玉米淀粉分支酶sbeⅡb基因启动子的克隆和表达载体构建

以玉米基因组DNA为模板,通过LA-PCR技术扩增了玉米淀粉分支酶sbeⅡb基因启动子序列,并将其克隆到pMD18-TVector上,对重组子进行PCR检测和限制性内切酶分析并测序。结果表明,该启动子和Genbank中发表的玉米淀粉分支酶sbeⅡb基因启动子同源性达98.52%,克隆片段长为934bp。再将经BamHⅠ和HindⅢ双酶切得到的启动子片段克隆到相同酶酶切的pBI121载体上,构建植物表达载体pBI121-sbeⅡb,并进行酶切鉴定和PCR检测。结果显示,启动子基因sbeⅡb已成功整合到植物表达载体pBI121上。序列中发现高等植物启动子所特有的基本核心序列和种子特异表达所需的特殊调控元件。     

玉米淀粉分支酶基因的克隆和反义载体的构建

应用聚合酶链式反应技术(PCR)扩增了玉米淀粉分支酶的cDNA基因片段,并将其克隆到pMD18-Tvector载体上,对重组子进行PCR检测和限制性内切酶分析,并测定了DNA全序列.结果表明:克隆片段全长为1 698 bp.将该基因反向插入到pCAMBIA1301的CaMV35S启动子之后,构建了反义表达载体.     

水稻RFLP研究及其在遗传育种上的应用

一、 RFLP及其检测方法 1.RFLP概念 染色体DNA是基因的载体,用其作用于特定碱基序列部位的限制性内切酶,将其切割,就可以形成很多长度不一的 DNA片段。如果个体或系统间DNA碱基排列完全相同,那么形成的DNA片段也将是一致的。然而DNA通常存在各种变异,这样就会产生长度不等的片段,这种现象称为DN A限制性内切片段长度多态性( Restriction FragmentLength　Polymorphism,简称RFLP)。染色体DNA上发生的一切变异,包括碱基的置换、染色体的易位、倒位、缺失及插入等,都会在RFLP上表现出来。 2. RFLP的检测方法 与其它高等植物…     

大豆11S球蛋白Gy5(A3B4)cDNA的克隆及植物表达载体的构建

从大豆(花生豆1号)未成熟种子中提取总RNA,逆转录形成cDNA第一条链.根据genebank中大豆11S球蛋白Gy5的cDNA序列设计引物,用PCR方法扩增Gy5的cDNA序列,克隆到pUC19质粒载体上,并测定其全序列.用限制性内切酶PstI和EcoRI酶切重组质粒,将目的片段与质粒pCAMBIA1301连接,构建成植物表述载体并转化到农杆菌中,以便于以后的研究利用.     

大豆llS球蛋白Gy5（A3B4）cDNA的克隆及植物表达载体的构建

从大豆(花生豆1号)未成熟种子中提取总RNA，逆转录形成cDNA第一条链。根据genebank中大豆llS球蛋白Gy5的cDNA序列设计引物，用PCR方法扩增Gy5的cDNA序列，克隆到pUC19质粒载休上，并测定其全序列。用限制性内切酶PstI和EcoRI酶切重组质粒，将目的片段与质粒pCAMBIA1301连接，构建成植物表述载体并转化到农杆菌中，以便于以后的研究利用。     

AFLP技术在大麻遗传研究中的应用

扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphism,AFLP)技术是建立在RFLP标记和PCR技术的基础上,利用限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA指纹分析技术.本文对AFLP技术在大麻遗传研究中的应用做了较为全面,系统的阐述.     

大豆灰斑病菌生理小种PCR-RFLP分子检测研究

本文利用采用PCR-RFLP技术建立了大豆灰斑病菌生理小种分子检测体系。引物对ITS1和ITS4PCR扩增大豆灰斑病菌的16个生理小种的DNA,均得到600bp片段;继而用HinfⅠ、RsaⅠ和Hae Ⅲ三种限制性内切酶将扩增产物消化,得到15个多态性片段,可将16个生理小种区分开来。 used to amplif     

酸性蛋白酶pepB基因植物表达载体的构建及在玉米中的转化

以黑曲霉基因组DNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增了酸性蛋白酶pepB基因序列,并将其克隆到pMD18-T Vector上,对重组子进行了PCR检测和限制性内切酶分析并测序.DNA序列分析表明:克隆片段长为1340bp,与已发表的pepB基因序列同源性达99.85%.将pepB基因片段插入到带有耐盐基因的表达载体pCAMBIA1301-BADH上,构建了无抗生素选择标记的重组质粒pB-pepB-35S,从而得到了植物表达载体,该载体利用耐盐基因BADH替代抗生素基因作为筛选标记.通过花粉管通道法将其导入玉米自交系,获得了转基因植株,并得到了转化植株的种子.     

甜菜(Beta vulgaris L.)叶绿体DNA与线粒体DNA的变化特点及其限制性内切酶水解片段的研究

本文研究了不同类型品种(品系)甜菜的叶绿体DNA与线粒体DNA在不同生育期的含量及其限制性内切酶水解片段,结果表明:(1)甜菜叶绿体DNA分子量约为91×10~6d..线粒体DNA分子量约为110—114×10~6d.;(2)三个类型品种(品系)的甜菜叶绿体DNA在6叶龄、12叶龄和18叶龄期内都显示出由低到高再到低的含量变化特点;但6叶龄期的含量品种类型间有明显差异.即高糖型>丰产型;(3)在甜菜的叶绿体内,首次发现不同类型品种(品系)的甜菜含有1—5条分子量介于700—1450bp的小分子叶绿体DNA;(4)苗期叶片中线粒体DNA含量和收获期块根线粒体DNA含量在不同类型品种中存在差异.即高糖型的低,丰产型的高;(5)叶绿体DNA用限制性内切酶HindⅢ水解可产生分子量介于0.43—12×10~6d.的29条片段,用HindⅢ水解高糖型和丰产型品种的线粒体DNA,都可产生分子量介于0.26—26×10~6d.的36条片段,并且其中31条是二者共同的,另有5条则是不同品种特有的.     

提取水稻DNA的一种简易方法

水稻染色体RFLP(DNA限制性片段长度多态性)图谱已经构建,RFLP标记正日益广泛地应用于水稻遗传育种的各项研究中。从水稻植株提取一定数量能被各种限制性内切酶完全酶解的DNA是开展这项研究的第一步。目前抽提水稻DNA的一般方法,如Cornell大学Tanksley博士实验室所用的方法,还是比较复杂,而且要使用氯仿和苯酚来提纯DNA,实验过程中就必须使用耐酚的容器和离心管,这给RFLP工作的广泛开展带来     

Antioxidant Capacity of Alcalase Hydrolysates and Protein Profiles of Two Conventional and Seven Low Glycinin Soybean Cultivars

Soy protein hydrolysates are considered a potential dietary source of natural antioxidants with important biological activities. This study was conducted to compare the effect of two conventional and seven low glycinin soybean cultivars on the antioxidant capacity (AC) of soy hydrolysates. Nine cultivars were grown in Bloomington, IL, Findlay, OH and Huxley, IA. The hydrolysates were produced enzymatically using alcalase and analyzed for AC using oxygen radical absorbance capacity (ORAC) assay and soluble protein. Statistical differences were observed in the protein profiles and AC among the different cultivars tested (P < 0.05). The hydrolysate from low glycinin cultivar 3 enriched in β-conglycinin, grown in Bloomington, exhibited the highest AC, compared to the other cultivars across all locations. On average, soy cultivars rich in BC and purified BC hydrolysates (36.2 and 31.8 μM Trolox equivalents (TE)/μg soluble protein, respectively) (P > 0.05) had higher AC than purified glycinin (GL) hydrolysate (28.5 μM TE/μg soluble protein) (P < 0.05). It was possible to select a soybean cultivar that produced a higher antioxidant capacity upon alcalase hydrolysis.     

国审高油高产大豆品种石885的选育

石885是石家庄市农林科学研究院选育的黄淮海夏大豆高油型品种。2015-2016年参加国家黄淮海夏大豆中片品种区域试验,两年平均产量2 976.15 kg·hm^-2,比对照品种邯豆5号增产4.95%。2017年生产试验平均产量3 187.05 kg·hm^-2,比对照邯豆5号增产4.80%。2018年通过国家农作物品种审定委员会审定。     

一种新发生的大豆茎枯病病原菌鉴定

鉴定了一种新发生的大豆茎枯病病原菌。在酸化PDA培养基上所有病原菌分离物菌落呈白色,气生菌丝呈密集的卷毛状,有时部分区域显黄绿色;培养基背面开始无色,随后产生大的、扩展的黑色子座。在接种的大豆茎秆上产生大小不等的黑色子座和分散的分生孢子器。共产生2类分生孢子,其中α型分生孢子丰富,无色,单孢,椭圆至纺锤状形,大小4.05～7.57μm×1.48～3.25μm,含2个油滴;β型分生孢子极少见,无色,线形。在培养基及大豆茎秆上未发现有性态。致病性测定表明选择的分离物引起合丰25大豆100%植株发病和种子腐烂。用AluI、RsaI和HhaI酶切通用引物对ITS4/ITS5扩增的rDNA-ITS产物,所有分离物都产生与大豆拟茎点种腐病菌Phomopsis longicolla一致的酶切谱带;序列比对发现测序的2个分离物ITS序列与GenBank中9个P.longicolla分离物ITS序列100%同源。这是我国首次报道大豆田间发现P.longicolla,而且能引发严重的大豆茎枯病。     

利用CRISPR/Cas9技术敲除水稻Pi21基因的效率分析

利用CRISPR/Cas9技术,针对Pi21基因的两个靶位点(靶位1和靶位2),构建基因敲除载体,转化水稻品种南粳9108。经PCR鉴定,获得了28株T0代阳性转基因植株。对靶位点酶切检测发现,靶位1突变效率为78.57%,靶位2突变效率为92.86%;靶位1和靶位2同时突变的效率为78.57%,突变效率较高。通过对靶位点进行测序,发现靶位点突变类型较多,包括碱基缺失、碱基插入、碱基缺失后插入其他碱基和大片段DNA缺失等类型。对突变株系进行氨基酸预测,发现大部分株系都存在移码突变现象而使基因突变彻底,少数株系表现为部分氨基酸的缺失或变异。成功敲除了水稻Pi21基因,并对突变效率和类型进行了分析,为进一步验证Pi21基因功能、培育广谱抗稻瘟病的水稻新品系奠定了基础。     

杂交大豆吉育609选育及栽培要点

吉育609是利用"三系法"选育的大豆杂交种,不育系为JLCMS103A,恢复系为JLR102。吉育609的主要特点是高油、高产、稳产。两年区域试验平均产量2 795.9公斤/公顷,较对照增产17.0%;生产试验平均产量2 653.8公斤/公顷,较对照增产2.2%。人工接种鉴定抗大豆花叶病毒病混合株系,抗大豆灰斑病。田间自然诱发鉴定,抗大豆花叶病毒病、大豆灰斑病,高抗大豆霜霉病、大豆细菌性斑点病,感大豆食心虫。籽粒脂肪含量22.54%,蛋白质含量37.52%,适宜吉林省和黑龙江省早熟区种植。     

Genetic analysis and QTL mapping of growth period traits and plant height traits in soybean recombinant inbred lines from Dongnong 47 × PI 317334-B

High and stable yield is the main goal of soybean genetic improvement. In this study, association analysis was used to detect the quantitative trait loci (QTL) for the plant height, and soybean growth period using 182 SSR markers in the RIL population of 136 F_4:8 lines, which developed from a cross between photoperiod-insensitive cultivar ‘Dongnong 47’ and photoperiod-sensitive variety PI317334–B. The results showed that 33 QTLs related to soybean growth period and plant height traits were detected by compound interval mapping, and were located on 12 linkage groups including N, C1, C2, J, D1a, B2, E, G, A2, O, L, I, with the contribution rate of 7.85–33.84%. These QTL loci and linkage markers related to soybean photoperiod sensitivity, would be helpful to identify key genes that control soybean photoperiod sensitivity, and provide an important basis for the breeding of new photoperiod-insensitive soybean varieties based on molecular design breeding.     

应用花粉管通道技术选育超级稻龙粳14试验研究

应用花粉管通道技术,以玉米黑301总DNA溶液为供体导入寒地水稻28个组合,结果表明:D1代表现与受体表型相同,D2代仅在转化龙粳4号的组合中出现3个变异植株;从其遗传变异规律看,变异植株可能由玉米黑301总DNA转化引起,但目前还缺乏直接的分子证据;经过连续定向选择,现已育成超级稻新品种龙粳14号审定推广;组合的遗传转化率看似很高,但从颖花数的遗传转化率看确很低,尤其是花粉管通道技术应用的很多物质和环境条件的不确定性,导致了试验存在很大的偶然性,试验的重演性差。     

大豆主要抗原蛋白对鲤鱼肌肉营养成分的影响

以初始体质量(31.34±0.29)g的健康鲤鱼鱼种为试验对象,以鱼粉为对照组,β-伴大豆球蛋白的添加量为40 g.kg-1,大豆球蛋白的添加量为60 g.kg-1,各配制成3种等蛋白(360 g.kg-1)等能(15.2 MJ.kg-1)的半精制饲料,在室内单循环控温养殖系统中进行6周饲养试验,探讨大豆主要抗原蛋白(β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白)对鲤鱼肌肉主要营养成分的影响。结果表明:大豆主要抗原蛋白使鲤鱼肌肉中粗蛋白含量、必需氨基酸总量下降,但与对照组差异不显著(P>0.05);鲤鱼肌肉中粗脂肪、粗灰分、氨基酸总量、鲜味氨基酸总量与对照组差异不显著(P>0.05)。因此,大豆主要抗原蛋白对鲤鱼肌肉营养成分尚未造成显著影响。     

结瘤性状不同基因型大豆对接种花生根瘤菌Spr2-9的响应

为探讨结瘤性状不同基因型大豆对接种花生根瘤菌Spr2-9的响应,采用celB基因检测法研究根瘤菌对不同基因型大豆的侵染效果和不同基因型大豆在接种后盛花期植株生长及固氮能力的变化。结果表明:nts1007的瘤鲜重、氮素百分含量和单株氮素含量在不接种与接种时均为最高,瘤鲜重分别为4.7702 g.株-1和4.7401g.株-1;氮素百分含量分别为2.20%和2.29%,极显著地高于其它基因型;单株氮素含量分别为489.12 mg.株-1和528.41mg.株-1,极显著地高于nod139。nts1007在接种后单瘤重显著降低,而瘤鲜重、氮素百分含量和单株氮素含量无显著变化。nod139受其基因型控制,无论接种与否始终表现为不结瘤,且各项指标均表现为极显著地低于其它基因型。Bragg的SPAD和植株干重对接种的响应较其它基因型更为敏感,接种后SPAD和植株干重的增幅分别为16.99%和8.18%。贡选1号的单株氮素含量在接种后增幅达到了22.76%,表明其单株氮素含量对接种的响应较其它基因型更为敏感。     

半矮秆大豆窄行密植超高产栽培产量性状及产量结构研究

采用3个基因型品种,2种栽培模式,设置3个处理,研究半矮秆大豆窄行密植超高产栽培技术产量性状及产量结构,旨在为超高产大豆研究与应用提供技术依据.结果表明:在窄行、密植、高肥水条件下,B45处理由于采用半矮秆品种植株矮、底荚低、秆强不倒,虽然单株荚数、粒数显著低于对照,但由于密度增加,群体荚数、粒数显著增加.每节位平方米荚数、粒数分别达到145.1个和411.7个,分别较对照增加78.8～84.0个和254.2～258.0个,顶荚部位荚、粒数分别占总数的21.3%和22.5%.产量极显著高于对照处理,2008年在760 m2面积上,大豆产量达到4 895.7 kg·hm-2.