红松成熟合子胚愈伤组织诱导的适宜培养条件

为了探索以红松成熟合子胚为外植体诱导愈伤组织的适宜培养条件,以GD、DCR、LM、MS等为基本培养基,以2,4-D和6-BA组成不同浓度激素组合,进行愈伤组织诱导试验。结果表明,1供试培养基均可诱导红松成熟合子胚产生愈伤组织,但DCR培养基上诱导的愈伤组织出现最早,出愈率显著高于其他培养基,达93.3%;2在DCR培养基中添加2,4-D与6-BA的各种组合均获得了较好的愈伤组织发生,但以2,4-D 2 mg/L+6-BA 0.5 mg/L和2,4-D6 mg/L+6-BA 1 mg/L的出愈率最高,达96.7%。综上所述,红松成熟合子胚外植体诱导愈伤组织时,适宜基本培养基为DCR,适宜激素组合为2,4-D 2 mg/L+6-BA 0.5 mg/L。     

‘凤丹白’成熟胚愈伤诱导、增殖及组织学观察

【目的】探讨植物生长调节剂对‘凤丹白’成熟胚愈伤组织诱导与增殖的影响,鉴定具分化潜能的愈伤组织,为‘凤丹白’再生技术体系的完善与遗传改良提供参考。【方法】以‘凤丹白’成熟胚为外植体,进行愈伤组织诱导和增殖培养,并对不同类型的愈伤组织进行外观形态与细胞组织学观察。【结果】在改良MS+0.5 mg/L水解酪蛋白+6 mg/L PIC+0.5 mg/L TDZ+30 g/L蔗糖的培养基上,‘凤丹白’成熟胚愈伤组织诱导率最高,达到70.61%;在改良MS+0.5 mg/L水解酪蛋白+4 mg/L 2,4-D+30 g/L蔗糖的培养基上,愈伤组织诱导率最低,为21.88%。诱导出的初代愈伤组织经增殖培养后,出现6种状态的愈伤组织,即松散透明、致密白色、致密绿色、致密片状、絮状披针形和透明褐色。石蜡组织切片观察结果表明,松散透明、致密白色和致密绿色愈伤组织为胚性愈伤组织,致密片状、絮状披针形和透明褐色愈伤组织为非胚性愈伤组织。在改良MS培养基+0.5 mg/L水解酪蛋白+6.0 mg/L PIC+0.5 mg/L NAA+30 g/L蔗糖的培养基上,愈伤组织扩增率最高,为97.78%,扩增系数为19.97;在改良MS培养基+0.5 mg/L水解酪蛋白+0.4 mg/L PIC+30 g/L蔗糖的培养基上,愈伤组织扩增率最低,为13.46%,扩增系数为2.97。【结论】诱导14 d后,成熟胚开始形成愈伤组织,PIC和TDZ为‘凤丹白’成熟胚愈伤组织诱导和扩增的适宜激素,经继代培养后松散透明、致密白色和致密绿色的愈伤组织具有分化潜能。     

丝棉木松散型胚性愈伤组织的诱导与增殖

通过建立丝棉木松散型胚性愈伤组织培养体系,为丝棉木组培快繁、体细胞离体诱变育种及遗传转化等研究奠定基础。本试验以丝棉木幼嫩茎段为外植体,研究植物生长调节剂不同种类和浓度对丝棉木松散型胚性愈伤组织诱导与增殖的影响。结果显示,丝棉木茎段在MS+1.0 mg/L 2,4-D培养基上可诱导出松散型愈伤组织,愈伤组织诱导率达100%;将松散型愈伤组织转接到MS+0.5 mg/L BA+0.5 mg/L 2,4-D的培养基上可获得胚性愈伤组织;将胚性愈伤组织转接到MS+0.25 mg/L BA+0.5 mg/L 2,4-D的培养基上,每15 d继代培养一次,继代时选择结构松散、质地硬脆的愈伤组织,继代培养2～3次后可获得均质的丝棉木松散型胚性愈伤组织。本研究表明,丝棉木茎段理想的松散型愈伤组织诱导培养基为MS+1.0 mg/L 2,4-D;最适松散型愈伤组织诱导培养基为MS+0.5 mg/L BA+0.5 mg/L 2,4-D;最适胚性愈伤组织增殖培养基为MS+0.25 mg/L BA+0.5 mg/L 2,4-D。     

黑荆树不同外植体愈伤组织诱导与芽分化的研究

为建立高效的黑荆树快速繁殖体系,以黑荆树叶片、茎段和下胚轴为外植体,在添加不同植物生长调节剂的MS培养基上进行了愈伤组织的诱导和不定芽的分化研究。结果表明:综合最高诱导率结果和愈伤组织的生长状况,外植体的愈伤组织诱导能力顺序为叶片(44.83%)下胚轴(36.35%)茎段(30.05%);愈伤组织诱导最佳培养基为MS+1.5 mg/L 6-BA+0.005 mg/L TDZ+1.0 mg/L IBA。叶片和下胚轴所诱导的愈伤组织均可分化出不定芽,但芽诱导率差异达极显著水平;不定芽分化最佳培养基为MS+0.01 mg/L TDZ+0.2 mg/L IBA,叶片愈伤组织的芽分化率最高可达32.60%。     

荆半夏组织培养条件的优化

以荆半夏的叶片、叶柄及块茎为材料,实验研究了不同激素浓度对半夏组织培养的影响。实验结果表明:在MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA诱导培养基中,叶片最易诱导形成愈伤组织,愈伤组织诱导率达100%;块茎次之,愈伤组织诱导率为90%;叶柄愈伤组织诱导率最低,为70%,且容易出现褐化现象。而由叶片所形成的愈伤组织接种到MS+1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA分化培养基中,出芽率最高,达100%,且试管苗长势旺盛;半夏最佳生根培养基为MS+0.2 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA。此研究有助于建立一套完整的荆半夏组织培养技术体系,为湖北地区特色经济药用植物荆半夏的开发利用提供技术支持。     

直立冬青愈伤组织诱导及其分化研究

冬青属植物种子由于坚硬的种皮和未成熟合子胚的双重休眠,具有隔年发芽的特性,为了克服远缘杂交不亲和性,获得远缘杂交品种,打破种子休眠,缩短其育种周期,采用组织培养技术进行直立冬青种苗的快速繁殖。为了建立直立冬青愈伤组织诱导及分化体系,以直立冬青幼胚为外植体材料,采用单因素试验,通过对愈伤组织诱导培养基、不同植物生长调节剂种类及质量浓度、不同采种时间,研究影响直立冬青愈伤组织诱导和分化的条件因素。结果表明:1)基本培养基并不影响直立冬青未成熟合子胚的愈伤组织诱导,而果实的采种时间以及植物生长调节剂对直立冬青未成熟合子胚愈伤组织的诱导起着重要作用;2)当在基本诱导培养基1/4 MS+3%蔗糖+0.65%琼脂上添加生长素2,4-D 0.5～2.0 mg/L或者NAA 1.0 mg/L和2.0 mg/L时,最有利于未成熟合子胚愈伤组织的诱导,而细胞分裂素单独使用时,对未成熟合子胚愈伤组织的诱导不能起到积极作用;3)在培养基为1/4MS+3%蔗糖+0.65%琼脂+0.5 mg/L 2,4-D上时未成熟合子胚的分化率最高,达70.37%;在添加2.0 mg/L ZT的培养基上,其分化率最高,达到58.15%。     

蓖麻离体培养体系的建立

为建立蓖麻的离体培养体系,以其无菌发芽的种子苗为材料,切取其根、茎、叶及顶芽为外植体,探讨不同诱导途径中不同生长调节剂对愈伤组织诱导、愈伤组织分化、不定芽诱导及腋芽增殖的影响。结果表明:(1)去种皮后消毒种子的萌发率最高,萌发所需时间最短,染菌率也低;筛选出种子萌发适宜培养基为MS 0;(2)器官发生型诱导途径中,诱导愈伤组织最适的培养基为MS+2,4-D 2 mg/L+6-BA 1 mg/L,其中以茎为外植体诱导率最高,可达90%,但愈伤组织的分化较困难;(3)器官型诱导途径中,叶基、叶脉处能直接诱导不定芽,最适培养基为MS+6-BA 2 mg/L+2,4-D 1 mg/L;(4)顶芽诱导腋芽增殖的效果最佳(51个芽/外植体),最适培养基为MS+6-BA 2 mg/L+TDZ 1 mg/L;(5)生根最适培养基为位1/2 MS+NAA 0.5 mg/L+IAA 0.5 mg/L。     

龙脑樟愈伤组织诱导及增殖研究

以龙脑樟的茎段作为外植体,进行腋芽的诱导获得无菌苗,继而腋芽小叶被用于愈伤组织的诱导并进行增殖培养。结果表明外植体适宜的灭菌方法为：0.1%升汞灭菌10 min,污染率为21.6%;腋芽小叶愈伤组织诱导最佳培养基配方为：MS＋BA 4.0 mg/L＋NAA 0.1 mg/L,诱导率可达72.7%,较佳增殖培养基组合为：MS＋BA 5.0 mg/L＋NAA 0.5 mg/L。     

闽楠组培快繁技术研究

用20年生闽楠基部萌芽枝条为外植体,从接种时期、取材部位、愈伤组织诱导、增殖和分化、生根培养方面,探讨闽楠的离体快繁技术。结果表明:在春季接种,诱导率高而褐化率低,分别为95.8%和6.5%;茎段诱导率89%,愈伤组织呈白色,易分化,为最优部位;BA与NAA对愈伤组织诱导影响最大,最佳诱导培养基为:MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L,诱导率为100%。最优分化和增殖(系数4.4)培养基是BA2.0+NAA0.1mg/L,用1/2MS+IBA0.5mg/L的培养基,生根率可达98%。     

棱角山矾叶片愈伤组织的诱导及其细胞形态学观察

以棱角山矾叶片为外植体进行愈伤组织的诱导与增殖研究,并利用扫描电镜和透射电镜对愈伤组织进行细胞形态学观察。研究结果表明:叶基和叶中是棱角山矾叶片愈伤组织诱导的最佳部位,且宜选择远轴面向上的接种方式。棱角山矾叶片表面灭菌最适方法为70%酒精灭菌30~90 s,再用2%次氯酸钠灭菌3 min。愈伤组织诱导的最适培养基为B5+0.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L NAA+30 g/L蔗糖,该培养基上诱导率达到最高,为91.11%。愈伤组织增殖的最适培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L NAA+30 g/L蔗糖,该培养基上愈伤组织的增殖系数达到最高,为1.12,褐变率为14.29%。棱角山矾愈伤组织最佳的继代周期为20 d,以继代1~3次为宜。光暗交替有利于棱角山矾叶片愈伤组织的诱导,而暗培养促进愈伤组织的增殖。5 g/L活性炭对防止棱角山矾叶片愈伤组织褐化的效果最佳。胚性愈伤组织细胞呈球形、大小均一,多以细胞团形式存在,内容物丰富;非胚性愈伤组织细胞形状不规则,内含一大液泡,细胞器较少。     

针叶十大功劳愈伤组织诱导研究

针叶十大功劳Mahonia fortunei生长期长、市场需求量大、野生资源日益匮乏的现状,首次以针叶十大功劳Folium Mahoniae茎、叶为外植体诱导愈伤组织生长.实验结果表明选用B5及MS培养基,温度24±1℃,暗培养条件下均可诱导出愈伤组织,但B5培养基更适宜于针对十大功劳愈伤组织诱导.培养基中添加植物激素2,4-D0.5 mg/L、KT0.5 mg/L时,愈伤组织诱导率最大,且外植体污染率最低.相同培养条件下,选用茎为外植体较选用叶片为外植体可获得更高的愈伤组织诱导率.培养基中添加3%蔗糖有利于愈伤组织的诱导,但添加NH4NO3则可明显降低愈伤组织诱导率.研究结果对开展十大功劳的人工繁殖研究具有一定的参考价值.     

不同激素浓度配比对贯叶连翘茎段离体培养不定芽形成和生长的影响

为规模化工厂化快速繁殖贯叶连翘(Hypericum perforatum),满足国际市场日益增长的需求,保护贯叶连翘野生种质资源,用野生贯叶连翘嫩梢带节茎段诱导形成愈伤组织,将愈伤组织作为外植体,继代增殖;以MS(MuraShige and Skoog)为基本培养基,采用随机区组试验设计,3次重复。研究6-BA 3.0mg/L+2,4-D 2.0mg/L、6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L、6-BA 1.0mg/L+IBA 0.2mg/L对贯叶连翘嫩茎切段愈伤组织诱导形成不定芽数量和高生长的影响,结果显示:3种处理诱导形成不定芽数量、不定芽高生长处理间差异均达显著水平,其中:6-BA 3.0mg/L+2,4-D 2.0mg/L诱导愈伤组织形成不定芽数量最多,平均为6.971 7±3.463 8个,最高可达24个;6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5mg/L对促进不定芽高生长最有利,平均芽长3.333 3±0.738 2cm。     

不同因子对黄檗愈伤组织诱导的影响

为了提高黄檗组织培养的愈伤组织诱导率,研究了植物激素、基本培养基、外植体、蔗糖质量浓度、pH值和光照等因子对黄檗愈伤组织诱导和生长的影响。结果表明,以叶片为外植体,MS为基本培养基,培养基中添加BA1.5 mg/L和2,4-D 2.0 mg/L,培养基中蔗糖质量浓度20 g/L,pH值5.8,在光照强度40μmol.m-2s-1条件下培养最有利于黄檗叶片愈伤组织的诱导。在此条件下,愈伤组织诱导率最高可达100%。     

圆山药的离体培养

为建立圆山药的离体培养体系,将野生苗盆栽后,切取其嫩叶、茎段、地下块茎和不定根作为外植体,探讨不同消毒方式的影响及不同生长调节剂组合对愈伤组织诱导、愈伤组织分化、不定芽诱导及腋芽增殖的影响。结果表明:①腋芽增殖途径的培养基配方为MS+BA3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L(增殖系数为3.1);②适宜的愈伤组织诱导培养基为MS+2,4—D 4 mg/L+6—BA 0.5 mg/L,其中以带腋芽的茎段为外植体诱导率较高,可达85.7%。BA浓度为4.0~6.0 mg/L时,不定芽的形成率最高,达97.5%;③增加BA和琼脂的浓度利于防止圆山药的褐化。     

湿地松愈伤组织的诱导研究初报

取湿地松成熟胚作为外植体,在添加不同BA、NAA浓度配比的MS培养基上,诱导愈伤组织的最适培养基是MS+BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+0.6%琼脂+25g/L蔗糖。实验同时证明,NAA是胚诱导愈伤组织的必需因子。     

植物生长调节剂对黑果枸杞愈伤组织诱导、增殖及分化的影响

为建立黑果枸杞高频再生体系及进行细胞突变体筛选、遗传转化奠定基础,以黑果枸杞叶片、茎段和腋芽为外植体,以MS为基本培养基,附加不同浓度的植物生长调节剂进行愈伤组织的诱导、增殖及不定芽分化研究。结果表明:诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D 2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L;在愈伤组织的继代培养过程中,高浓度的2,4-D有利于愈伤组织的诱导,但对愈伤组织的生长有一定的抑制作用,最佳培养基为MS+2,4-D 1.0mg/L+6-BA 0.5mg/L;在愈伤组织的再分化过程中,6-BA对再生芽的分化效果最好,出芽率高,且多诱导出丛芽,最佳培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.10mg/L。试验表明:黑果枸杞叶片、茎段和腋芽均可诱导愈伤组织,茎段诱导率最高;筛选出了茎段愈伤组织诱导、增殖及再生芽分化的适宜培养基,为其细胞工程育种及规模化生产提供支撑。     

青钱柳组织培养研究

以青钱柳幼嫩叶片为外植体进行组织培养,观察青钱柳愈伤组织形成及再分化形成不定芽的过程,研究不同培养基和不同生长调节物质组合对青钱柳愈伤组织诱导及植株再生的影响。结果表明:(1)MS、WPM和B5培养基均能诱导出愈伤组织,激素及其浓度对愈伤组织诱导有显著影响。愈伤组织在WPM+2.0 mg/L2,4-D+1.0 mg/L 6-BA培养基组合上诱导率最高,达97.6%;(2)青钱柳愈伤组织能分化形成不定芽,激素不同浓度组合及外源物对愈伤组织分化有显著影响。青钱柳叶片愈伤组织在WPM+1.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/LZT+0.5 mg/L2,4-D+10%椰乳的培养基上分化不定芽的频率最高,达66.33%;(3)青钱柳诱导生根的最佳培养基组合为1/2 MS+1.5 mg/L IBA。     

芍药茎段愈伤组织诱导的研究

以芍药品种‘粉玉奴’茎段为实验材料,1/2 MS培养基为基本培养基,探究不同浓度的6-BA以及不同光质对芍药茎段愈伤组织诱导的影响。试验结果表明,6-BA浓度为0.5 mg/L时芍药茎段愈伤组织诱导情况最好;最适宜芍药茎段愈伤诱导的培养基为:1/2MS+Ca~(2+)(WPM)+PVP 1.0 g/L+NAA 1 mg/L+LH 0.5g/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L+6-BA 0.5 mg/L;不同的光质条件下,红光更有利于芍药进行愈伤组织诱导。     

激素对怀槐愈伤组织诱导的影响

在怀槐组织培养中,通过对比不同激素浓度对愈伤组织诱导效果及异黄酮分泌量的影响程度,分析出最佳的激素种类及使用浓度。研究发现:(1)怀槐的最佳愈伤组织诱导激素为:NAA 0.5mg/L、2,4-D 2.5mg/L、6BA 1.5mg/L、KT 0mg/L,激素NAA对愈伤组织诱导的影响程度最大;(2)怀槐愈伤组织中异黄酮分泌的最优质诱导激素为:激素NAA和6BA,当浓度分别为0.5mg/L和1.5mg/L时,能够使愈伤组织的异黄酮分泌量达到最高。     

高羊茅组织培养基的选择

用不同种类的基本培养基及不同浓度2,4-D、6-BA,对本地高羊茅的种子进行愈伤诱导.结果表明:基本培养基种类对愈伤诱导无明显的效果;MS培养基下不同浓度2,4-D、6-BA对高羊茅愈伤诱导时间及出愈率差别很大,以9 mg/L效果最佳,愈伤诱导率达70.2%左右;过高浓度2,4-D、6-BA对萌芽和愈伤的形成有负作用;愈伤组织分化以MS-BA2.0 mg/L-NAA0.5 mg/ L为最佳 MS基本培养基,2,4-D浓度以9.0 mg/L为最佳,最适合高羊茅愈伤组织诱导的培养基为MS 9.0 mg/L2,4-D.