东北民猪被成功克隆

东北农业大学、哈尔滨科技局及合作企业合作研究的采用成体体细胞作为核供体克隆猪技术取得成功。采用此技术克隆出来的3头东北民猪，自出生以来发育正常，长势良好。     

我国第一例成体体细胞克隆猪出生

据东北农业大学消息,我国第一例采用成体体细胞作为供体的3只克隆东北民猪10月12日在黑龙江省哈尔滨市出生.此举标志我国在克隆猪领域的研究工作达到国际先进水平.     

东北民猪被成功克隆

我国首例采用成体体细胞作为核供体的克隆东北民猪在哈尔滨诞生。这是我国第二例取得成功的克隆猪。     

中国第1例成体体细胞克隆猪出生

据东北农业大学消息,我国第1例采用成体体细胞作为供体的3只克隆东北民猪于2006年10月12日在哈尔滨市三元畜产实业有限公司种猪场出生。表明我国在克隆猪领域的研究工作达到国际先进水平。     

我国首例绿色荧光转基因克隆猪成功产下“荧光猪崽”

从东北农业大学获悉，我国酋例绿色荧光蛋白转基因克隆猪2008年1月7日成功产下2头具有绿色荧光遗传特征的小猪。有关专家称，这次试验的成功标志着我国通过体细胞核移植技术生产转基因猪已经发展成熟。     

我国首例绿色荧光转基因克隆猪成功产下“荧光猪崽”

从东北农业大学获悉，我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪于2008年1月7日成功产下2头具有绿色荧光遗传特征的小猪。有关专家称，这次试验的成功标志着我国通过体细胞核移植技术生产转基因猪已经发展成熟。     

我国首例“转基因”克隆猪在哈降生

曾采用成体体细胞克隆技术,培育出我国首例成体体细胞克隆东北民猪的东北农业大学刘忠华教授,带领的课题组研究人员,又成功培育出绿色荧光蛋白“转基因”克隆猪。22日晚,3头“转基因”猪在哈尔滨市三元畜产实业有限公司种猪场     

我国首例绿色荧光转基因克隆猪成功产下荧光猪崽

2008年1月7日,我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪成功产下2头具有绿色荧光遗传特征的小猪。有关专家称,这次试验的成功标志着我国通过体细胞核移植技术生产转基因猪已经发展成熟。     

体细胞核移植技术生产转基因猪在我国已发展成熟

2007年岁末，在东北农业大学，一头绿色荧光转基因克隆猪顺利产下11个“猪宝宝”，其中2头具有绿色荧光特征。有关专家称，这次试验的成功标志着中国通过体细胞核移植技术生产转基因猪已经发展成熟。     

供体细胞种类及性别对猪体细胞核移植效果的影响

本研究通过比较胎儿成纤维细胞、颗粒细胞、卵丘细胞和不同性别猪胎儿成纤维细胞的核移植效果,探讨供体细胞的种类及性别对猪体细胞核移植重构胚胎发育潜力的影响。结果表明:胎儿成纤维细胞的融合率(64.74%)高于颗粒细胞的融合率(51.05%)和卵丘细胞的融合率(56.89%),但3种细胞的卵裂率及囊胚率差异不显著(P>0.05);胎儿成纤维细胞、颗粒细胞和卵丘细胞均可作为供体细胞用于构建猪体细胞核移植的重构胚。雄性胎儿成纤维细胞核移植重构胚的融合率和分裂率与雌性胎儿成纤维细胞重构胚的融合率和分裂率相比差异不显著(P>0.05),但雄性胎儿成纤维细胞核移植重构胚的囊胚率显著低于雌性胎儿成纤维细胞核移植重构胚的囊胚率(P<0.05)。     

体内、外卵母细胞对猪体细胞克隆胚胎发育潜力的影响

为探讨猪体内、外成熟卵母细胞对核移植重组胚胎发育能力的影响,试验通过激素促排获得体内成熟卵母细胞和收集废弃卵巢获取体外成熟的卵母细胞,分别构建核移植重组胚,比较其卵裂率、囊胚率及胚胎移植受孕情况。结果显示,PGC+PMSG+HCG组的平均排卵数（27.8枚/头）显著高于PGC+HCG （12.5枚/头）、PMSG+HCG （13.7枚/头）及自然发情组（11.5枚/头）（P<0.05）,体内收集到的卵母细胞,可用于构建核移植重组胚的可用卵率均达到90%以上,与其他处理组差异不显著（P>0.05）,说明通过激素处理可获得更多的可用卵母细胞,而且卵母细胞的质量没有显著差异;以体内和体外成熟卵母细胞作为核移植受体构建的克隆胚胎,二者的胚胎融合率（80.31%和79.29%）和卵裂率（90.40%和86.51%）差异均不显著（P>0.05）,但来自体内成熟卵母细胞克隆的胚胎发育至囊胚期的比例显著升高（P<0.05）;将体内、外成熟卵母细胞构建的核移植重组胚分别移植代孕母猪,头平均移植30或60枚时,体内成熟卵母构建的克隆胚胎移植出生仔猪10头,而体外培养卵母细胞构建的克隆胚胎均未着床受孕,表明通过激素促排获得的卵母细胞质量更好,能显著提高克隆胚胎的囊胚率,减少胚胎移植数量,提高代孕母猪的怀孕率。     

东北民猪Myostatin基因5’调控区的克隆和RFLP分析

东北民猪是我国的地方猪种，具有肉质鲜美、产仔数多的优点，但瘦肉率相对较低，不符合现代人的消费习惯。骨骼肌生长抑制素基因（myostatin，又名GDF8）最先由McPherron A C等通过简并引物PCR法发现，属于TGF-β超家族，仅在骨骼肌中特异表达。通过基因敲除法培育的突变纯合体小鼠骨骼肌重量比野生型小鼠重2-3倍，证明myostatln是骨骼肌生长的负调控元。1998年，SomtegardTS等将猪的myostatin定位于15号染色体长臂的15 q 2．3。该文以东北民猪为研究对象，克隆了myostatin基因的5’调控区，测定了其核苷酸序列，并根据StrailA等发现的突变位点对该区域进行了酶切多态性分析，为进一步研究猪myostatin基因的结构与功能奠定基础。     

动物体细胞克隆机理的几个关键问题

克隆即clone的音译,来源于希腊文,表示用离体的细枝或小树枝增殖。动物克隆即动物的无性繁殖,就是将供体细胞核移人去核的卵母细胞中,使后者不经精子穿透等有性过程即可被激活、分裂并发育成个体,使得核供体的基因得到完全复制,也称为动物体细胞克隆。1997年2月,英国罗斯林研究所的Wilmut等人利用绵羊乳腺细胞进行核移植试验,获得了世界上第一头体细胞克隆绵羊-多利(Dolly),这一成果开创了哺乳动物核移植的新的里程碑。1998年,美国夏威夷大学等率先在小鼠上进行了成年体细胞的克隆。1998年,(Science)杂志报道了美国科学家用培养的携带外源基因的胎牛成纤维细胞作为供核获得4头转基因克隆牛。     

小鼠皮肤成纤维细胞的体细胞核移植

取成年小鼠唇部皮肤进行培养，分离成纤维细胞并血清饥饿培养1周，用作核供体。对成年小鼠进行超排，取卵母细胞用作核受体，核移植重构胚经SrCl2激活处理6h后，同mM16培养液和小鼠输卵管上皮细胞共培养，把发育到早期囊胚的重构胚转移至小鼠胎儿成纤维细胞饲养层上，添加ES细胞条件培养液，消化分离ICM，然后接种培养，对孵出的ES细胞样集落进行鉴定培养。结果显示，小鼠唇部皮肤成纤维细胞为核供体，核移植重构胚2-细胞率为54．05％，桑椹胚率17．14％，囊胚率6．90％，对照组卵丘细胞的核移植重构胚2-细胞率为60．00％，桑椹胚率21．85％，囊胚率11．69％，但2种供体细胞在支持核移植重构胚发育能力上差异不显著。成纤维细胞重构囊胚中6个囊胚分离出ES细胞样集落，3个ES细胞样集落可稳定传代；对照组卵丘细胞重构囊胚中9个囊胚中分离出ES细胞样集落，5个ES细胞样集落可稳定传代。从核移植重构胚中分离出的ES细胞样集落具有岛状或巢状群体生长形态，生长旺盛的集落可自发分化成单个散在或片状存在的上皮样或梭形细胞，碱性磷酸酶检测为阳性，常规冻存复苏，仍显示ES细胞特征。