雏鸡贝氏隐孢子虫人工感染试验

作者对69只2日龄雏鸡进行了隐孢子虫的人工感染试验。试验分3组,每只口服贝氏隐孢子虫钝种卵囊分别为1.73×10~7、8.5×10~6和1.94×10~6个。于接种后第3天粪便中首次出现卵囊,第9—17天为排卵囊高峰期,排卵囊可长达35天。人工感染隐孢子虫后雏鸡的严重发病与死亡多见于接种后第14—21天。临床上出现严重的呼吸道症状。主要表现为:呼吸严重困难、气喘、伸颈、张口呼吸和打喷嚏。病鸡精神沉郁,眼半闭,翅下垂,站立不稳或独卧一侧,严重者则饮、食欲废绝,并于发病后2—3日内死亡,共死亡35只,死亡率为50.8%。病理剖检可见喉头与气管水肿,渗出物增多。有时气管内可见到块状的纤维素性渗出物,严重者在气管内形成一灰白色的凝固物。肺充血发炎、表面湿润,泡沫状渗出物增多。肺腹侧多有灰白色硬斑,气囊混浊,渗出物增多。肾灰白色肿胀。刮取气管及法氏囊粘膜作成涂片,经染色后可见到大量各发育期的隐孢子虫虫体。病理组织学观察可在喉头、气管、肺脏、直肠、泄殖腔及法氏囊粘膜表面找到大量的球形虫体。用透射电镜及扫描电镜观察发现鸡隐孢子虫均寄生在粘膜上皮细胞的表面,并不进入上皮细胞内部。在虫体寄生部位的粘膜绒毛层受害严重,大量上皮细胞脱落和破损,呼吸道有明显的炎性病变。     

鸭源贝氏隐孢子虫对鸡的致病性

设计3个不同剂量的鸭源隐孢子虫试验感染2日龄雏鸡,通过临床症状、增重、排卵囊规律和法氏囊指数及寄生器官组织扫描电镜观察,证实贝氏隐孢子虫160万个卵囊感染即可引起明显的呼吸道症状,发病鸡增重显著降低,法氏囊严重萎缩。贝氏隐孢子虫致病程度和排卵囊规律与感染剂量相关,主要病变表现呼吸道病变和法氏囊炎症。     

贝氏隐孢子虫内生发育虫体的扫描电镜观察

贝氏隐孢子虫内生发育各阶段虫体寄生于气管和法氏囊的微绒毛丛中 ,鸭对贝氏隐孢子虫的易感性低于鸡和丝毛乌骨鸡。滋养体呈球形 ,平均直径 1 3μm ;typeⅠ裂殖体 ,平均直径 2 4μm～ 3 0 μm ,内含 8个裂殖子 ,呈逆时针旋涡状或呈桔瓣状排列 ;typeⅡ裂殖体内含 4个裂殖子 ,两种类型裂殖体的裂殖子之间填充着颗粒状残体并包围着一个大的球形残体。成熟裂殖子逸出的方式分为 4种类型。裂殖子大小为 3 0× 0 6 μm ,呈香蕉形。大配子体呈球形直径 3 3μm～ 4 2 μm ,小配子体直径为 3μm～ 3 6 μm。小配子呈子弹状 ,大小为 1 2 μm× 0 3μm ,并观察到成熟小配子的释放方式。带虫空泡可分为无球形残体和有球形残体两类 ,根据观察结果推测带虫空泡基部的梳状结构不具备营养器官的功能 ,营养器官应为带虫空泡的底部     

消毒剂对贝氏隐孢子虫卵囊活力影响的初步研究

隐孢子虫病(Cryptosporidiosis)是寄生在脊椎动物的呼吸道和胃肠道粘膜上皮微绒毛区的单细胞原虫病。严重时可导致畜禽死亡,所以近年来引起了人们的重视。隐孢子虫卵囊的抵抗力很强,很多消毒剂不能将其杀灭。Sundermann曾尝试用9种常用的消毒剂进行杀灭卵囊研究,结果发现对其影响很小或无影响。陈业矫等亦报道隐孢子虫卵囊对碘酊、次氯酸苄可尼、氯化苄可尼、氢氧化钠液具有很强的抵抗力。因而,卵囊的杀灭是防治隐孢子虫病一个不可忽视的大问题。为了寻找有效的消毒剂,作者选择了一些国内新近研制使用的消毒剂,和一些较常用的消毒剂,进行了对贝氏隐孢子虫卵囊活力影响的研究,旨在为商品化养鸡提供有效的消毒方法,保障环境免遭污染和促进养鸡业的发展。     

贝氏隐孢子虫单克隆抗体的研究

作者采用杂交瘤技术获得两株分泌贝氏隐孢子虫特异性抗体的杂交瘤细胞－２Ｈ１１和２Ｃ７，经３～４次克隆化后，阳性率均达１００％。染色体数分别平均为９４和９５。经分析，两株单克隆抗体识别抗原分子区的相关位点，为今后进行贝氏隐孢子虫的诊断及免疫学研究奠定了基础。     

不同禽源贝氏隐孢子虫分离株对雏鸡致病性比较研究

为研究不同禽源贝氏隐孢子虫对雏鸡的致病性差异,人工感染3日龄雏鸡鸡源、鸭源、鹌鹑源、白文鸟源贝氏隐孢子虫.结果发现,各感染组雏鸡潜隐期均为4d,显露期为11～18 d,均未发生死亡,但其增重均受影响.鸡源C.baileyi(林州株)、C.baileyi(郑州株)和鸭源C.bailey(郑州株)感染组雏鸡临床症状较为明显,发病率较高,分别为71.4％、85.7％和77.1％,剖检可见气管有较多粘液分泌物,法氏囊粘膜充血肿胀,平均增重较不感染对照组分别减少34.5、53.1和19.7 g；鹌鹑源C.bailey(武陟株)和白文鸟源C.bailey(郑州株)感染组雏鸡仅部分表现轻微临床症状,发病率分别为31.4％和28.6％,平均增重较不感染对照组分别减少39.7和43.1g.结果表明不同禽源C.bailey对雏鸡均有不同程度的致病性,以鸡源和鸭源C.baileyi致病性较强.     

不同禽源贝氏隐孢子虫分离株对鹌鹑致病性的比较研究

本研究旨在观察不同禽源贝氏隐孢子虫(Cryptosporidium baileyi)对鹌鹑的致病性差异。采用光镜、扫描电镜等技术研究了鸡源、鸭源、鹌鹑源、白文鸟源、鸵鸟源贝氏隐孢子虫分离株对10日龄鹌鹑的致病性。结果表明,感染鹌鹑均出现腹泻和呼吸道症状,排卵囊持续期11~18 d,虫体寄生于喉头、气管、法氏囊和泄殖腔。其中鸭源C.baileyi感染组鹌鹑发病率和死亡率分别为82.5%、25%,鸡源C.baileyi(郑州株)感染组发病率和死亡率分别为77.5%、12.5%,鹌鹑源C.baileyi感染组发病率、死亡率分别为37.5%和17.5%。本研究结果提示,不同禽源C.baileyi对鹌鹑有一定致病性,其致病性强弱存在差异。     

贝氏隐孢子虫对丝毛乌骨鸡的致病性试验

２ 日龄丝毛乌骨鸡经口接种贝氏隐孢子虫（ Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｂａｉｌｅｙｉ）卵囊２×１０６ 个／只,潜隐期４ｄ,排卵囊开放期１８ｄ,排卵囊高峰期为感染后（ Ｐ Ｉ Ｄ）７～１４ｄ。呼吸道症状出现于 Ｐ Ｉ Ｄ１０,死亡率为１３３％ （２／１５）。扫描电镜观察发现气管纤毛脱落,寄生有各阶段发育虫体及杆形细菌和渗出的红细胞;法氏囊也寄生有大量虫体,粘膜上皮细胞肥大,微绒毛脱落, Ｐ Ｉ Ｄ２０ 在法氏囊粘膜表面见有许多虫体逸出后留下的带虫空泡。试验证明丝毛乌骨鸡为贝氏隐孢子虫的新宿主。使用扫描电镜系统观察了贝氏隐孢子虫感染引起的组织形态学病理变化。     

2株贝氏隐孢子虫鸡源分离株对雏鸡的致病性比较

为了解不同地区鸡源贝氏隐孢子虫的致病特点,对收集到的郑州、林州两地区鸡源贝氏隐孢子虫卵囊经雏鸡传代扩增纯化后,分别以1×106个卵囊量接种3日龄罗曼公雏鸡,从其排卵囊情况、临床症状和病理学变化比较了2个分离株的致病情况。结果表明:2个隐孢子虫分离株均主要引起雏鸡呼吸道症状和法氏囊炎病变;接种雏鸡均于感染后第4天开始排卵囊,林州株和郑州株排卵囊持续期分别为23 d和13 d;排卵囊高峰期均为感染后第8~12天。雏鸡感染2个地区鸡源贝氏隐孢子虫分离株后,排卵囊量及排卵囊规律存在差异。     

鸡IL-2 mRNA SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

根据GenBank提供的ChIL-2参考序列设计了特异性引物,并以鸡3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因为内参,以二者标准质粒为模板,应用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR技术,并采用双标准曲线相对定量方法建立了ChIL-2 mRNA荧光定量RT-PCR检测方法.结果显示,该方法该可以在3h左右对低拷贝量的模板(200 copy/μL)进行检测,同时该检测方法具有很好的特异性和重复性.雏鸡免疫试验IL-2 mRNA检测结果显示,该方法可有效应用于鸡体内IL-2在核酸水平的检测,并为今后IL-2相对定量的检测研究提供参考依据.     

Development of a real-time SYBR Green PCR assay for the rapid detection of Dermatophilus congolensis

Methods such as real time (RT)-PCR have not been developed for the rapid detection and diagnosis of Dermatophilus (D.) congolensis infection. In the present study, a D. congolensis-specific SYBR Green RT-PCR assay was evaluated. The detection limit of the RT-PCR assay was 1 pg of DNA per PCR reaction. No cross-reaction with nucleic acids extracted from Pseudomonas aeruginosa, Mycobacterium tuberculosis, Staphylococcus aureus, or Austwickia chelonae was observed. Finally, the RT-PCR assay was used to evaluate clinical samples collected from naturally infected animals with D. congolensis. The results showed that this assay is a fast and reliable method for diagnosing dermatophilosis.     

贝氏隐孢子虫在丝毛乌骨鸡体内发育的扫描电镜观察

使用扫描电镜观察了贝氏隐孢子虫(Cryptosporidium baileyi) 在丝毛乌骨鸡体内内生发育虫体的三维形态。大量球形虫体嵌于微绒毛丛中。滋养体呈球形,直径1.54～1.76 μm 。裂殖体呈桔瓣形或旋涡形排列,直径2.4～3.0 μm ,内含8 个香蕉形裂殖子,大小为4 μm ×0.65 μm 。成熟大配子体直径为3.5 μm 。带虫空泡内、外侧基部均可观察到梳状结构,根据带虫空泡的结构将其分为2 类,其中一类为裂殖子或小配子的带虫空泡,另一类为卵囊的带虫空泡。     

SYBR Green荧光RT-PCR法快速检测毛皮动物源犬瘟热病毒

根据犬瘟热病毒(CDV)H蛋白基因的保守序列设计了1对引物,经过各反应体系和反应条件的摸索和优化,建立了CDV的SYBR GreenⅠRT-PCR荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,建立的方法特异性较好,几种非CDV病原体检测均为阴性;敏感性实验表明其敏感性可达1个TCID50,高于普通RT-PCR和胶体金检测试剂盒;重复性试验表明所建立的检测方法非常稳定;临床检测中,在39份样品中检测到28份阳性样品,高于普通RT-PCR方法的检出率。该方法检测成本低、特异性强、敏感性高、重复性好,可推广应用于毛皮动物CDV的大规模高通量的检测。     

Ⅰ型鸭肝炎病毒SYBR-Green实时荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种快速、特异的Ⅰ型鸭肝炎病毒（DHV-Ⅰ）SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,根据GenBank已登录的DHV-Ⅰ型疫苗株C80（DQ864514.3）的非编码区基因序列设计1对特异性引物,经RT-PCR扩增出230bp的靶序列,并克隆到pMD18-T载体上,构建重组质粒;将纯化的重组质粒10倍梯度稀释后作为标准阳性模板,进行SYBR GreenⅠ荧光定量PCR扩增并建立标准曲线,对其敏感性、特异性和重复性进行评价。结果显示,建立的标准曲线的循环阈值与模板浓度呈现良好的线性关系（R2=0.998 2）,产物Tm值为87.2～87.9℃,检测灵敏度为71.5拷贝/μL。对55份疑似病料进行检测,荧光定量检测48份为阳性,而用常规PCR方法只能检出39份阳性,ELISA方法只检出30份阳性。这表明所建立的DHV-Ⅰ的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法具有特异、灵敏、快速和重复性良好等优点,可用于临床DHV-Ⅰ感染的快速检测,为DHV的分子诊断、流行病学调查及定量分析奠定了基础。     

新城疫病毒在鸡胚中增殖特性的研究

本研究将接种到9～10日龄鸡胚中的鸡新城疫病毒(NDV)La Sota或V4株弱毒培养24h,病毒滴度可增加106以上,培养108 h,病毒滴度则增加至10 10倍以上.NDV在有NDV母源抗体的普通鸡胚与无抗体的SPF鸡胚中的增殖无显著差异;盲传对于检验NDV没有意义.La Sota或V4株病毒悬液在理论上稀释至每胚接种量只有数个或1个病毒时,仍可引起鸡胚感染.低毒量条件下固定病毒的数量,随着接种胚数的增加,感染率随之下降,但感染数在一定范围内波动,没有减少趋势.以上结果证实数个甚至1个活的NDV粒子即可引起鸡胚感染,这对现地检测NDV具有重要意义.     

鹅副粘病毒对鸡胚及雏鸡致病性的初步研究

鹅副粘病毒是一种引起多种家禽疾病的病毒,通过人工感染鸡胚和雏鸡试验,其结果表明本病毒主要以呼吸系统、消化系统病变为主要临床症状和特征,并且可导致10日龄的鸡胚100％死亡,对雏鸡的致死率为85％。因此,可见其致死率高,广大养殖户应重视鹅副粘病毒的预防。