发酵乳清蛋白制备抗氧化肽工艺的优化

利用微生物发酵法制得的乳清蛋白抗氧化肽是一种天然抗氧化剂,副产物少,有发酵的芳香,安全无毒。主要利用微生物发酵法制备乳清蛋白抗氧化肽,通过菌株的筛选及乳清蛋白肽制备条件的优化,得到乳清蛋白肽最佳制备工艺。结果表明,选择瑞士乳杆菌CICC 22818发酵最终水解度为9.36%,菌株活力达到8.5 LogCFU/g,且产酸能力较强,因此选择瑞士乳杆菌CICC 22818作为最终发酵菌株。发酵乳清蛋白的最佳工艺为:乳清蛋白含量10%,发酵时间63 h、发酵温度43.3℃、接种量3.5%,此时DPPH自由基清除率为26.4%,同时乳清蛋白肽纯化后DPPH自由基清除率提高到35.62%,·OH自由基清除率达到20.58%。     

发酵牦牛乳菌种筛选及加工工艺优化

针对牦牛乳脂肪含量高、营养丰富等特点,本试验研究了适用于发酵牦牛乳的菌种和工艺。以发酵牦牛乳的感官、酸度以及活菌数为指标,从10株乳酸菌中筛选适合牦牛乳发酵的3株菌;在单因素试验基础上,利用响应面优化发酵牦牛乳配方及工艺;测定发酵牦牛乳的理化卫生指标,评估产品质量。结果表明:适用于发酵牦牛乳的3株菌为罗伊氏乳杆菌、约氏乳杆菌和发酵乳杆菌,可与保加利亚乳杆菌及嗜热链球菌按1:1:1:1:1比例复配制成发酵剂;发酵牦牛乳最佳工艺条件为:牦牛奶与荷斯坦牛奶按2:1配比,糖添加量为9%,菌种添加量为4%,30℃发酵30h。回归系数显著性表明,各因素对发酵乳感官评分的影响顺序为:菌种添加量发酵温度糖添加量发酵时间。理化和微生物指标结果显示,发酵牦牛乳的酸度、脂肪、蛋白质、酵母菌和霉菌数、大肠菌群数均符合标准,风味成分双乙酰含量为1.02μg/mL。     

副干酪乳杆菌发酵制备牛乳抗氧化肽饮料工艺优化

将副干酪乳杆菌用于牛乳发酵,制备含抗氧化肽的新型乳酸菌功能性饮料。通过测定发酵终产品的活菌数、酸度、多肽含量、多肽转化率和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率,探讨最优的发酵培养方式和培养基配方。结果表明:确定出的最佳培养方式为摇床培养,摇床转速180 r/min、发酵时间24 h、脱脂乳粉添加量12 g、葡萄糖添加量6 g、接种量5％,在此条件下,产品的多肽产量最高达0.98 mg/mL,活菌数最高达8.5×108 CFU/mL,DPPH自由基清除率最高可达62.38％。     

益生菌发酵制备金针菇抗氧化肽的研究

试验旨在获得高活性的金针菇抗氧化肽，优化益生菌发酵制备金针菇抗氧化肽的条件。试验以金针菇为发酵基质，以抗氧肽对2,2’-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（ABTS）自由基清除率为指标，对枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和黑曲霉3种益生菌进行了筛选，使用pH值沉淀法分离抗氧化肽的最适pH值，采用单因素和响应面试验对发酵条件（液料比、发酵时间、发酵温度、金针菇用量）进行考察。结果显示，枯草芽孢杆菌适合发酵金针菇制备抗氧化肽；沉淀抗氧肽的最适pH值为6；最佳发酵条件为液料比4.50 mL/g、发酵时间30 h、发酵温度35℃、金针菇用量40.00 g，此条件下金针菇抗氧化肽对ABTS自由基清除率预测值为95.60%，实测值为96.75%，实测值与预测值相差很小，表明此响应面法优化的工艺可靠，截留分子量小于3 kD的抗氧肽活性最强。研究表明，通过此法制备的金针菇抗氧肽具有很强的抗氧化性，为金针菇产品的开发利用提供了参考。     

蛹虫草抗氧化肽的发酵制备及对小鼠辐射氧化损伤的防护作用

抗氧化肽是蛹虫草的重要活性成分之一。以蚕蛹虫草子实体制备的纳米蛹虫草粉为基质,利用地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)E-30菌株进行液态发酵,在接种量为3%、碳氮比0.4、发酵基质质量浓度25 g/L的条件下,蛹虫草初级抗氧化肽的得率为6.4 g/L。体外试验检测该抗氧化肽在质量浓度为1 mg/m L时,对DPPH、·OH以及O-2的清除率分别为68.12%、79.40%和82.30%。辐射氧化损伤(60Co-γ照射总剂量8 Gy)模型小鼠按80 mg/(kg·d)的剂量灌胃蛹虫草抗氧化肽3 d后,小鼠血液中的白细胞、淋巴细胞含量均显著增加(P0.01);灌胃10 d后,小鼠血液中的白细胞、淋巴细胞含量趋于正常水平,超氧化物歧化酶活性上升,丙二醛含量降低。采用DEAE-52、Sephadex G-25对制备的蛹虫草抗氧化肽逐级纯化,得到的抗氧化肽单峰经质谱检测含有分子质量为2 237 D、3 372 D的2个组分,是富含芳香族氨基酸和碱性氨基酸的2个寡肽的混合物。研究结果提示,蛹虫草抗氧化肽对小鼠因辐射引起的血象变化及氧化损伤具有修复作用。     

骆驼乳蛋白肽抗氧化应激研究

为了研究骆驼乳的蛋白质组分及肽清除自由基、抗氧化应激能力,对脱脂生鲜骆驼乳进行水解、电泳、培养、加入过氧化氢(H2O2)等操作。结果表明,骆驼乳蛋白质组分的消化水解产生了大量具有不同抗氧化能力的肽,骆驼乳蛋白肽很可能参与了质子与自由基的交换,因此具有抗氧化能力。     

植物乳杆菌胞外多糖的单糖组成及抗氧化活性

分析植物乳杆菌胞外多糖的单糖组成,同时对其抗氧化活性进行研究。以植物乳杆菌发酵液为原料,通过水提醇沉方法得到植物乳杆菌粗多糖（DZ）,经DEAE-52纤维素柱分离纯化收集得到DZ-1与DZ-2 2 种多糖组分,采用气相色谱法对DZ-1与DZ-2中单糖组成进行分析,测定其1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基和2,2’-联氮-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（2,2’-azino-bis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS）阳离子自由基清除率,对2 种多糖组分的抗氧化活性进行研究。结果表明：DZ-1为仅含葡萄糖的均多糖,DZ-2则为由阿拉伯糖与半乳糖组成的杂多糖,其单糖组成及百分比含量比值为阿拉伯糖∶半乳糖=46.03∶53.89;抗氧化实验结果表明,DZ-1与DZ-2均具有一定的DPPH自由基、羟自由基和ABTS阳离子自由基清除能力。     

紫甘薯乳酸发酵醪体外抗氧化性研究

测定5种乳酸发酵醪和紫甘薯醋的总抗氧化能力和对二苯代苦味酰基(DPPH)自由基清除率,结果表明紫:甘薯乳酸发酵后抗氧化能力轻微增强,总抗氧化能力达200.18mg/mL,添加量为100μL时对DPPH自由基清除率达96.99%,与紫甘薯醋抗氧化能力相当。5种乳酸发酵醪中,紫甘薯乳酸发酵醪抗氧化能力最强。     

清汁苹果乳酸饮料的研制

通过单因素及正交试验,对清汁苹果乳酸饮料工艺进行优化研究。结果表明：苹果乳酸饮料发酵工艺条件：保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌菌液按体积比2：1：2复配,温度38℃、复合菌剂接种量6%、牛奶添加量11mL/100mL、发酵时间11d,此时乳酸产量达13.85g/L;澄清条件：壳聚糖添加量0.3g/L、温度40℃、时间2h,该条件下透光率达96.167%。饮料配方为：100mL饮料中,乳酸含量0.5g、蔗糖添加量6g、氯化钠添加量60mg、蜂蜜添加量0.05g。苹果乳酸发酵醪的总抗氧化能力为42.68mg/mL,100μL时对DPPH自由基清除率达52.186%。     

自然发酵牦牛酸奶中乳酸菌的分离鉴定

为系统揭示青海部分地区自然发酵牦牛乳中的微生物乳酸菌种群结构,丰富牦牛乳微生物菌种资源库数据,本试验通过纯培养方法对采集于青海省海北藏族自治州海晏县、黄南藏族自治州泽库县及同仁市3个不同地区当地居民自然发酵的牦牛酸奶分离得到10株乳酸菌,并利用生化鉴定试剂盒对该10株乳酸菌进行了菌种的鉴定,结果表明4株杆菌分离株和6株球菌分离株。其中6株归为嗜热链球菌,2株归为嗜酸乳杆菌,1株归为罗伊氏乳杆菌,1株归为干酪乳杆菌干酪亚种。其中,海晏县样品菌种为干酪乳杆菌干酪亚种和嗜热链球菌,同仁县样品中的菌种为嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌和罗伊氏乳杆菌,泽库县样品中的菌种为嗜热链球菌。研究结果为青海地区牦牛乳酸菌资源数据库的丰富提供了依据。     

果洛地区传统发酵牦牛酸奶中乳酸菌的分离鉴定

本实验对青海省果洛藏族自治州4县8份传统发酵牦牛酸奶中的乳酸菌进行分离纯化,并利用生化鉴定试剂盒进行鉴定。结果表明,分离得到的16株乳酸菌中,3株为德式乳酸杆菌、2株为干酪乳酸杆菌、2株为罗伊氏乳杆菌、1株为嗜酸乳杆菌、8株为嗜热链球菌。     

散养成年蛋鸡空肠乳酸菌群的区系分析

试验以5只55周龄散养健康成年蛋鸡空肠内容物为样本,用无菌生理盐水稀释至10-6稀释浓度,吸取0.1 mL菌液滴于MRS平板上,置37℃培养箱培养24 h,分离乳酸菌。将分离纯化得到的乳酸菌,通过革兰氏染色、菌落形态观察、糖发酵试验进行乳酸菌种属鉴定。结果显示,从55周龄散养健康成年蛋鸡空肠中分离筛选出20株乳酸菌,经革兰氏染色后镜检显示,分离菌株有杆状和球形2种;经糖发酵试验鉴定为7个乳酸菌种,分别为唾液乳杆菌唾液亚种、棒状乳杆菌扭曲亚种、唾液乳杆菌水杨素亚种、能动乳杆菌、格氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌和德氏乳杆菌保加利亚亚种。     

凉茶渣的黑曲霉发酵工艺和抗氧化活性研究

为促进凉茶渣在畜牧业中的资源化利用,本研究以黑曲霉为菌种固态发酵凉茶渣,首先在单因素试验条件下考察了时间、温度、含水量、浸泡液pH、氮源和碳源对凉茶渣降解率和产物pH的影响;再根据单因素试验结果和规模化生产实际需要,以4%硫酸铵为氮源,2%葡萄糖为碳源,以降解率为考察指标,通过正交试验优化发酵工艺;并通过检测超氧自由基清除率、羟基自由基清除率和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除率,评价凉茶渣在最优工艺条件下发酵前后抗氧化活性的变化。结果发现,含水量为60%,浸泡液pH为9.0,31℃发酵168 h是凉茶渣的最佳发酵工艺参数。最佳工艺条件下凉茶渣的降解率为25.23%,发酵产物pH为4.53。当凉茶渣发酵前水提液浓度为24 mg/mL时,超氧自由基清除率为43.56%,羟基自由基清除率为47.06%,DPPH自由基清除率为90.71%;当最优条件下发酵产物水提液浓度24 mg/mL时,超氧自由基清除率为30.77%,羟基自由基清除率为95.63%,DPPH自由基清除率为87.36%。本试验结果表明,黑曲霉是适宜的凉茶渣发酵菌种,且凉茶渣经过黑曲霉发酵后具有良好的抗氧化活性。     

小麦胚芽肽和大豆酶解蛋白的体外抗氧化活性研究

试验旨在研究小麦胚芽肽和大豆酶解蛋白的分子质量分布和体外抗氧化活性。试验采用单因素完全随机设计,以维生素C为对照,分别测定小麦胚芽肽和大豆酶解蛋白在0.625、1.25、2.5、5、10 mg/mL浓度下对DPPH自由基、羟自由基和2,2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS）自由基的清除率,并通过测定T-AOC吸光度值计算总还原力。结果表明：使用高效液相色谱测定小麦胚芽肽和大豆酶解蛋白重均分子质量分别为513 u和551 u,二者分子质量小于1 000 u的比例分别为90.22%和86.93%。在一定浓度范围内,随小麦胚芽肽和大豆酶解蛋白浓度的升高,其体外抗氧化性能线性增加（P<0.05）,且呈正相关关系。在10 mg/mL浓度时,小麦胚芽肽对DPPH自由基、羟自由基和ABTS自由基清除率和总还原力分别为90.39%、70.66%、96.24%和2.23,大豆酶解蛋白对DPPH自由基、羟自由基和ABTS自由基清除率和总还原力分别达到65.55%、68.21%、75.14%和0.51。综上,在本试验条件下,不同浓度小麦胚芽肽和大豆酶解蛋白均具有一定的抗氧化能力...     

DPPH法评价大豆水解产物抗氧化能力

对1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)溶液吸收光谱、质量浓度与吸光值的关系及DPPH与大豆蛋白水解液反应体系等进行研究分析.结果表明:DPPH法测定大豆蛋白水解液清除自由基能力的检测波长为515 nm,反应体系为4.5 mL 128.85 mg/L的DPPH -甲醇溶液加0.5 mL的水解液抗氧化剂,反应时间为40 min.用上述方法研究大豆蛋白水解液质量浓度和其与DPPH自由基清除率的关系,以清除率为50%时抗氧化剂的质量浓度值( IC50)作为抗氧化能力的评价指标,测得IC 50值为20.35 mg/mL.     

双歧杆菌抗氧化肽的分离鉴定

通过响应面法优化动物双歧杆菌乳亚种B013培养物上清液的抗氧化活性,并对其中的生物活性肽进行分离、鉴定。结果表明:最优的培养体系为菌量(以OD_(600 nm)表示)0.66、培养时间17.84 h、葡萄糖添加量3.04%;通过不同的酶和温度处理确认,培养物上清液的抗氧化活性来源于其中的生物活性肽;通过固相萃取和超滤对培养物上清液中的生物活性肽进行分离纯化,产物经过液相色谱-串联质谱分析得出,其中含有8种肽,通过生物信息学和计算机模拟筛选出其中1种肽(QYPLGPK)可能具有抗氧化活性;经过验证,质量浓度10 mg/m L的肽QYPLGPK的总抗氧化活性为(0.249±0.011) mmol Trolox/L。     

牦牛粪便中乳酸菌的分离与鉴定

为了解青海省共和县牦牛肠道内益生菌的分布种类,筛选出能够抑制犊牛腹泻的益生菌株,采集20份健康牦牛的粪便样品,对粪便中乳酸菌进行分离和纯化,再结合形态学、生化试验及分子生物学方法鉴定。结果表明,从牦牛粪便中成功分离出7株乳酸菌,包括罗伊氏乳杆菌、植物乳杆菌、保加利亚乳杆菌、乳酸乳球菌、坚强肠球菌、海氏肠球菌和屎肠球菌各1株。本研究分离的7株乳酸菌,为后期抗牦牛腹泻益生菌产品的研究奠定了基础。     

正交试验优化清汁红枣乳酸饮料工艺

以红枣为原料进行乳酸发酵,生产具有红枣和乳酸发酵特有风味与营养功能的红枣乳酸饮料.通过单因素试验和正交试验确定红枣乳酸发酵最佳工艺条件为:菌种保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌的复合比2∶1、发酵时间1d、发酵温度38℃、复合菌剂接入量6％、牛奶添加量3mL/100mL、葡萄糖添加量0.5g/100mL,产酸量达7.5g/L.饮料调配最佳工艺条件为100mL饮料中添加红蔗糖2g、白蔗糖5g、NaCl 20mg,乳酸含量为0.5g.对4种乳酸发酵醪抗氧化功能分析发现次等红枣发酵醪在清除DPPH自由基和总抗氧化能力方面与优质红枣发酵醪相当,而高于苹果汁、红心红薯2种发酵醪.     

牦牛奶渣蛋白肽的提取及其抗氧化活性研究

以香格里拉牦牛奶渣为原料,经贯筋藤蛋白酶水解后,在单因素实验的基础上,利用响应面法优化提取牦牛奶渣蛋白肽的工艺条件,并研究牦牛奶渣蛋白肽的抗氧化活性。牦牛奶渣蛋白肽的提取工艺为:牦牛奶渣超微粉碎→加水溶解→超声波破碎→振荡水浴酶解→离心→取上清液→冷冻干燥;最佳酶解条件:时间70min、温度65℃、料液比1:110(g/mL)、酶的添加量为底物质量的12%;抗氧化活性:DPPH自由基清除能力(61.63±1.12)μg/g, ABTS自由基清除能力(195.13±1.83)μg/g,还原能力(108.6±0.49)μg/g。研究表明,牦牛奶渣蛋白肽具有一定的抗氧化功能,本研究为其应用于生物制剂、保健食品及医药品等相关产品的研发提供了科学依据。     

微生物发酵法脱除柞蚕蛹蛋白臭味和制备抗氧化肽的工艺研究

以感官评定值为脱臭指标,以DPPH自由基清除率为抗氧化肽指标,采用混合菌种发酵法,菌种组合(青春双歧杆菌∶嗜热链球菌)比例为1∶3,确定脱除柞蚕蛹蛋白臭味和制备抗氧化肽的工艺。并在单因素基础上,采用Design-Expert8.0软件,利用Box-Behnken设计实验,用响应面分析法优化各因素及其交互作用确定最佳工艺条件。结果表明:发酵温度为42℃、发酵时间为23 h、菌种接种量为4%、pH为6.8条件下,感官评定值为4.65,DPPH自由基清除率为93.78%。