VEGF在绵羊卵巢中的表达分布研究

目的:研究血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)在绵羊卵巢组织中的免疫定位。方法:选取绵羊的卵巢组织作为研究样本,制成切片,通过HE染色来观察其卵巢的形态结构,采用免疫组织化学SP法检测绵羊卵巢中VEGF的表达分布。结果:VEGF在绵羊卵巢各级卵泡中均有表达,在初级卵泡和次级卵泡的颗粒细胞及卵泡膜细胞中可检测到VEGF强阳性表达信号。结论:VEGF广泛表达于各级卵泡中,主要集中定位于颗粒细胞及卵泡膜细胞的胞质中,进而推测出颗粒细胞和膜细胞分泌的VEGF可能促进了膜细胞层血管内皮细胞的增殖。     

鸡胚脾脏石蜡切片制作及H.E.染色方法改良的探讨

石蜡切片和H.E.染色,是组织学的最基本的技术之一,至今已使用了100多年[1].石蜡切片是目前组织标本制作的方法之一,其特点是可进行多种染色,细胞及组织层次感好,且能长期保存完好的组织形态[2].石蜡切片制作和染色过程中涉及的因素很多[3],各个环节均需要操作者根据所制作的组织不同严格筛选试验条件[4].已有大量文章进行石蜡切片方法学的研究,如组织固定不充分,会导致切片灰染[5],脱蜡不彻底导致染色不良[6-7],伊红复染时,要根据使用次数调节复染的时间[8]等,但并没有专门针对胚胎组织石蜡切片制作方法探讨的相关文章.本文选取脾脏为代表器官,目的是通过摸索制作鸡胚脾脏石蜡切片中脱水、透明、浸蜡、切片与染色的最佳条件,探讨制作优质鸡胚组织石蜡切片的方法.     

意大利蜜蜂蜂王卵巢组织观察方法的探究

采用石蜡切片技术配合以光学显微镜观察,通过设置不同试验条件对适合意大利蜜蜂蜂王卵巢组织的石蜡切片制作及染色方法进行了探究。结果显示:用甲醛固定液常温固定8 h、水浸洗30 min的卵巢组织在58℃恒温箱条件下浸蜡,苏木精和伊红处理时间均为8 min时的切片效果最好,说明卵巢组织对固定剂以及浸蜡时的温度和染色时间是有选择的,只有在最佳的试验条件下制得的石蜡切片才能避免组织破碎,保证其染色效果良好从而更好的观察其组织结构。     

动物组织H.E.染色中常见的问题及解决方法

高质量的H.E.染色切片可为临床病理诊断及动物(含人体)组织结构形态教学、科研提供可靠的依据。制作一张好的H.E.染色切片既要有熟练的技术、合格的标本,还要有良好的试剂等,在制作过程中组织标本的采集、固定、切片、展片、烤片、染色等工序都要严格操作。笔者从动物组织的采集、脱水、透明、切片、防脱片和染色等方面分析了制作高质量H.E.染色切片的常见问题及处理方法,以期为病理诊断、动物(含人体)组织学实验教学及医学药理研究提供可靠的依据。     

绵羊心壁组织学结构特征的研究

分别制作绵羊左、右心房,左、右心室石蜡组织切片,通过HE、改良PTAH染色法研究绵羊心壁的组织结构特征。结果发现绵羊心壁由心内膜、心肌膜和心外膜构成,心内膜中富含浦肯野纤维;心肌膜最厚,心肌纤维较细,呈螺旋状环绕分层排列;心外膜内可见大量脂肪细胞。改良PTAH染色将肌纤维染成紫蓝色,闰盘着色深蓝,纤维结缔组织染成玫瑰红色。研究结果表明,绵羊心肌纤维较细,肌纤维横纹清晰,闰盘较稀疏。H2O2因其氧化和漂白作用,在改良PTAH染色中有一定的作用。     

动物组织块染色石蜡包埋制片法

动物组织切片的制作,是教学、科研和病理检验中的一项经常性工作。但在大批制作时,由于程序繁多,所以工作效率不高。为了简化制作过程,提高工作效率,笔者进行了组织块染色石蜡包埋制片法试验。是将组织的染色,改放在组织包埋切片之前进行,组织切片后不再染色,直接贴片至封固,即成永久标本。     

胰岛素样生长因子及其受体mRNAs在绵羊生殖系统中的表达和分布

为检测胰岛素样生长因子（IGFs）及其受体（IGFR）mRNAs在绵羊发情周期早期卵巢、子宫和输卵管中的表达,探讨绵羊胚胎早期发育过程中其发育环境——生殖道中生长因子的表达、分泌及其作用,取绵羊发情周期早期卵巢、子宫和输卵管,经固定、切片、免疫染色,观察IGFs mRNAs的表达和分布情况。同时用RT-PCR技术研究了各组织中IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ、IGF-ⅠR、IGF-ⅡR mRNAs的表达情况。结果表明,IGFs mRNAs在绵羊发情周期早期的卵巢、子宫和输卵管中都有表达,4种因子表达模式相似：在卵巢中,IGFs主要定位于卵泡颗粒细胞,间质细胞亦有少量表达。在输卵管中,上皮细胞免疫染色呈阳性;在子宫中,腺细胞及上皮细胞的阳性信号强于固有层。RT-PCR检测表明IGFs mRNAs在3种组织中均有表达。     

VEGF在绵羊卵巢中表达测定方法的探讨

绵羊的卵巢具有同期性变化的特点，而其周期行变化伴随着血管的新生，在这一过程中VEGF起到了至关重要的作用。本试验利用改进后的免疫组化方法，探究VEGF在绵羊卵巢中表达位置并测定表达情况。研究结果表明，改进后的免疫组化方法与常规的方法相比，可以降低脱片率，降低非特异性染色强度并消除背景色。     

动物组织块染色石蜡包埋制片法

动物组织块染色石蜡包埋制片法任成林（张家口农业高等专科学校河北张家口０７５１３１）组织块染色石蜡包埋制片法，是将组织的染色，改放在组织包埋切片之前进行，组织切片后不再染色，直接贴片至封固，即成永久标本。这种方法的优点是，简化了切片制作程序，节省药液。...     

绵羊肺腺瘤病毒内蒙古株的分离与观察

以内蒙古某羊场自然感染绵羊肺腺瘤病的病肺组织4例和3月龄绵羊胎肺2例作为材料，对胎肺细胞进行了原代培养并接种绵羊肺腺瘤病毒悬液，进行了绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)的分离，同时采用电镜负染色技术和超薄切片透射电镜技术对上述样品进行了观察。结果表明，自然感染绵羊肺腺瘤病的4例病肺组织中都有散在的病毒粒子，其直径为100～125nm，接种病毒悬液的胎肺细胞从第2代到第9代均出现细胞病变，但对绵羊胎肺培养的病毒悬液电镜负染色观察未发现典型的病毒粒子，而超薄切片透射电镜观察发现了病毒样粒子。     

组织切片技术浅见

组织切片技术是兽医病理组织学诊断中常见方法之一.所谓组织切片,即取动物某一实体器官上的组织块用石蜡包埋,然后进行切片及染色的制片过程.在整个制片过程中,包括有取材与固定,脱水与透明,浸蜡与包埋,切片与粘片,染色与封固五大步骤.制作时,对每一步都必须认真对待,否则将达不到预期效果,甚至导致制片工作的彻底失败.笔者在多年的动物病理学教学和组织切片实践中体会到:组织切片技术必须把好以下6关.     

快速HE染色切片制作

苏木精和伊红染色方法 (简称HE染色 )是生物学和医学领域中组织学和细胞学等学科中最常见的切片染色方法。染色质量的好坏直接影响到细胞观察的科学性和病理学诊断的准确性。但在一些特殊情况下 ,在保证切片质量的前提下需要进行快速石蜡HE染色切片。经过长时间的石蜡切片HE染色的制作实践 ,对实验室不具备自动脱水机和自动染色机的HE染色切片快速制作方法进行了如下的总结。1　石蜡切片的快速制作常规 (普通 )快速包埋法 :此方法快速而且制片的效果很好 ,整个过程一般在 10～ 15min完成。过程如下 :①取材、固定、脱水 :取材小而薄 ,组…     

鸽常规石蜡切片制作技术的体会及改良

为了使传统的石蜡切片技术满足病理研究与诊断的需要,针对鸽的石蜡切片制作过程中易出错的环节,探讨制作优良鸽石蜡切片的具体方法,对制作过程中取材、固定、修整、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色及封固等步骤进行改良,镜检结果表明获得了高质量的石蜡切片。     

幼鼠与成鼠卵巢组织学研究

以4周龄和8周龄SPF级KM小鼠卵巢为研究对象,制作石蜡切片并采用苏木精—伊红(Hematoxylin and Eosin,HE)染色法染色。在组织切片中区别出各级卵泡和黄体的形态特征,并比较成鼠和幼鼠黄体和卵泡数量。结果显示:幼鼠中没有黄体存在,成鼠无腔卵泡数量显著高于幼鼠,这可能与成鼠生殖器官成熟、建立完善的发情周期有关。     

H.E.染色切片质量影响因素分析

H.E.切片染色是生物学和医学领域中组织学和细胞学等学科中最常见的切片染色方法。染色质量的好坏直接影响到细胞观察的科学性和病理学诊断的准确性。经过长时间的组织胚胎学 H.E.染色切片的制作实践 ,对影响石蜡切片 H.E.染色质量的因素进行了如下分析。1　取材固定　取材要新鲜、迅速、避免机械损伤、大小适宜、厚薄均匀。固定要及时、充分。固定液一般采用10 %中性缓冲福尔马林溶液和 Bonin氏液 ,但是检查糖元、黏液、尿酸结晶类物质最好用无水乙醇固定 ,固定 2 4～ 4 8h,最短不短于 30～ 6 0 min。固定时间应根据取材大小、性质以及…     

动物病理标本制作及其在教学中的应用

主要介绍了动物病理大体标本和病理组织切片的制作过程,包括取材、处理、固定、保存、透明、浸蜡、包埋及切片染色等,同时介绍了动物病理组织标本在兽医病理学理论教学及实践或实验教学过程中的重要作用,在提高学生的学习兴趣、培养学生的综合应用能力方面具有重要意义。     

组织切片技术在兽医诊断中的应用和常见问题的分析

正利用组织切片技术进行病理诊断是兽医学中最具权威性的诊断方法之一。所谓组织切片,即取动物某一实体器官上的组织块用石蜡包埋,然后进行切片及染色的制片过程。在整个制片过程中,包括有取材与固定,脱水与透明,浸蜡与包埋,切片与粘片,染色与封固五大步骤。制作时,对每一步都必须认真对待,否则将达不到预期效果,甚至导致制片工作的彻底失败。病理诊断的准确性,一方面取决于兽医师的技术水平,另一方面     

不同繁殖季节绵羊卵巢组织中piRNAs序列特征及表达差异分析

为了分析绵羊卵巢组织中piRNAs的序列特征及不同繁殖季节绵羊卵巢组织中piRNAs的表达差异,本试验采用Solexa测序技术对休情季节（休情期）和发情季节（卵泡期和黄体期）滩羊卵巢组织进行高通量测序,采用生物信息学方法筛选绵羊卵巢中的piRNAs,对piRNAs的长度分布、首位碱基偏好、基因组来源、染色体分布、链特异性、ping-pong循环特征、piRNAs比对重复序列类型进行分析,并对发情季节与休情季节绵羊卵巢之间差异表达的piRNAs进行靶基因预测及其靶基因的GO功能和KEGG Pathway富集分析。结果显示,绵羊卵巢中不同长度的piRNAs首位碱基偏好性不一致;3个时期（休情期、黄体期和卵泡期）的piRNAs均主要比对到基因内含子、编码区及lncRNA区域,而比对到重复序列的piRNAs相对较少;绵羊卵巢piRNAs在染色体上呈不均匀分布;绵羊piRNAs簇存在很强的链特异性,但首位碱基偏好性不明显;3个时期的piRNAs均无明显的ping-pong循环特征。KEGG富集分析发现,差异piRNA靶基因主要富集在RNA运输通路（RNA transport pathway）、嘌呤代谢通路（purine metabolism pathway）、黏着斑通路（focal adhesion）、PI3K-Akt信号通路（PI3K-Akt signaling pathway）、Hippo信号通路（Hippo signaling pathway）等与绵羊繁殖相关的通路。本研究揭示了不同繁殖季节绵羊卵巢组织中的piRNAs序列特征,暗示绵羊卵巢组织中的piRNAs可能通过BAD等基因和黏着斑通路等调控绵羊季节性繁殖,为深入解析绵羊季节性发情分子机制提供一定参考。     

不同繁殖季节绵羊卵巢组织中piRNAs序列特征及表达差异分析

为了分析绵羊卵巢组织中piRNAs的序列特征及不同繁殖季节绵羊卵巢组织中piRNAs的表达差异,本试验采用Solexa测序技术对休情季节(休情期)和发情季节(卵泡期和黄体期)滩羊卵巢组织进行高通量测序,采用生物信息学方法筛选绵羊卵巢中的piRNAs,对piRNAs的长度分布、首位碱基偏好、基因组来源、染色体分布、链特异性、ping-pong循环特征、piRNAs比对重复序列类型进行分析,并对发情季节与休情季节绵羊卵巢之间差异表达的piRNAs进行靶基因预测及其靶基因的GO功能和KEGG Pathway富集分析。结果显示,绵羊卵巢中不同长度的piRNAs首位碱基偏好性不一致;3个时期(休情期、黄体期和卵泡期)的piRNAs均主要比对到基因内含子、编码区及lncRNA区域,而比对到重复序列的piRNAs相对较少;绵羊卵巢piRNAs在染色体上呈不均匀分布;绵羊piRNAs簇存在很强的链特异性,但首位碱基偏好性不明显;3个时期的piRNAs均无明显的ping-pong循环特征。KEGG富集分析发现,差异piRNA靶基因主要富集在RNA运输通路(RNA transport pathway)、嘌呤代谢通路(purine metabolism pathway)、黏着斑通路(focal adhesion)、PI3K-Akt信号通路(PI3K-Akt signaling pathway)、Hippo信号通路(Hippo signaling pathway)等与绵羊繁殖相关的通路。本研究揭示了不同繁殖季节绵羊卵巢组织中的piRNAs序列特征,暗示绵羊卵巢组织中的piRNAs可能通过BAD等基因和黏着斑通路等调控绵羊季节性繁殖,为深入解析绵羊季节性发情分子机制提供一定参考。     

成年绵羊不同组织中GPR 30 mRNA表达特性研究

文章旨在研究成年绵羊不同组织中GPR 30 m RNA的表达特性。采用q RT-PCR法对成年杂交绵羊不同组织中GPR 30 m RNA的表达进行相对定量分析。结果表明:GPR 30 m RNA在心脏等其他组织中有少量的表达,在卵巢、附睾尾及下丘脑中显著表达(P0.05)。说明GPR 30 m RNA在成年绵羊的不同组织中均有不同程度的表达,并在繁殖器官的生长、发育过程中起着重要的作用。