改良CTAB-LiCl法提取枣总RNA体系的建立

本试验以枣树田间枝条的枝皮及组培苗为材料,应用改进的CTAB法进行了总RNA的提取。针对枣组织中富含多糖多酚的特点,改进了CTAB法,采用β－巯基乙醇和PVP去除酚类,KAc及无水乙醇去除多糖,LiCl沉淀过夜的方法提取得到的RNA,条带整齐、清晰,A260/A280介于1.8~2.0之间,A260/A230均大于2.0,证明得到的RNA纯度、完整性和产率均较高,蛋白、多糖及酚类等去除较彻底。结果表明,本试验建立的改良CTAB-LiCl法适于进行枣总RNA的提取     

一种改进的多浆旱生植物霸王叶和根总RNA提取方法

针对多浆时旱生植物霸王富含多酚和多糖类物质的特点,在常规异硫氰酸胍方法的基础上进行改进,摸索出一种霸王叶和根总RNA提取的方法.本方法主要通过在提取缓冲液中加入4%β-巯基乙醇以去除多酚物质的干扰;用2mol/L醋酸钠(pH4.0)、水饱和酚和氯仿:异戊醇(24:1)抽提以去除多糖和蛋白物质.采用该方法提取的霸王总RNA纯度高、完整性好,电泳条带清晰,OD260/OD280抛值在1.8～2.0之间,其质量完全可以满足进一步分子生物学研究的要求.     

改良CTAB法用于苹果果实基因组DNA的提取

针对苹果果实多糖、多酚含量高的特性,以成熟期‘澳洲青苹’果实为材料,嫩叶作为对照,采用三种改良CTAB法提取苹果果实基因组DNA。实验表明,方法三提取的DNA效果最佳。该方法综合了多步除杂步骤,即在细胞裂解前加入干扰物清除液,提高β-巯基乙醇、PVP的浓度抑制多酚氧化,沉淀DNA时加入1/10体积3 mol/L Na AC,有效去除了果实中多糖和多酚等物质。紫外分光光度计检测和琼脂糖凝胶电泳表明,提取的DNA纯度较高、完整性好。以所提取的DNA为模板,用ISSR引物进行PCR扩增,条带清晰。Eco RⅠ酶切检测表明,所提的DNA能被完全酶切。因此,确定方法三是适合苹果果实基因组DNA提取的最佳方法,该方法为DNA提取过程中多糖、多酚的去除提供了参考。     

适于AFLP分析的蚕豆DNA提取方法的改良

蚕豆是高蛋白含酚类物质较多的作物之一,为了提取适于蚕豆AFLP分析的高质量的DNA,采用改良CTAB法,以β-巯基乙醇和PVP浓度为因素进行了实验.结果表明,用改良的CTAT法提取蚕豆DNA的质量较好,纯度高λ=260nm/280nm的平均OD值为1.915,变幅在1.81～2.08之间,绝大多数集中在1.9左右,其中,在CTAB提取液中加入1%的β-巯基乙醇和0.5%的PVP或直接加入1%PVP后,提取的DNA纯度较高,λ=260nm/280nm OD平均值分别为1.868和1.865,提取的DNA适于AFLP分析.     

顽拗植物龙眼果皮中总RNA的提取方法研究

[研究目的]为建立适于富含多糖和多酚等物质的龙眼果皮总RNA提取的方法;[方法]采用TRIZOL法、Tris-硼酸法和改良CTAB法提取龙眼果皮的总RNA,并通过凝胶电泳、紫外分光光度法检测提取的RNA样品的品质;[结果]改良CTAB法、Tris-硼酸法所提取的RNA经电泳检测,28SrRNA和18S rRNA条带清晰,RT-PCR得到的条带与目的片断大小一致,说明所提取的RNA纯度高、质量好;TRIZOL法所得到的RNA降解严重,没有得到完整的电泳条带;[结论]改良CTAB法和Tris-硼酸法适于富含多糖和多酚等物质的龙眼果皮总RNA的提取.     

油茶叶片总RNA提取的改良Trizol法及比较

为了探讨油茶叶片高质量RNA的提取方法,改良了常规的Trizol法提取RNA的条件。运用常规Trizol法、改良Trizol法、常规的SDS法、常规异硫氰酸胍法和常规CTAB法提取油茶叶片总RNA,并运用紫外分析和琼脂糖凝胶电泳分析方法比较了各种样品RNA的质量。本研究表明,常规Trizol法、常规的SDS法、常规异硫氰酸胍法和常规CTAB法提取油茶叶片总RNA的质量较差,改良Trizol法二在RNA提取时加入了PVP和巯基乙醇和氯化钠,能很好地去除油茶叶片中多糖和多酚物质,获得的总RNA质量高,完整性强,可以用于反转录和基因扩增分析。本研究将为油茶的分子生物学研究提供帮助。     

魔芋叶片中4种总RNA提取方法的比较

本研究分别利用TRIzol法、异硫氰酸胍法、改良的CTAB法及试剂盒这4种方法提取魔芋叶片的总RNA,并用紫外光谱和琼脂糖凝胶电泳对各个提取效果进行鉴定。反复试验的结果表明:TRIzol法难以提取魔芋叶片总RNA,异硫氰酸胍法提取的总RNA浓度低、杂质较多且有部分降解,这两种方法不适宜用于魔芋叶片总RNA提取;试剂盒方法提取的总RNA产率和纯度较高,但稳定性差、成功率低且成本较高;改良的CTAB法利用PVP和β-巯基乙醇去除酚类物质,水饱和酚-氯仿去除蛋白质,醋酸钾去除多糖,该方法提取得到的总RNA的纯度较高,OD260/OD280值为1.893,而且效果稳定,有良好的可重复性。因此,我们认为改良的CTAB法是一种简便、快速且经济的提取魔芋叶片总RNA的方法。     

苏云金芽胞杆菌不同分化发育时期总RNA的有效分离

将苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis,简称Bt）8010在LB液体培养基30℃、230r／min下振荡培养,通过生长曲线测定（OD600）和显微镜观察,分别在8、30、39、42h和46h取样得到营养生长期、孢子囊期和裂解期样品来提取总RNA。通过对试剂提取方法的改进,找到一种方法可以很有效的提取Bt3个不同分化发育时期（营养生长期、孢子囊期和裂解期）的总RNA。提取的总RNA质量很好,可以进行cDNA合成、RT-PCR和转录组学研究等下游实验。     

牡丹种子总RNA提取方法比较

采用CTAB法、Trizol法及改进的RNA提取试剂盒方法提取牡丹种子的总RNA,比较三种方法的优劣,从而筛选出一种适合于牡丹种子高质量RNA的提取方法。结果表明,以RNA提取试剂盒为基础,当每管样品是25 mg(700μL裂解液)时,六管合一管过吸附柱的方法操作简单,且能够有效地去除牡丹种子中脂肪、多糖、多酚等代谢物质,从而提取出高质量的RNA。琼脂糖凝胶电泳检测结果显示该法提取的RNA完整性好,紫外分光光度计检测其OD260/OD280比值为2.03。而且,该法提取得到的RNA被成功应用于荧光定量PCR表达分析等后续的分子生物学研究。     

枣不同组织提取RNA方法的比较及优化

为了获得高质量的枣RNA,本研究从所得RNA的纯度与浓度、操作时间和成本等方面比较了Trizol试剂法、传统CTAB法、热硼酸法、试剂盒法以及改良CTAB法5种方法提取枣不同组织总RNA的效果,并筛选出了最适合提取枣不同组织样品RNA的具体方法。结果表明:(1)在本研究试验的5种提取方法中,枣不同的组织RNA提取需要不同的方法。枣组培苗RNA提取的最佳方法是热硼酸法,枣芽和幼叶是试剂盒法,花和果实需要用改良CTAB法。(2)通过正交试验,得出枣树花和果实RNA提取适宜的改良CTAB法为在原有CTAB法的基础上水浴20 min、加入Na Ac的p H值为4.8、加入2倍体积的异丙醇。(3)枣RNA提取过程中的其他条件包括:RNA储存液保存的材料提取出的RNA质量最高,使用TBE缓冲液替代TAE进行电泳可以提高RNA的电泳亮度,4℃低温离心更有利于组培苗和芽的总RNA的提取,而叶片、花以及果实的RNA提取室温即可。     

草莓果实总RNA提取方法的比较

为建立草莓果实总RNA的提取方法,针对草莓成熟果实中富含多糖、多酚和色素等次级代谢物质,总RNA提取难度大的特点,比较改良的EASYspin 植物RNA提取试剂盒法和改良的CTAB法提取草莓果实中总RNA的质量。通过琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白测定仪(NanoDrop 2000)检测2 种方法提取总RNA的浓度、纯度及完整性等。改良的EASYspin 植物RNA提取试剂盒法和改良的CTAB法都能够完成草莓果实总RNA 的提取,电泳检测在28S 和18S 处呈2 条清晰的条带,OD260/OD280值和OD260/OD230值均在2.0 左右;改良的EASYspin 植物RNA提取试剂盒法成本较高,且提取总RNA质量劣于改良的CTAB法,但是EASYspin植物RNA提取试剂盒法操作简便,安全可靠,节省时间。通过RT-PCR验证,2种方法所获得的草莓果实总RNA质量较好,可达到分子生物学试验对RNA质量的要求。     

植物基因组DNA提取试剂盒提取玉米基因组DNA的条件优化

利用DNA提取试剂盒提取玉米基因组DNA,对其操作步骤进行改良优化,从而获得一种快速、简便的提取玉米基因组DNA的方法。在原试剂盒的操作步骤基础上,对实验材料用量、是否加入β-巯基乙醇、裂解时间、洗脱液用量等条件进行了优化,并使用两对引物所提取到的基因组DNA进行扩增,根据扩增效果确定DNA质量。优化后的方法可以在保证基因组DNA质量的前提下节省实验试剂和操作时间。     

一种快速提取盐桦叶片总RNA的方法建立

从植物组织中提取高质量的RNA是进行植物分子生物学研究的必要前提和关键。盐桦细胞中存在大量的胶质和多糖类物质，用Trizol试剂根本不能获得RNA。本研究采用CTAB-LiCl法，提出了一种适合盐桦叶片总RNA的简单快速提取方法。消除了蛋白质、DNA、多糖、多酚等污染。该方法提取的盐桦叶片总RNA，完整性好、纯度高，可用于RT-PCR等实验操作，此法无需特殊试剂和贵重仪器，实验结果稳定，重复性好，适合富含多糖和脂质的植物组织总RNA的提取。     

超声波辅助燕麦多酚提取工艺优化及化学组成分析

为了研究燕麦中多酚化合物的提取工艺及其化学组成,以超声波处理为辅助手段,以多酚提取量为试验指标,通过单因素试验和正交试验对提取温度、提取时间、料液比和乙醇体积分数进行优化,并利用高效液相-电喷雾质谱法对所获得的燕麦多酚化学组成进行分析。试验结果表明,超声辅助处理(超声功率180 W,超声时间20 min)燕麦多酚提取最佳工艺条件为乙醇体积分数70%,料液比1∶11,提取时间4.5 h,提取温度40℃;在此条件下,燕麦多酚提取量为183.12 mg/100 g。通过高效液相-电喷雾质谱法检测分析,确定燕麦中多酚化合物以结合态形式存在,主要为N-3',4'-二羟基肉桂酰-5-羟基邻氨基苯甲酸、燕麦蒽酰胺及其衍生物、二烯酸与二十六烷-1-醇、26-羟基二十六烷酸和28-羟基二十八烷酸组成的酚酸酯化物。     

适用于转录组测序的毛葡萄叶片总RNA提取方法筛选

毛葡萄叶片中含有大量多糖、多酚等多种次生代谢物,严重影响RNA提取质量,筛选从毛葡萄叶片中提取高质量RNA的方法是开展相关分子研究的基础。本研究采用改良CTAB法、改良SDS/酚法和三种试剂盒法,筛选适合转录组测序的提取毛葡萄叶片总RNA的方法。结果显示,五种方法均可以获得毛葡萄叶片总RNA,但在纯度和完整性上差别较大。改良CTAB和改良SDS/酚法提取的总RNA OD_(260)/OD_(230)比值小于1.8,试剂盒A法提取的总RNA在纯度和完整性上均可以满足转录组测序要求,试剂盒B法和试剂盒C法提取的总RNA降解严重。相比其他四种方法,试剂盒A法提取的毛葡萄叶总RNA质量更好,在纯度和完整性上均能满足转录组测序及其他分子生物学实验的要求。     

鹧鸪茶总多酚超声波提取工艺优化研究

采用超声波技术提取海南鹧鸪茶中的总多酚。以鹧鸪茶总多酚的提取率为指标,通过单因素试验和正交试验探究乙醇体积分数、料液比、超声时间、超声功率、提取温度对鹧鸪茶总多酚提取的影响。结果表明,最佳工艺条件为乙醇体积分数50%,料液比1∶40(g∶m L),超声时间20 min,超声功率360 W,提取温度60℃,此条件下萃取鹧鸪茶总多酚提取率可达12.56%。     

血红鸡爪槭叶片总RNA提取方法的比较研究

血红鸡爪槭叶片中富含多糖、多酚物质,严重影响了RNA提取纯度和质量。为了获得适宜血红鸡爪槭叶片总RNA提取的方法,采用柱式植物RNAout法、TRIZOL法和改良CTAB法3种提取方法对其叶片总RNA提取效果进行比较分析。结果显示,采用柱子法提取获得的总RNA产率最高,但是有DNA污染;TRIZOL法提取的总RNA OD260∕OD280为1.65,可能有多糖和酚类物质的污染,并且产率最低;改良CTAB法提取的总RNA纯度很高,OD260/OD280平均值在2.0左右,产率在上述两种方法之间,电泳图清晰,而且改良CTAB法提取的总RNA,经RT-PCR获得了清晰的特异性条带。表明改良CTAB法提取的总RNA纯度和产率高,完全可以满足进一步分子生物学研究的需要,是血红鸡爪槭叶片总RNA提取的适宜方法。     

珍稀树种庙台槭不同组织DNA高效提取方法分析

为探讨庙台槭不同组织DNA的高效提取方法,分别以叶片和果实为材料,以完全随机区组试验设计,设置不同浓度的β-巯基乙醇和不同浓度的PVP作为预处理,采用试剂盒法提取基因组DNA,提取后对基因组DNA进行浓度、分光光度值的测定以及PCR扩增,综合各项指标选择出效果最好的预处理方法,并进一步以CTAB法进行验证,之后应用于不同个体庙台槭的DNA提取中。结果发现:以庙台槭果实为材料,不需要预处理,提取的DNA即可满足下游实验需要;以叶片为材料,用0.5%β-巯基乙醇和1%PVP预处理能有效提高提取的DNA浓度和质量,经验证发现该预处理方法适用于CTAB法,且能够极显著地提高DNA提取的浓度和质量;进一步应用于所有132个庙台槭个体的总DNA提取,获得的DNA均能满足后续实验要求。本研究为进一步研究庙台槭遗传多样性等工作提供帮助,同时也能够为槭属其他植物的相关研究提供参考。     

水稻种子总RNA提取质量问题的探究

水稻种子总RNA提取在水稻分子遗传基础实验中起着非常重要的作用,然而,高质量水稻种子RNA的获取难度高,极大阻碍了cDNA文库构建、RNA-Seq和基因表达分析等相关研究工作的开展和深入。为了探讨水稻种子总RNA提取的相关影响因素,寻找合适的水稻种子总RNA提取方式,本研究通过比较Trizol法、GeneMark试剂盒法和艾德莱试剂盒法3种不同的提取方式、不同的耗材处理方法、研磨方式等不同因素改进水稻种子总RNA的提取效果。不同的检测结果显示,艾德莱多糖多酚提取试剂盒能够提取到28S、18S条带完整、降解少和纯度高的水稻种子总RNA;不同耗材处理方法中,蛋白酶K处理过的耗材提取的总RNA比另外两种方法处理过的耗材提取的总RNA降解更少,28S和18S条带更清晰和完整、总RNA质量最高、效果最好;而研磨方式上,液氮冷冻研磨法能够有效抑制RNA酶对RNA的降解。本研究对水稻种子RNA提取过程相关因素的分析和改进,为促进以水稻种子为研究对象的分子实验奠定了一定的技术基础。     

微波辅助提取燕麦总酚及其抗氧化能力评价

本文对燕麦麸皮中总多酚进行微波提取,与热回流提取方法进行比较。探讨溶剂、料液比、微波功率、微波处理时间等对总酚得率的影响,并运用L9(34 )正交试验对微波加热提取燕麦麸皮总酚类物质的工艺条件进行了优化。结果表明,微波功率对总酚得率有显著影响,微波处理时间影响较小。最佳工艺是：75%乙醇,料液比（m/v）1:8,微波功率640 W,微波辐射时间15 min,此条件下提取燕麦麸皮总酚的提取得率为9.72 mg.g-1,高于传统的热回流提取多酚的得率6.67 mg.g-1。提取物的抗氧化能力用DPPH清除率表示,相当与同质量α-生育酚的90.4%。结论：利用微波加热提取燕麦麸皮中的多酚比传统的热回流方法效率高,提取物具有较强的抗氧化活性。