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牛体外受精早期胚胎与小鼠胎仔成纤维细胞共培养的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
探讨了人工合成培养液CR1aa和小鼠胎仔成纤维细胞对牛体外受精早期胚胎体外发育的影响。结果表明,牛体外受精卵在CR1aa液中的卵裂率达76.2%,8细胞胚的比率达44.8%。小鼠胎仔成纤维细胞能够显著促进牛体外受精的早期囊胚以上胚胎的发育。牛体外受精后第5、6天的早期胚胎分别与小鼠胎仔成纤维细胞共培养,在受精后第7天发育至囊胚以上的比率分别达19.8%和24.6%;受精后第8天,孵化的囊胚比例分别达5.2%和7.5%。实验表明,受精后第5、6天的牛体外受精早期胚胎与小鼠胎仔成纤维细胞共培养,可显著提高扩张囊胚和孵化囊胚数量。小鼠成纤维细胞对胚胎发育的支持作用取决于胚胎发育阶段 相似文献
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小鼠桑椹胚简易玻璃化冷冻技术再探讨 总被引:12,自引:0,他引:12
本试验继小鼠扩张囊胚玻璃化冷冻保存成功后,在室温(25℃)下利用不同浓度的EFS玻璃化溶液,对小鼠的桑椹胚简易玻璃化冷冻技术进行再探讨。结果是胚胎在10%EG溶液中预先处理5分钟,再移入事先配置好含有EFS30的0.25ml塑料细管中1分钟平衡后直接投入液氮中冷冻,解冻后获得的发育率最高(94%)。冻胚移植后妊娠率和产仔率分别为56%(9/16)及42%(49/116)。与对照组相比差异不显著(P>0.05) 相似文献
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为探究开放式拉长细管(OPS)玻璃化冷冻对四倍体胚胎发育的影响,本实验利用2-细胞胚胎电融合法制备四倍体胚胎,再对四倍体胚胎进行OPS玻璃化冷冻,分别观察记录二倍体胚胎、四倍体胚胎以及冷冻解冻后四倍体胚胎的发育情况。结果表明:2-细胞胚胎电融合效率为96.1%;二倍体胚胎组与电融合后四倍体胚胎组的囊胚率和孵化囊胚率差异不显著;冷冻解冻后四倍体胚胎的囊胚率(100%)与四倍体新鲜组(93.3%)差异不显著,其孵化囊胚率(72.3%)较新鲜组(64.9%)显著增高(P<0.05);四倍体冷冻解冻组的囊胚细胞数(31.96)与新鲜组(32.54)无显著差异;冷冻解冻后的四倍体早期囊胚进行体外培养时其发育速度比对照组更快。可见,冷冻对小鼠四倍体胚胎的囊胚率和囊胚细胞数均无显著影响,但孵化囊胚率显著提高,且OPS玻璃化冷冻后使四倍体胚胎的发育速度更快。 相似文献
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探讨程序化冷冻与玻璃化冷冻对小鼠GV期卵母细胞及二细胞期胚胎的复苏率及其发育潜能的影响。通过小鼠的卵母细胞与早期胚胎的不同冷冻方法的比较,为后续阿旺绵羊的胚胎冷冻保存提供参考。采用程序化冷冻与玻璃化冷冻技术,分别冷冻小鼠GV期卵母细胞及二细胞期胚胎,复苏后培养,比较不同冷冻处理后的复苏率、成熟率与囊胚率。小鼠GV期卵母细胞程序化冷冻复苏率(48.00%±5.29%)显著低于玻璃化冷冻复苏率(65.00%±5.00%),有统计学差异(P=0.0147<0.05);而程序化冷冻后复苏卵母细胞的发育成熟率略高于玻璃化冷冻组,但无统计学意义。小鼠二细胞期胚胎程序化冷冻组复苏率(76.00%±2.00%)显著高于玻璃化冷冻组复苏率(70.00%±2.00%),有统计学差异(P=0.0213<0.05);冷冻后复苏胚胎发育的囊胚率程序化冷冻略低于玻璃化冷冻及对照组,但无统计学意义。 相似文献
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影响玻璃化冷冻兔胚胎效果的一些因素 总被引:4,自引:0,他引:4
试验对影响玻璃化冷冻兔胚胎效果的一些因素进行探讨,以找出理想的玻璃化冷冻方法。在测试的5种玻璃化溶液中,含35%乙二醇(EG)和1.0mol/L蔗糖的溶液(VS1)对胚胎的毒性最小。用VS1冷冻桑椹胚和囊胚的理想程序是:在室温下使胚胎分别在20%EG和35%EG中平衡2、3分钟后,移入VS1中,0.5分钟内(囊胚也可在2分钟后)投入液氮中冷冻。桑椹胚的存活率为91.7%(33/36),囊胚的存活率为97.1%(33/34)~97.3%(36/37)。8~16细胞胚胎的理想冷冻程序为:在室温下使胚胎在20%EG、35%EG中平衡2、3分钟,移入4℃的37%EG+1.0mol/L蔗糖溶液中平衡2分或10分钟后冷冻,胚胎存活率分别为100%(37/37)、86.1%(31/36)。 相似文献
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为了研究玻璃化冷冻后小鼠胚胎线粒体的损伤,试验将V1冷冻的囊胚和V2冷冻的扩张囊胚解冻后在体外进行培养,分别在培养0,4,8,12,18,24 h后观察线粒体的损伤情况.结果表明:无论是用V1还是用V2对胚胎进行玻璃化冷冻,线粒体的正常聚集率随着培养时间的延长均呈现出下降的趋势;V1冷冻的囊胚在培养0,4 h后的线粒体正常聚集率极显著高于培养8,12,18,24 h后的正常聚集率(P<0.01),V2冷冻的扩张囊胚在培养0 h后线粒体的正常聚集率极显著高于培养4,8,12,18,24 h后的正常聚集率(P<0.01). 相似文献
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牛体外受精胚冷冻保存的研究 总被引:9,自引:0,他引:9
对牛卵泡卵母细胞体外受精(IVF)168h的致密桑椹胚、囊胚用常规快速冷冻法、预冷和不预冷的超快速冷冻法进行了冷冻保存试验。结果表明:IVF囊胚采用含10%甘油的常规快速冷冻法、含2.1mol/L甘油和0.25mol/L蔗糖预冷5min的一步冷冻法及含25%甘油和25%乙二醇预冷5min的玻璃化冷冻法等3种方法进行冷冻保存,解冻后的继续发育率(68.0%,59.0%,65.7%)均无显著差异(P>0.05),可用快速、简便、预冷的一步冷冻法或玻璃化冷冻法替代常规快速冷冻法;IVF致密桑椹胚可用一步冷冻法(2.1mol/L甘油+0.25mol/L蔗糖)和玻璃化冷冻法(25%甘油+25%乙二醇或25%甘油+25%1,2-丙二醇)进行预冷的超快速冷冻保存;冻前预冷(5min)能显著提高IVF囊胚的冻后形态正常率和继续发育率(P<0.05);IVF囊胚冷冻—解冻后的继续发育率高于IVF致密桑椹胚。 相似文献
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牛体外受精胚胎卵裂阶段对其体外发育能力影响的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
将经过体外成熟培养(IVM)、体外受精(IVF)后获得的牛早期胚胎,按其所处卵裂阶段的不同,划分为2细胞、3~4细胞和5细胞以上3个试验组,在体外条件下继续培养到发育囊胚和孵化囊胚阶段,以观察在胚胎早期,受精卵裂发育的快慢与其后胚胎所获得的继续发育能力的关系。结果显示,牛早期胚胎体外囊胚发育率的高低,与其在体外培养(IVC)前卵裂发育的快慢成正比。在IVF后42~46h处于2细胞、3~4细胞和5细胞以上卵裂阶段的早期胚胎,其囊胚发育率分别为6.5%、21.4%和44.9%,差异非常显著(P<0.001);而经过7~9d的IVC后仍滞留在IVC前原卵裂阶段,丧失继续发育下去能力的胚胎比率则分别为51.6%、32.7%和25.7%,与其IVC前卵裂发育的快慢成反比。在IVF后66~70h仍处于2细胞和3~4细胞卵裂阶段的早期胚胎,其体外发育能力明显降低,囊胚发育率只有1.3%和8.2%;而滞留胚胎率则分别高达90.9%和59.4%。结果表明,牛体外受精早期胚胎卵裂发育的快慢,直接影响到其后体外发育的能力。 相似文献
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《中国畜牧杂志》2016,(9)
卵母细胞玻璃化冷冻导致的胚胎发育阻滞与其DNA甲基化模式的异常密切相关。本研究以小鼠为模型,旨在探讨玻璃化冷冻对卵母细胞及其形成的早期胚胎中DNA甲基转移酶(DNMTs)表达模式的影响。采用免疫荧光染色结合激光共聚焦显微成像技术检测了DNMT1、DNMT3A和DNMT3B在新鲜和冷冻卵母细胞及其形成的各阶段早期胚胎中的表达与分布,结果表明:在卵母细胞及受精后的合子中冷冻组3种DNMTs的表达均出现了异常。采用实时定量PCR技术检测了新鲜和冷冻卵母细胞及其形成的囊胚中,Dnmt1、Dnmt3a和Dnmt3b的m RNA表达水平,显示在冷冻卵母细胞中3种Dnmts的表达水平均显著下降,至囊胚阶段Dnmt3b的表达水平仍然很低(P0.05)。研究结果表明卵母细胞玻璃化冷冻导致了小鼠早期胚胎发育过程中DNMTs表达模式的异常,这可能是DNA甲基化异常的重要原因之一。 相似文献
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实验比较不同发育天数所得的早期囊胚和扩张囊胚的冷冻效果,以期找出冷冻前胚胎最佳发育时期及囊胚类型。以猪孤雌激活胚胎为材料,分别取培养到第5、6、7天所得的早期囊胚(EB)和扩张囊胚(B)进行玻璃化冷冻保存,解冻后对其复苏率和内细胞团数损伤进行观察和统计。结果表明:发育第5天所获早期囊胚和扩张囊胚复苏率(32.26%、44.78%)好于第6天(22.45%、35.09%)和第7天(8.33%、32.65%),各发育天数所获扩张囊胚复苏率差异不显著(P>0.05),发育至第5天和6天的早期囊胚复苏率显著高于第7天(P<0.05);在内细胞团损伤比例上,虽各组差异不显著(P>0.05),但第5天和第6天组损伤低于第7天组。结果提示,在孤雌激活后第5天选取扩张囊胚进行冷冻,解冻后所得冷冻效果好。 相似文献
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近17年来,采用建立起来的牛非手术采卵及冷冻方法,已能将牛桑葚胚和囊胚冷冻,并获得较高的存活率。现在试验中和商业上牛胚胎冷冻大多数是采取控制降温和解冻的程序。解冻后存活率按形态评定可达90%~100%,非手术移植的妊娠率为60%。绵羊、山羊和马的桑葚胚和囊胚用控制降温和解冻程序也能有效的冷冻。简化的控制降温和解冻程序的一步法用于牛胚胎,妊娠率可达50%。此法免去了解冻后较繁琐的脱除冷冻保护剂和胚胎评定过程。玻璃化法和快速冷冻法是较先进的方法,可大大缩短胚胎冷冻时间,而且无需复杂的冷冻设备。不过,迄今家畜胚胎冷冻的结果还是有待提高的,尽管牛、绵羊、山羊桑葚胚和囊胚用玻璃化法冷冻已经成功,移植后产了仔。另外,卵母细胞、早期胚胎、显微手术(切割、克隆、活组织检查)后的胚胎、猪胚胎冷冻成功率还很低。因此,为使胚胎移植技术能在生产中应用和开展胚胎显微操作、体外受精、克隆和基因转移之类生物技术的试验及应用,很有必要加强研究建立起更为有效的胚胎冷冻解冻方法。 相似文献
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在25℃室温和37℃恒温台条件下,利用玻璃化冷冻溶液EFS30、EFS40、EDFS30或EDFS40,对小鼠4-细胞胚胎进行玻璃化冷冻保存.以解冻后培养72h的囊胚发育率为其体外发育能力的考核指标,同时对解冻后培养1~3h的胚胎进行移植以判定其体内发育潜力。开放式拉长塑料细管(OPS)二步法冷冻保存,即胚胎首先移入预处理液(10%EG或10%EG+10%DMSO)中平衡30s,再移入玻璃化溶液中洗涤后吸入OPS管中,分别经35、30或25s后直接投入液氮中冷冻保存。一步法冷冻保存则无需预处理液处理。结果表明,小鼠胚胎4-细胞一步法和二步法冷冻后囊胚最高发育率分别为87.7%和88.6%,与对照组(93.0%)差异不显著(P〉0.05)。利用最佳冷冻组获得的143枚胚胎移植于12只假妊娠50~60h的受体母鼠,结果有4只妊娠产仔17只,妊娠产仔率为42.5%(17/40),与对照组59.4%(19/32)差并不显著(P〉0.05)。 相似文献
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采用常规冷冻法冷冻保存圭山山羊桑椹胚、囊胚、扩张囊胚期胚胎,解冻后体外发育率分别为41.94%、67.50%、84.09%,桑椹胚与囊胚、扩张囊胚间差异显著(P<0.05),囊胚和扩张囊胚间虽无显著性差异(P>0.05),但扩张囊胚体外发育率高于囊胚.在胚胎的冷冻-解冻过程中,桑椹胚、囊胚、扩张囊胚的透明带受损伤率分别为6.45%、20.00%、31.82%,透明带受损的桑椹胚、囊胚、扩张囊胚体外发育率分别为0%、50.00%、78.57%.初步说明发育程度越高的胚胎,在冷冻-解冻过程中其透明带越易受到损伤,但随发育程度的加深,胚胎生长发育时对透明带的依赖程度也变得越来越弱,表明圭山山羊早期扩张囊胚最适宜进行冷冻保存. 相似文献
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探讨了胚胎分割前后冷冻和不同时期的冷冻胚胎对水牛胚胎分割效果的影响。结果:冷冻后分割组的分割成功率与分割后冷冻组差异不显著(71.39%vs 71.43%,P>0.05),但囊胚冷冻后分割组的半胚发育率显著高于分割后冷冻组(58.33%vs 47.14%,P<0.05);扩张囊胚的冷冻存活率显著高于孵化囊胚(94.84%vs 79.01,P<0.05),但囊胚与孵化囊胚差异不显著(92.67%vs 79.01%,P>0.05),囊胚、扩张囊胚和孵化囊胚冷冻胚胎的分割成功率(70.76%,73.22%,70.92%)及半胚发育率差异均不显著(53.07%,51.49%,57.99%)(P>0.05)。上述结果说明,水牛囊胚冷冻后分割比分割后冷冻能获得更高的半胚发育率;水牛未扩张囊胚和扩张囊胚的冷冻存活率比孵化囊胚高,且这3个时期的冷冻胚胎均适合分割。 相似文献