大蒜未受精子房离体诱导单倍体的研究

 以苍山大蒜品种‘糙蒜’为试材,通过花茎离体培养获得发育健壮的花器官。以其未受精子房为外植体进行离体培养,研究不同培养基（MS、B5、N6）及外源植物生长调节剂对单倍体诱导的影响,以建立大蒜单倍体诱导体系。结果表明,诱导未受精子房产生愈伤组织的适宜培养基为B5 + 2 mg · L^-1 6-BA + 1 mg · L^-1 NAA,愈伤组织及雌核发育胚总诱导率可达12.24%;诱导愈伤组织分化不定芽的适宜培养基为B5 + 3 mg · L^-1 6-BA + 1 mg · L^-1 NAA,不定芽分化频率可达46.15%;将不定芽转移至B5 + 0.05 mg · L^-1 NAA培养基中可诱导生根,发育成完整植株。以再生植株叶片为材料,采用流式细胞仪进行倍性鉴定,所得18株再生植株中有16株为单倍体植株。     

蒙古黄芪植株再生及增殖体系建立

以蒙古黄芪种子繁育而来的无菌苗获得的外植体(根、叶片、胚轴)为试材,通过设定不同浓度的生长调控激素6-BA、2,4-D、NAA,研究不同外植体在不同浓度激素的培养条件下对其愈伤组织诱导率、试管苗增殖及生根情况的影响,以期为蒙古黄芪不同组织外植体的愈伤组织诱导、植株分化及增殖培养条件提供参考依据。结果表明：以根、胚轴、叶片为外植体材料均可诱导愈伤组织产生,其中以胚轴为外植体为最优选择,愈伤组织诱导率最高达97.92%,最佳培养基为MS+2,4-D 1.0 mg·L^-1+6-BA 0.5 mg·L^-1+NAA 0.5 mg·L^-1+蔗糖3.0%;试管苗增殖的最佳培养基为1/2MS+6-BA 1.0 mg·L^-1+KT 0.5 mg·L^-1+蔗糖3.0%,再生植株平均分化率最高为92.67%;生根培养时,最适宜的培养基为1/2MS+NAA 0.5 mg·L^-1+白砂糖3.0%。该试验建立了蒙古黄芪植株再生及增殖体系,在黄芪生产实践中具有重要推广价值。     

洋葱胚芽再生体系的研究

以洋葱胚芽为外植体材料,MS为基本培养基,研究了不同洋葱品种及不同激素组合对再生过程中洋葱愈伤组织诱导率的影响,建立洋葱胚芽再生体系。结果表明:"凤凰金球"洋葱品种愈伤诱导率最高;在4mg/L 2,4-D+1mg/L 6-BA的MS培养基上愈伤诱导率最高,为72.1%;在含1.0mg/L TDZ+0.5mg/L NAA的MS分化培养基上,愈伤分化率最高,为78.3%;在1/2MS+0.01mg/L NAA培养基上可诱导生根,生根率100%;再生苗驯化移栽成活率达到95%。     

离体雌核发育诱导洋葱单倍体与植株再生

 以来自日本的3个中日照型洋葱（Allium cepa L.）杂交种的未开放花蕾为外植体材料,研究了2,4-D和6-BA浓度及配比对单倍体诱导培养的影响,以建立洋葱单倍体诱导技术体系。研究结果表明,含有1.5 mg · L^-1 2,4-D + 1.5 mg · L^-1 6-BA和2.0 mg · L^-1 2,4-D + 2.0 mg · L^-1 6-BA的B5培养基适于洋葱单倍体的诱导,诱导率最高达到4.00%。共获得了43枚雌核发育胚,雌核发育胚转移至不含激素的B5基本培养基中即可发育成完整植株,再生植株驯化移栽成活率达到100%。利用根尖染色体计数和流式细胞仪鉴定有42株是单倍体。     

太行菊组织培养技术研究

以太行菊叶片、叶柄、茎尖和茎段为试材,采用MS培养基,在其中添加不同的激素对太行菊的不同外植体进行培养,研究了濒临灭绝的太行菊再生植株的方法。结果表明:太行菊的叶片、叶柄作为外植体诱导出愈伤组织的诱导率分别为44.44%和44.11%,所需时间较长,而茎尖、茎段作为外植体诱导愈伤组织诱导率分别为48.44%和68.75%,培养时间较短。茎段最适合作为诱导愈伤组织的繁殖材料。为了使茎段能更好的诱导出愈伤组织,课题组又对诱导茎段愈伤组织的激素浓度组合进行了研究,A组:MS+6-BA 1.0 mg·L^-1+NAA 0.5 mg·L^-1+2,4-D 0.1 mg·L^-1,B组:MS+6-BA 1.0 mg·L^-1+NAA 1.0 mg·L^-1+2,4-D 0.1 mg·L^-1,C组:MS+6-BA 2.0 mg·L^-1+NAA 0.5 mg·L^-1+2,4-D 0.1 mg·L^-1,D组:MS+6-BA 2.0 mg·L^-1+NAA 1.0 mg·L^-1+2,4-D 0.1 mg·L^-1。试验表明,C组激素浓度组合最适合太行菊茎段的愈伤组织诱导。35 d后愈伤组织不再增加后进行继代培养,45 d后将植株转移至生根培养基1/2MS+NAA 0.12 mg·L^-1中进行生根培养。     

海南三七的组织培养和快速繁殖

以海南三七的芽和假茎基部为试材,采用组织培养的方法,研究了不同激素浓度的培养基对芽增殖以及愈伤组织的诱导、增殖和分化的影响,以期为直接和间接植株组培快繁体系的建立提供参考依据。结果表明：在“以芽繁芽”的直接再生体系中,芽增殖最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L^-1+NAA 0.1 mg·L^-1。在以愈伤组织诱导与植株再生的间接再生体系中,假茎基部作为外植体接种在MS+6-BA 2.0 mg·L^-1+2,4-D 1.0 mg·L^-1的愈伤诱导培养基上愈伤诱导率最高,40 d后可达78.43%;愈伤增殖最适培养基为MS+6-BA 1.0 mg·L^-1+2,4-D 2.0 mg·L^-1,愈伤分化的最佳培养基为MS+6-BA 4.0 mg·L^-1+NAA 0.6 mg·L^-1,分化率可以达到66.67%;将组培苗移栽至基质中,成活率90%以上。海南三七直接和间接快繁体系的建立,为其工厂化生产、遗传育种及特定药用成...     

岷江百合花器官离体再生体系的建立

以岷江百合（Lilium regale Wilson）为试材,采用花丝、花柱、子房为外植体进行组织培养,研究不定芽或愈伤组织诱导、愈伤组织继代、小鳞茎膨大及生根以及试管苗的炼苗移栽,以期为建立岷江百合花器官的组培快繁技术提供参考依据。结果表明：3种花器官外植体诱导能力存在差异,由易到难依次为花丝>花柱>子房,发生褐化程度也存在差异,其中花丝最易发生褐化,而子房则极不易发生褐化;不同外植体的最适诱导培养基不同,花丝最适诱导培养基为MS+BA 1.0 mg·L^-1+NAA 0.5 mg·L^-1,总诱导率高达91%;花柱诱导最佳培养基为MS+2,4-D 1.0 mg·L^-1+KT 0.1 mg·L^-1,总诱导率为63%左右;子房诱导最佳培养基为MS+2,4-D 2.0 mg·L^-1+KT 0.05 mg·L^-1,总诱导率为52%;花器官诱导过程中主要产生2种愈伤组织,BA与NAA诱导主要获得绿色、致密、坚硬的愈伤组织,经石蜡切片鉴定为非胚性愈伤组织,...     

灰毡毛忍冬工厂化快繁生产体系的建立及再生苗遗传稳定性的分子鉴定

 以灰毡毛忍冬（Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.）腋芽为材料,建立了一套适合工厂化 生产的离体再生技术体系。该体系包括腋芽诱导培养基MB + 1.0 mg · L^-1 6-BA + 0.2 mg · L^-1 NAA,继代 增殖培养基MB + 1.0 mg · L^-1 6-BA + 0.5 mg · L^-1 IAA 和MB + 1.5 mg · L^-1 6-BA + 0.8 mg · L-1 IAA 和生根 培养基1/2MB + 2.0 mg · L^-1 IBA + 0.2 mg · L^-1 IAA。分别从继代12、24、36 个月的再生植株中随机抽取8 株进行SRAP 分析其遗传的变化。在检出的147 条SRAP 条带中,继代12 个月的再生植株未发现变异, 继代24 个月的再生植株中有2 株发生变异,继代36 个月的再生植株中有4 株发生变异。结果表明,建 立的腋芽再生培养体系在一定继代周期内是稳定可靠的,适合灰毡毛忍冬的规模化生产。     

秦岭石蝴蝶叶片离体组织培养技术

以秦岭石蝴蝶（Petrocosmea qinlingensis）幼嫩叶片为试材,采用离体组织培养方法,研究了外植体消毒、初代培养、愈伤组织继代分化、不定芽增殖、生根炼苗对秦岭石蝴蝶离体再生的影响,以期为建立秦岭石蝴蝶组织培养快繁体系提供参考依据。结果表明：0.1%氯化汞处理2 min+无菌水洗涤7～8次为最适灭菌方法;最适愈伤组织诱导与继代培养基为MS+2.0 mg·L^-1 IBA;愈伤组织分化的合适培养基为MS+0.1 mg·L^-1 6-BA+0.2 mg·L^-1 NAA+0.1 mg·L^-1 IBA;正交实验结果表明MS+0.1 mg·L^-1 6-BA+0.1 mg·L^-1 IBA+0.1 mg·L^-1 ZT为最适增殖培养基,最大增殖系数达14.06;最适生根炼苗条件为珍珠岩、蛭石和泥炭（2∶1∶1）基质+MS营养液1 mL+200 mg·L^-1 IBA 0.5 mL。     

金莲花愈伤组织诱导与分化

以金莲花无菌种子苗为试材,采用组织培养的方法,研究了外植体种类、基本培养基和外源激素等对愈伤组织诱导和不定芽再生的影响,以期建立其快速繁殖体系。结果表明:金莲花无菌种子苗的子叶为最佳外植体;MS是诱导愈伤组织的最佳基本培养基;附加6-BA和2,4-D的浓度分别为2.0 mg·L^-1和1.0 mg·L^-1时,愈伤组织的生长量最大,达到72.00%,长势最好;30 g·L^-1芽麦糖作为碳源优于蔗糖;培养基添加75 mg·L^-1的活性炭可有效的抑制褐化现象;金莲花愈伤组织分化的最佳附加植物生长调节剂为NAA 0.5 mg·L^-1和KT 1.0 mg·L^-1。     

野生毛桃叶片愈伤组织诱导及不定芽再生

【目的】为了初步建立野生‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导、保存及不定芽再生技术体系,【方法】以野生‘毛桃1号’试管苗幼嫩叶片为外植体,探讨了基本培养基、激素配比等一系列因素对‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导和保存的影响及TDZ浓度对愈伤组织不定芽再生的影响。【结果】结果表明,适合‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导的培养基为LP+6-BA 1.0 mg.L-1+2,4-D 3.0 mg.L-1+AgNO30.5 mg.L-1+蔗糖30.0 g.L-1+琼脂6.0 g.L-1;保存的培养基为LP+2,4-D1.5 mg.L-1+CH 0.4 g.L-1+蔗糖30 g.L-1+CA 3.0 g.L-1或PVP 3.0 g.L-1+琼脂5.8 g.L-1,且采用持续暗培养保存,每28 d继代1次。愈伤组织在SH+TDZ 3.0 mg.L-1+NAA 0.3 mg.L-1+蔗糖30 g.L-1+琼脂6.0 g.L-1的培养基上可再生不定芽,再生率为6.83%。【结论】初步建立了‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导、保存及不定芽再生体系,为桃愈伤组织再生和遗传转化的研究奠定了基础。     

大丽花‘费罗加’组织培养和块根诱导

以大丽花品种‘费罗加’为试材,茎段作为外植体,探讨了不同基本培养基、激素组合、蔗糖浓度、光照时间等对诱导愈伤组织、不定芽、不定根和块根的影响,以期缩短块根生产周期。结果表明:初代培养在MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂6 g·L-1上愈伤组织诱导率为54.9%,褐化率为44.8%,污染率为26.6%,成活率达69.6%。继代增殖培养最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.01 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂6 g·L-1,增殖系数为7.8,愈伤组织诱导率22.9%。生根最佳培养基为WPM+NAA 1.0 mg·L-1+6-BA 0.1 mg·L-1+蔗糖60 g·L-1+琼脂6 g·L-1+炭粉2 g·L-1,最适宜光照时间为6 h,生根率为98.5%,根系密集健壮。块根诱导最适材料为带根瓶苗,出现初步形态的块根,形成块根率达56.8%。     

不同激素和黑暗处理对泰山红石榴离体叶片再生的影响

以泰山红石榴为试材,研究了不同激素配比、黑暗处理时间等关键因素对泰山红石榴离体叶片愈伤组织诱导和不定芽再生的影响。结果表明,细胞分裂素是离体叶片再生不定芽所必需的。生长素2,4-D与IBA组合诱导出的愈伤组织生长量大,但不定芽再生率低。黑暗处理时间以2周为宜。适宜的再生培养基为MS+KT1.0mg·L-1+BA2.0mg·L-1+GA30.5mg·L-1,不定芽再生率达57.0%,每片叶再生芽数为3.0个。     

菊苣组织培养及植株再生

以普那菊苣叶柄为外植体进行组织培养试验,结果表明:菊苣叶柄在5种培养基上均可诱导出愈伤组织,总出愈率在90%以上,但分化效果因培养基的不同而有较大的差异.诱导愈伤组织及分化的最佳培养基为:MS KT 1.0 mg/L十NAA 0.2 mg/L;生根培养基为:MS IBA 0.2 mg/L.     

褪黑素对‘无核白’葡萄体细胞胚的诱导作用

以欧洲葡萄‘无核白’（Vitis vinifera‘Thompson Seedless’）未开放的小花蕾为外植体,研究0、1.0、2.0、3.0 mg ? L-1褪黑素（Melatonin）对其体细胞胚的诱导效果。结果表明：‘无核白’小花蕾在 MS + 1.0 ~ 3.0 mg ? L-1 褪黑素 + 2.0 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1蔗糖 + 3 g ? L-1植物凝胶的培养基上继代培养30 d时愈伤组织诱导率较好,为73.67% ~ 89.10%,显著高于2,4-D处理,愈伤组织形成所用时间较2,4-D处理缩短了14 d。愈伤组织诱导120 d时,不同浓度褪黑素均出现体细胞胚,其中,以MS + 1.0 mg ? L-1褪黑素 + 2.0 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1蔗糖的培养基体细胞胚的发生率最高,180 d时达12.05%。体胚在 MS + 60 g ? L-1 蔗糖 + 0.5 g ? L-1活性炭的X6培养基中萌发30 d后,将萌发的子叶胚转移至MS + 0.2 mg ? L-1 6-BA + 0.1 mg ? L-1 NOA + 30 g ? L-1 蔗糖 + 0.5 g ? L-1活性炭的成苗培养基上,其中,1.0 mg ? L-1褪黑素诱导产生的体胚发育正常的数量较多,为14.84%。不同浓度褪黑素处理的体胚诱导率均于180 d后增长较快,且低浓度的褪黑素有利于体胚萌发与正常发育,2,4-D诱导的愈伤组织无体胚形成。     

黄瓜(Cucumis sativusL.)花药培养

以卡罗尔、HH1-8-57与津绿农家乐3个不同基因型黄瓜品种为试材,在Kumar等、Song等和詹艳等试验研究基础上,设计试验分别探讨低温预处理时间、培养基成分(胚性愈伤组织诱导培养基、胚状体诱导培养基)和基因型等因素对黄瓜花药培养的影响。结果表明:在4℃低温预处理2d时,胚性愈伤组织诱导率显著高于其他处理;在MS+1.0mg·L-12,4-D+0.5mg·L-16-BA+3%蔗糖+0.8%琼脂培养基上胚性愈伤组织诱导率最高,达到81.3%;在MS+0.1mg·L-1NAA+3.0mg·L-16-BA+3%蔗糖+0.8%琼脂培养基上胚状体诱导率最高,为40.0%;基因型间胚性愈伤组织诱导率及胚状体诱导率差异显著,津绿农家乐品种胚性愈伤组织诱导率最高,达到81.1%,HH1-8-57胚状体诱导率最高,为40.0%。本研究从2份试材中成功地诱导出胚状体并获得了黄瓜单倍体再生植株。     

红姜花体细胞胚胎发生及植株再生的研究

以红姜花（Hedychium coccineum）的花丝和花药为外植体,通过体细胞胚胎发生途径建立了植株再生体系。结果表明：外植体在MS + 4 mg ? L-1 2,4-D + 4 mg ? L-1 NAA + 1 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1 蔗糖 + 7 g ? L-1 琼脂的培养基上经过120 d诱导出愈伤组织,愈伤组织在MS + 1 mg ? L-1 2,4-D + 0.25 mg ? L-1 NAA + 0.25 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1 蔗糖 + 7 g ? L-1琼脂的培养基上经过继代筛选,获得浅黄色松散易碎的胚性愈伤组织。胚性愈伤组织在MS无机盐 + B5维生素+ 100 mg ? L-1谷氨酰胺 + 230 mg ? L-1 脯氨酸 + 100 mg ? L-1麦芽提取物 + 0.02 mg ? L-1 NAA + 0.02 mg ? L-1 TDZ + 0.5 ~ 1.0 mg ? L-1 2,4-D + 45 g ? L-1蔗糖的培养基中通过3个月的悬浮培养,可得到均质稳定的胚性细胞悬浮系（ECS）。胚性悬浮细胞在SH无机盐 + B5维生素 + 100 mg ? L-1谷氨酰胺 + 230 mg ? L-1脯氨酸 + 100 mg ? L-1麦芽提取物 + 0.25 mg ? L-1 NAA + 0 ~ 0.20 mg ? L-1 TDZ + 45 g ? L-1蔗糖 + 7 g ? L-1琼脂的体胚诱导培养基中培养10 d,可见到白色半透明体胚发生,20 d后体胚发育成熟。当TDZ浓度为0.15 mg ? L-1时,体胚诱导率高达4 500个 ? mL-1 PCV ECS（PCV：细胞密实体积）。在SH无机盐 + B5维生素 + 0.20 mg ? L-1 IAA + 0.25 ~ 1.0 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1蔗糖 + 7 g ? L-1琼脂的体胚萌发培养基上,体胚萌发率高达100%。将萌发的体胚转移到1/2MS + 1 g ? L-1活性炭成苗培养基中,进一步发育成正常的再生植株,植株室外栽培成活率达90%。     

防风愈伤组织培养研究

以防风为试材,研究不同外植体、激素组合对愈伤组织诱导及不定芽分化的影响。结果表明:茎段是防风组织培养较为合适的外植体。茎段在添加2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 1.0mg/L的MS培养基上愈伤组织诱导率最高可达100%,叶片在添加2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 1.0mg/L的MS培养基上愈伤组织诱导率可达75%;继代后的愈伤组织转到6-BA 1.0 mg/L+NAA0.5 mg/L的MS分化培养基上进行分化,其分化率达72%。     

翠菊‘花束绯红’叶片的植株再生体系建立

以翠菊‘花束绯红’无菌苗为材料,研究了植物生长调节剂浓度及组合、光照条件、不同附加物对叶片及其愈伤组织再生植株的影响。结果表明:(1)在光照培养条件下,诱导翠菊叶片不定芽形成的最适培养基为MS+6-BA3.0mg·L-1+IBA1.0mg·L-1,诱导率为56.7%,平均不定芽数为3.3;(2)黑暗培养不利于叶片不定芽的分化,但促进叶片愈伤组织的形成;(3)培养基中分别添加脯氨酸、水解酪蛋白和NH4NO3等均能明显促进愈伤组织不定芽的诱导,最适培养基为MS+6-BA1.0mg·L-1+IBA0.1mg·L-1+脯氨酸300mg·L-1,诱导率为82.8%,平均不定芽数为4.5;(4)不定芽移到幼苗生根培养基(1/2MS+IBA0.1mg·L-1)上,生根率为89.1%,移栽后成活率达89.3%。     

茄子花药低温胁迫培养及耐冷性诱导

以 6个茄子品种为试材 ,在低温胁迫条件下进行花药培养。结果表明 5～ 6℃低温胁迫处理可诱导花药形成耐冷性愈伤组织 ,在MS +NAA(0 .0 2mg·L-1) +ZT(1.0mg·L-1)培养基上耐冷性愈伤组织的分化率达到31.6 % ,由耐冷性愈伤组织再生植株的低温伤害率明显低于原品种