巢式PCR扩增SRY基因进行奶牛胚胎性别鉴定

依据牛Y染色体上SRY基因的特异序列设计、合成2对内外引物,从妊娠奶牛血浆中提取胎儿游离DNA,富集、浓缩后进行特异性巢式PCR扩增以鉴定奶牛早期胚胎的性别.结果表明,巢式PCR扩增SRY基因对不同发育阶段奶牛胚胎性别鉴定的平均准确率为80％,其中1～2月龄、2～3月龄、4～8月龄的性别鉴定准确率分别为60％、85,7％、92,3％.试验证明该方法可行,准确率较高.     

奶牛早期妊娠诊断的7种方法

奶牛配种（或输精）后不久,要进行早期妊娠诊断,以便加强对怀孕母牛的饲养管理,保证母体和胎儿健康,防止流产,保证顺利完成分娩;或对未孕母牛要查找原因,采取有效的治疗措施,促使其再发情,及时配种（或输精）,缩短产仔间隔,提高繁殖效率。因此,奶牛早期妊娠诊断对提高牛群繁殖率,减少空怀具有极为重要的意义,奶牛早期妊娠诊断方法的研究受到普遍重视。近30年来,奶牛早期妊娠诊断方法研究进展较快,新的诊断方法相继问世,其总的趋势是向快速、简便、经济的方向发展。笔者对常见的,相对快速、简便、经济的奶牛7种早期妊娠诊断方法进行了总结归纳,供同行借鉴。     

奶牛妊娠的实验室诊断方法

动物怀孕后,在胎儿、胎盘等作用下,会导致母体的新陈代谢发生一系列变化,从而导致母体血、尿、乳等成分发生变化,这就是实验室妊娠诊断的理论基础。在早期妊娠诊断方面,大家做了许多研究探索工作,但目前尚无一种完美的实验室诊断方法,理想的早期妊娠诊断技术应该具备下面的几个条件：     

B型超声在小尾寒羊发情鉴定和早期妊娠诊断的应用

B超影像诊断技术是20世纪70年代中期开始应用于临床兽医的一项诊断技术,具有快速、直观、准确、无损伤等特点。在卵泡、黄体状态监测、早期妊娠诊断、胎儿性别鉴定、卵巢及子宫疾病诊断、胎龄判断及发育情况监测等方面有独特优势。现阶段,B超技术在国内外动物医学界已被广泛应用,但是对小尾寒羊发情和妊娠诊断的影像学报道不多。随着养羊向集约化转型,同期发情、人工授精等技术应用广泛,而传统的发情和妊娠诊断技术存在劳动强度大,准确率低等缺点。本试验利用便携式B超仪,采用线阵探头直肠法监测小尾寒羊卵泡发育及排卵时间,准确判断发情期,准确做出早孕诊断,旨在提高小尾寒羊的繁殖效率,减少空怀,降低饲养成本,探索出一种适合规模化养殖小尾寒羊的诊断方法。     

奶牛早期妊娠诊断分子筛选研究

[目的]探究整合素αvβ3、TGF-β、HSP10、PAG、IL-10等妊娠因子在荷斯坦奶牛早期妊娠过程中的规律,筛选奶牛早期妊娠诊断标志因子.[方法]选取49头荷斯坦奶牛,在输精后第7、14、21、28天取外周血,采用荧光定量PCR方法分析整合素αvβ3的表达趋势和变化规律,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法分析TGF-β、HSP10、PAG、IL-10的表达趋势和变化规律.60 d后通过直检对50头荷斯坦奶牛进行怀孕检测.[结果]50头奶牛中有23头受孕、26头未受孕.通过分析受孕和未孕奶牛血液中整合素αvβ3基因的表达量,发现整合素αvβ3基因在受孕奶牛血液中的表达量高于未孕奶牛,特别是输精后第21、28天受孕奶牛的表达量显著增高(P<0.05);TGF-β、HSP10、PAG、IL-10蛋白质表达量变化在28 d内不能有效区分怀孕奶牛与未孕奶牛.[结论]整合素αvβ3可作为奶牛早期妊娠诊断标志因子,理论上可将孕检的时间窗口提前到早期妊娠阶段的第21天.     

奶牛早期妊娠简易诊断法

妊娠的早期诊断在奶牛生产中非常重要,及早地作出诊断,可有针对性地加强饲养管理,提高产奶量和母牛体质,同时防止重复配种导致流产;如诊断为未孕则可注意下一次发情及时配种。但奶牛早期妊娠诊断较复杂,对农村养牛户来说不易掌握,更无检测设备和试剂。现介绍几种简便易行的奶牛早期     

高海拔地区奶牛妊娠硫酸铜试验法早期诊断

应用3%分析纯硫酸铜对高海拔地区奶牛进行早期妊娠诊断试验,结果表明:硫酸铜试验法诊断早期妊娠操作简便、检查迅速,一般配种15d后就可进行;饲养管理条件、海拔及品种对此法影响不大,影响因素主要在于早孕因子的表现和持续时间的长短。     

B超监测母羊妊娠研究进展

对B超在母羊早期妊娠诊断、母羊怀胎数判定、母羊妊娠日龄预测、胎儿发育监测和胎儿性别鉴定中的应用研究进行了综述,认为超声断层扫描是目前最迅速、最安全、最直观、最有效的母羊妊娠监测手段;对腹壁探查和直肠探查结果进行的对比和总结认为,配种后50～100d是通过腹壁探查进行母羊妊娠诊断的最佳时期,配种后30～30d是通过直肠探查诊断母羊妊娠的最佳时期。     

应用B超进行肉牛早期的妊娠诊断

使用AMI-900型便携式兽用B超诊断仪的5.0 MHz的线阵探头,通过直肠对配种后30 d的母牛进行了妊娠探查,主要目的是探讨B超在生产应用中对肉牛早期妊娠诊断的适用性和意义。本试验对妊娠30 d左右的母牛的探查可以看到增厚的子宫壁、尿囊腔、胚胎、胎盘突等回声,没有观察到胚心搏动。与传统的直肠触诊法相比,B超早期妊娠诊断法快捷、简便、准确率高,对早期妊娠诊断以实时图像显示,具有直观性,对子宫及其胎儿的应激小且无损伤。     

母牛早期妊娠诊断技术

早期妊娠诊断是指在母牛配种后2周至2个月之内对其进行妊娠诊断,这一技术即可以减少漏配率,也可以尽早对怀孕母牛进行保胎管理,还能缩短母牛的产犊间隔,提高母牛繁殖效率和经济效益.本文介绍了牛早期妊娠诊断技术,意在帮助养殖户切实做好母牛早期妊娠诊断,提高经济效益.     

母牛发情周期和妊娠早期宫颈-阴道粘液电导率变化规律的研究

 本文应用自行设计安装的MFR-1型母牛发情鉴定及早期妊娠诊断仪，将特制探测电极插入母牛阴道穹窿部，测定了94头母牛宫颈-阴道粘液的电导率（CVMEC）。结果表明，母牛在发情周期和妊娠早期CVMEC呈规律性变化。发情周期正常的母牛，CVMEC在间情期处于较低水平（5.64mS/cm），前情期开始上升（8.93mS/cm），发情期达峰值（13.40mS/cm），后情期开始下降（9.84mS/cm），最后降至间情期水平。输精后，未妊与妊娠母牛CVMEC的变化规律不同。在发情周期的各时期，未妊母牛高于妊娠母牛；未妊母牛在输精后21天左右返情，CVMEC再度出现峰值；妊娠早期母牛则保持与间情期相近的较低水平（5.08mS/cm）。笔者认为，母牛CVMEC的规律性变化的生理学基础是体内激素水平和宫颈-阴道粘液的周期性变化，据此进行发情鉴定和早期妊娠诊断是可行的。与目前使用的方法相比，CVMEC法更具有实用价值。     

乌龙茶单株早期品质鉴定方法的改进

早期品质鉴定一直是茶树育种的难题,也是造成茶树育种周期长的一个重要原因.乌龙茶早期品质鉴定一般采用传统小样法制作茶样再通过感官审评判定.由于小样法制作鲜叶用量相对较多,1个单株需要经过7～8 a的前期扩繁才有足够多的鲜叶原料.本试验通过改进传统小样法制作模式形成微量法制作工艺,制作过程简单高效,需要的鲜叶量少,只需10...     

奶牛生殖激素的分析 .妊娠期间外周血浆和乳汁孕酮含量变化的比较及其在早期妊娠诊断上的应用

应用放射免疫分析法(RIA)测定了21头黑白花奶牛怀孕期间外周血浆和乳汁孕酮水平的变化和193头奶牛输精后21、24、28及56天奶桶混合乳的孕酮含量。结果表明,在妊娠期间,血浆和乳汁孕酮水平的变化呈高度正相关。分析193头母牛输精后21、24,28及56天的奶样查出。已孕和未孕母牛孕酮含量的临界值为6ng/ml;用这一数值作为诊断妊娠的标准。并以193头母牛的乳汁孕酮含量验证,其结果是输精后21、24及28天采样检查三次,诊断为妊娠的准确率为90.0％,未孕的准确率为95.0％.     

羊驼早期妊娠的B超诊断

[目的]建立羊驼早期妊娠B超检测技术,探索羊驼繁殖特性。[方法]选用5只健康、有正常分娩史的羊驼,进行早期妊娠的动态B超检测。[结果]妊娠20～30 d,胚囊明显可见,强回声胚体位于胚囊中后部,可见胚胎心跳;妊娠45 d,胚胎轮廓可见;妊娠90 d,胎儿轮廓清晰,胎动明显,羊水较多。[结论]建立了羊驼早期妊娠B超诊断方法。     

翠冠梨早花原因分析

早花是梨果生产一大障碍,通过合理的栽培技术、病虫防治,保证叶片正常脱落,是获得高产、稳产、优质的关键。     

应用巢式PCR法鉴定牛早期胚胎性别

为获得一种高效的牛胚胎性别鉴定方法,采用高特异性和灵敏度的巢式PCR进行扩增。结果表明:公牛可以扩增出187bp的SRY基因片段和255bp的β-珠蛋白基因片段,母牛只能扩增出255bp的β-珠蛋白基因片段。巢式PCR只需3～8个细胞就可以观察到扩增结果,而常规PCR则需要较多的细胞,所以牛胚胎性别鉴定时使用巢式PCR效果更好。     

日光温室早熟马铃薯栽培技术简述

在新疆巴州库尔勒地区探索利用日光温室大棚栽培早熟马铃薯,解决淡旺季节搭配不均的问题,并选出适于库尔勒地区温室栽培的高产、优质、早熟马铃薯品种,总结出早熟马铃薯温室栽培技术,促进早熟早上市马铃薯的大面积生产。     

应用PCR法和LAMP法鉴定牛早期胚胎性别的研究

通过设计特异性引物，优化Mg^2＋浓度、退火温度和循环时间等影响PCR的因素，确定了适合现场应用的PCR反应体系；46枚胚胎现场的鉴定率为87％，移植妊娠率为28％，准确率为85％，证明建立的PCR胚胎性别鉴定方法可用于生产。使用LAMP法对126枚常规胚胎和42枚性控胚胎现场鉴定，鉴定率95％，移植妊娠率33％，准确率88％，结果证明该方法可应用于牛早期胚胎性别鉴定。PCR法和LAMP法所鉴定同一样品的结果一致，说明在控制好实验条件的情况下，根据实际情况可选用这两种方法中的任何一种进行性别鉴定应用。     

利用硫酸铜液诊断母牛早期妊娠技术初探

 采用3%和5%硫酸铜液对57头黑白花母牛进行早期妊娠诊断,然后通过直肠检查技术进行确诊。结果表明,3%硫酸铜液乳检的总阳性率为87.14%,5%硫酸铜液乳检的总阳性率为84.80%,两组均以配种后31~50d中午乳样检出准确率最高,平均阳性率为90.35%。5%硫酸铜液乳检的阳性符合率较3%硫酸铜液稍低,即造成误诊空怀率稍高,实际应用中以3%硫酸铜液进行母牛早期妊娠诊断,其准确率较高。