侧耳属新种。野生阿魏蘑菇产于我国的新疆，是典型的荒漠、半...     

阿魏侧耳的研究

1、概述阿魏侧耳[Pleurotus eryngii(Dc.ex Fr.)Quelet]又名阿魏蘑菇,是干旱草原上大型真菌的代表种。它在我国仅分布在新疆的伊犁、塔城、阿勒泰和木垒等地区。在国外,广泛分布在南欧、中非和北非,包括摩洛哥、中非、法国、西班牙、土耳其、捷克、匈牙利及苏联南部地区;同我国近邻的印度克什米尔地区也有分布。在我国,阿魏侧耳主要寄生或腐生在伞形科阿魏属(Ferula)植物上;在欧洲,阿魏侧耳还寄生在伞形科植物刺芹(Eryngiun compestre)上,因而又叫刺芹平菇。     

苜蓿根瘤菌优良菌株的选育

苜蓿是一种营养丰富,含蛋白质高的优良牧草,适应性强,抗旱,抗寒能力强,而且耐盐碱,产量高,不仅是各类家畜的优质饲料,也是很好的绿肥作物。为了提高它的产量,选育出适于新疆自然条件下侵染力强,固氮活性高,适应性广的优良菌株,我们在1988年做了苜蓿根瘤菌优良菌株的选育。     

苏云金杆菌高毒力菌株4．0718的快速选育

从湖南省不同生态区域的旱作地，果园和稻园采集的858份土样中，分离筛选出苏云金杆菌30株。选取一株具典型苏云金杆菌菌落特征和较高杀虫毒力的菌株701^2c为出发菌株，经紫外线和两次亚硝基胍的交替复合诱变，显微涂片染色镜检，发现菌体的伴孢晶体的形状、大小、数量及芽孢与伴孢晶体的比例与杀虫菌株4．0718。该突变株杀虫毒力与原始菌株相比提高了7．5倍，在6、12和24h内供试小菜蛾三龄幼虫死亡率分别高达20％、97％和100％。此菌株的高效速效杀虫毒力经连续10代培养能稳定遗传。     

中生菌素高产菌株的选育

通过中生菌素高产菌株初筛研究，得到在培养基的ｐＨ值为７．０时，菌落琼脂柱对指示菌抑制圈的大小与其产素量成正相关；在此基础上，比较了用紫外线处理、低温和紫外线复合处理、原生质体加紫外线复合处理及原生质体融合等４种育种方法，结果所用方法都能有效地提高中生菌素产生菌的效价，其中原生质体加紫外线处理的方法最佳。最终得到了４株高产菌株，产素量比亲株提高了５０％￣９０％，达到５０００￣６５００μｇ／ｍＬ。     

苏云金杆菌无芽孢突变菌株的选育

采用亚硝基胍、紫外线等处理苏云金杆菌HD-1和7216菌株,获得8663,8714、87085 3株无芽孢突变菌株。分别进行摇瓶试验,并将8663进行7吨发酵罐试验,证明该菌株的发酵性能与原出发菌株基本相当。采用B(?)制剂标准化的程序进行生物测定,效价基本稳定。     

卵孢白僵菌优良菌株的筛选和选育

从不同地区采集并分离到卵泡白僵菌菌株１７个，其中菌株Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｌｅｎｅｌｌａ２４－１对大黑鳃金龟幼虫室内致病力高达７３．３％。通过单孢分离、紫外线照射分生孢子和原生质体的诱变方法，获得了比出发菌菌株Ｂ．ｔｅｎｅｌｌａ２４－１产孢量高２倍以上，毒力提高０．５４－１．７９倍的优良菌株４个。     

卵孢白僵菌优良菌株的筛选和选育

从不同地区采集并分离到卵孢白僵菌菌株１７个，其中菌株Ｂｅａｕｖｅｒｉａｔｅｎｅｌｌａ２４一１对大黑鳃金龟幼虫的室内致病力高达７３．３％。通过单孢分离、紫外线照射分生孢子和原生质体的诱变方法，获得了比出发菌株Ｂ．ｔｅｎｅｌｌａ２４一１产孢量高２倍以上，毒力提高０．５４～１．７９倍的优良菌株４个。     

高毒力杀虫真菌基因工程菌株选育的进展与方向

病原真菌主要通过体壁侵染昆虫,在害虫防治中具有重要作用.利用昆虫病原真菌研制杀虫真菌农药的主要技术难点是选育高毒力杀虫真菌工程菌,本文综述了高毒力杀虫真菌工程菌构建技术的现状和菌株选育的进展,分析了其中存在的问题.根据昆虫病原真菌致病机制、害虫新靶标发现等方面的研究进展,提出了高毒力杀虫真菌工程菌选育技术的发展方向.     

多杀菌素高产菌株的选育

采用原生质体紫外诱变、等离子束辐射、^60Co-γ射线等诱变处理，对多杀菌素产生菌出发菌株C121进行诱变，通过菌块一薄层层析法初筛、摇瓶发酵复筛和终筛，最终获得产素水平比出发菌株提高174％的高产菌株Co329。经HPLC测定其发酵效价达1260μg／ml。     

生防放线菌ZZ-9耐药菌株的微波诱变选育

为了获得耐甲基硫菌灵的菌株, 采用微波诱变法对放线菌ZZ-9菌株进行0～75 s的处理,筛选出在甲基硫菌灵致死浓度下仍能较好生长的突变菌株,并测定其对苹果树腐烂病菌拮抗性和传代稳定性的影响,选育出性能优良的耐药菌株,与甲基硫菌灵协同作用进行防治苹果树腐烂病试验。结果表明,在微波辐照15～60 s条件下,获得4株耐70 μg·mL^-1甲基硫菌灵的突变菌株ZZ-9A、ZZ-9B、ZZ-9C和ZZ-9D。通过对4株突变菌株进行抑菌率和传代稳定性测定,筛选出一株抑菌率较好且传代稳定的突变菌株ZZ-9B。菌株ZZ-9B与70 μg·mL^-1甲基硫菌灵协同作用测定表明,当菌株ZZ-9B与甲基硫菌灵配比为8∶2时,在离体枝条上对苹果树腐烂病的协同防效为89.42%,明显高于单独使用突变菌株和甲基硫菌灵的防效。因此,在使用菌株ZZ-9B来防治苹果树腐烂病时,添加少量的甲基硫菌灵,可显著提高防效。     

利用原生质体融合技术选育农抗120高产菌株及应用的研究

利用TF-120和KT-739菌株理化特性相似、抗性互补、届者生长速度快等特点,进行了原生质体的形成、再生及其融合的研究,从近千个融合子中选育出一株FR-220。经鉴定,确认FR-220为农抗120高产菌株。工厂中试结果,其发酵单位可以提高一倍,由6000～8000μg/ml增加到14000～17000lμg/ml,相当于生产成本降低一半。1988-1089年田间防治瓜果蔬菜上的白粉病、炭疽病、枮萎病,试验示范面积2000亩,防效达70～90％,增产20～25％,扩大推广20万亩。     

嘧肽霉素高产菌株的选育

以不吸水链霉菌辽宁变种为出发菌株,经紫外线、亚硝酸诱变和紫外线与嘧肽霉素复合诱变,选育出了嘧肽霉素的高产菌株,抑菌圈直径由原来的20.5mm提高到36.4mm。传代培养5代表明,该高产菌株遗传特性稳定。     

对小猿叶甲高毒力烟曲霉菌株的选育技术

大猿叶虫（Colaphellus bowringi Baly）和小猿叶虫（Phaedon brassicae Baly）均是南方十字花科蔬菜主要害虫之一,宁波地区8—11月,其在十字花科蔬菜上为害比菜青虫（Pieris rapae）、小菜蛾（Plutella xylostella）严重。目前十字花科蔬菜上大量应用的生物农药Bt、阿维菌素对菜青虫、小菜蛾具较好防治效果,但对大、小猿叶虫基本无效。大、小猿叶虫的发生规律同菜青虫、小菜蛾不一样,幼虫、成虫常常隐蔽在蔬菜的根部、菜心和土中,菜农只能依靠多次喷化学农药如毒死蜱＋敌敌畏控制它们的危害。我们从田间筛选到女贞潜叶甲生曲霉菌株,经初步鉴定为烟曲霉（Aspergillus fumigatus vat．fumigatus）（暂称叶甲生烟曲霉）。室内试验后发现,该菌株培养液能使大、小猿叶虫幼虫、成虫,女贞潜叶甲（Argapistes tsekooni）幼虫、菜青虫幼虫和夜蛾的幼虫发病死亡。通过化学、物理诱变选育对害虫的高毒力菌株已有报道。我们利用物理诱变和化学诱变方法选育对大、小猿叶虫有高毒力的烟曲霉菌株。现将结果报道如下。     

N~＋注入选育高毒力球孢白僵菌菌株及对3种油茶害虫的毒力测定

以低能氮离子注入（N＋）作为诱变手段对球孢白僵菌进行诱变,并对3种油茶主要害虫进行了毒力测试。结果表明：不同剂量的氮离子注入后白僵菌存活率呈＂马鞍曲线＂,其峰值即150×1013ions.cm-2为诱变最佳剂量。氮离子注入对白僵菌的菌落形态、产孢量、孢子萌发率等生长特性均有影响,通过产孢量、Pr1蛋白酶活和几丁质酶活指标筛选我们得到3株优良菌株,其中BbⅢ22菌株的Pr1蛋白酶活和几丁质酶活分别达0.230、0.137（OD值）,为出发菌株的近2倍水平。BbⅢ22菌株对油茶叶蜂、油茶毒蛾有较强的致病力,在孢子浓度为107孢子.mL-1时,致死率达到了80%以上,而对油茶象甲的致死率相对较弱为60%左右。对油茶叶蜂、油茶毒蛾和油茶象甲的LD50对数浓度分别为5.2960、5.6347、6.3555。     

石榴干腐病生防菌株Z2的鉴定及其培养条件的优化

 从石榴根际土壤中分离获得一株生防细菌菌株Z2。根据16S rDNA、gyrA 基因序列分析和特定基因的选择性扩增,结合形态学、生理与生化特性鉴定和Biolog 检测,将生防菌株Z2鉴定为解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。通过单因素试验研究菌株的培养条件,并经过正交实验设计对培养条件进行优化,探究生防菌对Zythia versoniana引起的石榴干腐病的防治效果。生防菌株Z2的优化培养条件为:温度27℃,pH =6或8,LB培养基,培养时间3 d。采用新鲜离体石榴果实针刺接种方法进行菌株生防效力检测,与其他供试植物病原真菌相比,菌株Z2对石榴果实干腐病菌Z. versoniana具有较强的抑菌活性,对石榴果实干腐病的病斑抑制率达31.27%~81.89%。本研究获得的生防菌株Z2对石榴干腐病生物防治具有开发应用潜力,优化的培养条件可为该生防菌的产业化和大田应用奠定基础。另外,菌株Z2对植物病原真菌有较宽的抑菌谱,表明该菌株对其他作物病害的防治也具有潜在的应用价值。     

菌株CSR-2对玉米茎腐病的生防作用及其全基因组序列分析

本研究从玉米根际土壤中分离获得一株具有良好生防效果的细菌菌株CSR-2,该菌株对多种植物病原真菌均具有拮抗作用,抑制禾谷镰孢菌丝生长、形态及孢子萌发.将菌株CSR-2与玉米膜下滴灌水肥药一体化技术联用田间试验表明,该菌株对玉米茎腐病的防治效果为52.3％,可显著降低玉米茎腐病的田间发病率.利用第三代PacBio测序技术...     

2个海洋生境微生物菌株产生的次生代谢产物协同抗菌作用初探

 海洋微生物由于其资源优势是目前海洋生物开发利用研究的热点,其代谢产物的抑菌作用是目前研究较集中的领域,不少报道证明,海洋微生物能产生活性高、结构新颖的次生代谢产物^[1,2]。但海洋微生物产生的次生代谢产物在菌株发酵液中含量少,导致直接利用的抗菌物质效价较低,而其原始生境的寡营养,又较难通过营养条件改善来提高抑菌活性,影响了后续的研究工作,这是目前海洋微生物开发利用急待解决的问题。本课题组将通过离体抑菌测试和植物活体测试筛选出2个海洋微生物菌株,在菌株单独发酵条件优化的基础上,对2个菌株的协同作用进行了探索性的研究。