牧草中异型发酵乳酸菌的分离与鉴定

本试验以禾本科牧草为研究对象,从人工种植的无芒雀麦(Bromus inermis)、披碱草(Elymus dahuri-cus)和野生牧草老芒麦(E.sibiricus)、野生冰草(Agropyroncristatum)、羊草(Leymus chinensis)上共分离得到8株异型发酵乳酸菌(Lactobacillus),依据生理生化试验方法,将8株异型发酵乳酸菌鉴定到种的水平,其中布氏乳杆菌(L.buchneri)4株、短乳杆菌(L.brevis)2株、果糖乳杆菌(L.fructivorans)2株。通过测定8株异型发酵乳酸菌的生长曲线和产酸速率,研究这8株异型发酵乳酸菌的生长特性,最终筛选出生长速度快、产酸性能好、适宜用作青贮饲料添加剂的2株布氏乳杆菌。     

植物乳杆菌FJR分离鉴定及益生特性研究

试验旨在从野生海鲈鱼肠道分离筛选具有益生功能的乳酸菌，重点考察其降糖益生特性。从野生海鲈鱼样品中共分离到15株乳酸菌，通过评价其产酸、抑菌和还原糖利用能力，筛选出1株植物乳杆菌FJR（保藏号CGMCC No.23798）。该菌株产酸能力强，对嗜水气单孢菌、副溶血弧菌等病原菌均有显著抑制效果，且可以快速利用还原糖。利用对糖特别敏感的大口黑鲈作为研究对象，评价植物乳杆菌FJR的降糖效果。试验选用150尾体重（150±5）g的大口黑鲈，随机分为2个处理，每个处理3个重复，每个重复25尾，对照组饲喂基础饲料，试验组在基础饲粮中添加1.0×106 CFU/g植物乳杆菌FJR。在投喂饲料后0、1、2、3 h，取肠道内容物和血液，测定还原糖和血糖含量。结果表明：饲喂植物乳杆菌FJR后，大口黑鲈肠道还原糖和血糖含量均低于对照组（P<0.05），证明植物乳杆菌能够能调节大口黑鲈糖代谢。     

杏鲍菇漆酶基因原核表达载体的构建及乳酸菌的遗传转化

为获得有效表达的产漆酶乳杆菌工程菌和既可以产乳酸又可以产漆酶的益生菌制剂。以杏鲍菇为试验材料,利用RT-PCR方法,克隆漆酶基因,将其与乳酸菌食品级表达载体质粒p MG36e进行连接,构建漆酶乳酸杆菌表达载体质粒p MG36e-Lacc1,通过电激转化法使其进入从青贮饲料中提取的布氏乳杆菌中,并探究影响布氏乳杆菌电转化的最适条件。试验结果表明:扩增得到长度为1 596 bp的漆酶基因片段,成功构建漆酶乳酸杆菌表达重组质粒,利用电激转化技术使其导入布氏乳杆菌基因组中,研究表明当电场强度达到1.75 k V,用SMRS培养基复苏培养1.5 h后,得到较高的电激转化率。     

乳酸菌微生态制剂防治奶牛隐性乳房炎应用研究

本研究以不同牧场中的荷斯坦奶牛为研究对象,以100~200g/(头·d)的剂量添加干酪乳杆菌HM-09和植物乳杆菌HM-10及其代谢产物的复合乳酸菌微生态制剂(有效活菌数≥1.5×109 cfu/g),应用牛场DHI数据中的乳体细胞数(SCC)数据对试验牛只进行隐性乳房炎分析,研究其对奶牛隐性乳房炎的防治效果,结果显示:饲喂5~10d乳酸菌微生态制剂后,奶牛平均体细胞数显著降低23.8%~62.8%。结果表明,本试验所用复合乳酸菌微生态制剂可应用于奶牛隐性乳房炎的防治。     

利用绿色荧光蛋白报告基因筛选植物乳杆菌强启动子

[目的] 结合已知植物乳杆菌启动子和绿色荧光蛋白报告基因,筛选能够进行稳定强表达的启动子,为构建植物乳杆菌高效特异表达载体提供基因元件。[方法] 分别合成已知植物乳杆菌启动子P11、Pefp、Ptuf33和Ptuf34及其下游绿色荧光蛋白报告基因,并使用上述合成序列分别替代pMG36e乳酸菌表达载体原有多克隆位点及其上游启动子部分,形成启动子筛选载体。利用电转方法将成功构建的启动子筛选载体转化至植物乳杆菌,通过检测重组子绿色荧光信号强弱对比分析启动子强弱特性。[结果] 4个启动子中转录延伸因子TU基因启动子Ptuf33和Ptuf34在受体植物乳杆菌中表达目的基因水平显著（P<0.05）高于其他启动子。[结论] 结合该研究结果及相关报道可知,启动子Ptuf33和Ptuf34在植物乳杆菌中普遍高表达,可以为后续高表达植物乳杆菌载体构建提供元件。     

不同乳酸菌制剂对金荞麦单贮及金荞麦和玉米淀粉混贮的影响

本研究旨在探讨不同乳酸菌制剂对金荞麦单独青贮,以及金荞麦与玉米淀粉混合青贮过程中的乳酸菌菌数、理化指标变化趋势及青贮效果的影响。以人工栽植的初花期金荞麦为青贮原料,选择3种复合乳酸菌制剂进行青贮。结果表明,金荞麦和玉米淀粉混合青贮的青贮品质明显优于金荞麦单贮,添加植物乳杆菌、布氏乳杆菌、屎肠球菌的菌粉组合对于金荞麦青贮品质的提升要显著优于植物乳杆菌、干酪乳杆菌菌粉组合和植物乳杆菌、发酵乳杆菌菌粉组合。综上,金荞麦不适宜单独青贮,需要配合一定比例的玉米淀粉进行混合青贮,植物乳杆菌、布氏乳杆菌和屎肠球菌的复合乳酸菌制剂更有利于金荞麦青贮品质的提升。     

比较滴鼻与口服植物乳杆菌NC8对雏鸡T淋巴细胞的影响

随着乳酸菌等安全级微生物在食品、医药、饲料、养殖等领域中的应用及不断发展,正确认识、使用乳酸菌显得尤为重要。为了探寻一个最佳的乳酸菌给予途径,以植物乳杆菌NC8为研究对象,通过滴鼻与口服两种不同途径,按一定剂量免疫雏鸡。并对免疫后雏鸡脾脏及外周血T淋巴细胞含量进行检测。结果表明,植物乳杆菌NC8能够增强雏鸡免疫能力,且滴鼻与口服两种途径相比较,滴鼻途径效果相对显著。     

表达A亚群禽白血病病毒Gp85蛋白的乳酸菌的构建

本研究旨在构建乳酸菌表达载体以研制A亚群禽白血病病毒（Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A）的活菌疫苗,用于预防禽白血病。使用锚定表达载体构建2株分别表达gp85和gp85-DCpep基因的重组植物乳杆菌,以感染ALV-A的DF-1细胞的基因组DNA为模板,使用PCR方法扩增ALV-A Gp85蛋白的编码基因gp85,将树突状细胞靶向肽（DC-targeting peptide,DCpep）编码基因与gp85基因进行融合,获得gp85-DCpep基因;使用乳酸菌锚定表达载体pSIP409-pgsA’通过同源重组的方法构建重组质粒pSIP409-pgsA’-gp85-DCpep和pSIP409-pgsA’-gp85;经测序正确后将上述质粒分别电转化植物乳杆菌NC8感受态细胞,获得重组植物乳杆菌;使用SppIP诱导重组植物乳杆菌的表达,收集处于对数生长期的菌体,通过反复冻融获取细胞膜的蛋白样,采用Western blotting技术检测pgsA’-gp85-DCpep和pgsA’-gp85蛋白的表达情况。结果显示,试验成功获得基因片段gp85和gp85-DCpep,构建的重组质粒pSIP409-pgsA’-gp85-DCpep和pSIP409-pgsA’-gp85测序无突变和丢失情况,并成功电转到植物乳杆菌NC8感受态细胞中,使用SDS-PAGE和Western blotting技术在细胞膜蛋白样中检测到蛋白的表达,大小分别为48.3（pgsA’-gp85-DCpep）和47 ku （pgsA’-gp85）。本试验成功构建了重组质粒pSIP409-pgsA’-gp85-DCpep和pSIP409-pgsA’-gp85,获得的重组植物乳杆菌NC8-pSIP409-pgsA’-gp85-DCpep和NC8-pSIP409-pgsA’-gp85中的蛋白均成功表达,且具有反应原性,为后期深入研究重组植物乳杆菌在抗ALV-A感染中的保护机制奠定良好的基础。     

不同乳酸菌组合对苜蓿青贮细菌群落结构的影响

为探讨不同乳酸菌互作对苜蓿（Medicago sativa）青贮细菌群落结构的影响，以2种植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌及凝结芽孢杆菌形成的6种乳酸菌组合按1.5 mL·kg^-1的添加量制作苜蓿青贮，以等量蒸馏水替代添加剂作为对照，45 d后运用高通量测序分析细菌群落结构。结果表明，各苜蓿青贮的优势乳酸菌群均为厚壁菌门（Firmicates）的乳杆菌属（Lactobacillus）和片球菌属（Pediococcus），二者相对丰度之和为65.4%~79.0%，其中含植物乳杆菌处理高于对照和含凝结芽孢杆菌处理；与对照相比，乳酸菌组合处理提高了菌群Chao1和ACE指数但降低了Simpson和Shannon指数；6个乳酸菌组合处理中，含凝结芽孢杆菌处理组与对照相似性较高，对苜蓿青贮细菌群落影响较小；相关分析表明，苜蓿青贮菌群结构和多样性可较好地解释其营养品质的变化。综上，乳酸菌组合在一定程度上改善了苜蓿青贮的细菌群落结构，其中含植物乳杆菌的组合效果较好。     

不同乳杆菌对蔗梢青贮有氧稳定性及品质的影响

试验旨在研究植物乳杆菌、布氏乳杆菌和内源性副干酪乳杆菌对蔗梢青贮有氧稳定性及品质的影响。选取ROC 22蔗梢为试验材料，分别设置副干酪乳杆菌、植物乳杆菌及布氏乳杆菌添加水平为0.05%、0.10%、0.20%进行青贮，稀释活化后的菌剂按为5 mL添加量喷施，阴性对照组（CK组）喷施5 mL无菌生理盐水进行青贮。常温裹膜青贮30 d。结果表明，经过添加菌剂蔗梢青贮的稳定性和品质均高于对照组，添加副干酪乳杆菌蔗梢青贮的有氧稳定性最高，难消化的木质素和半纤维含量明显降低，乳酸菌活菌数和产有机酸含量提升，霉菌得到有效抑制。研究表明，添加乳酸菌菌剂可以提高蔗梢青贮的有氧稳定性，改善青贮的霉变情况，且副干酪乳杆菌0.20%发酵组的蔗梢青贮的发酵有氧稳定性与青贮品质较好。     

抑霉乳酸菌的筛分及其抑菌特性研究

试验旨在获取生物抑霉的优良菌株以及为质量安全青贮饲料生产提供高效菌剂。从青贮饲料、酸奶以及奶豆腐中分离纯化出乳酸菌和霉菌,并且通过双层平板法对具有抑制霉菌活性的乳酸菌菌株进行筛选,测定其上清液抑霉效果;采用蛋白酶处理和高温处理法分析乳酸菌抑霉的有效成分。结果表明:分离筛选的乳酸菌和霉菌经鉴定为植物乳杆菌和黄曲霉菌,且植物乳杆菌对黄曲霉菌的生长有明显抑制作用。蛋白酶处理对乳酸菌无细胞上清液的抑菌活性有不同影响,而加热处理并不改变其抑菌效果。研究表明,植物乳杆菌对黄曲霉菌生长有明显的抑制作用,推测其抑菌活性物质为蛋白质、肽类等,并且这些抑菌活性物质的热稳定性较高。     

干酪乳杆菌群和植物乳杆菌群的分子鉴定技术和分类方法的研究进展

乳杆菌属是乳酸菌类群中最大的一个属,在乳酸杆菌的研究和应用中,分类鉴定是其中的一个重要领域。由于乳杆菌属内许多种间的表型特征难以区别,利用生理生化实验方法往往无法进行准确鉴定。近几年,随着分子生物学的飞速发展,从分子和基因水平来认识乳酸菌的遗传结构和分类已成为可能,而采用常规的16SrDNA序列同源性分析不能将相近的植物乳杆菌群和干酪乳杆菌群分别鉴定到种及亚种的水平,目前许多新的分子鉴定技术和分类方法被用来进行相近乳酸菌的分类和鉴定。本文结合自己的试验归纳出如蛋白酶编码基因序列分析、扩增片段长度多态性分析、种间特异性PCR等九种用于区分和鉴定植物乳杆菌群和干酪乳杆菌群的分子技术和方法,对乳酸菌的多相分类学研究和工业化生产具有的重要意义。     

单一和复合乳酸菌添加剂对扁穗牛鞭草青贮品质的影响

利用实验室前期筛出的3株耐高温乳酸菌作为添加剂,探究单一和复合乳酸菌添加剂对高温高湿地区扁穗牛鞭草青贮品质的影响,进一步筛选出最佳的乳酸菌添加配比。试验设8个处理,分别为:1)戊糖片球菌(PP04);2)食窦魏斯氏菌(WC10);3)植物乳杆菌(LP694);4)M-1(PP04∶WC10=2∶1);5)M-2(PP04∶LP694=1∶2);6)M-3(WC10∶LP694=2∶1);7)M-4(PP04∶WC10∶LP694=2∶1∶1);8)CK(对照,无乳酸菌添加)。青贮60 d后,测定其发酵品质、营养成分及微生物组成,结果表明:1)处理组的NH3-N/TN显著低于对照组(P<0.05);2)处理组的乳酸、干物质含量和干物质回收率都显著高于对照组(P<0.05);3)处理组的pH值都小于4.2,其中,M-4处理组的pH值最低,为3.86;4)M-4处理组的微生物菌群组成和感官品质优于其他处理,乳酸含量最高,NH3-N/TN最低。因此,在扁穗牛鞭草青贮中添加单一或者复合乳酸菌均有利于调制出优质的扁穗牛鞭草青贮饲料,3种乳酸菌复合添加的M-4处理组改善青贮饲料的青贮品质的效果最佳,在生产实践中具有推广利用的潜质。     

Fermentation quality and chemical composition of shrub silage treated with lactic acid bacteria inoculants and cellulase additives

Effects of lactic acid bacteria (LAB) inoculants and cellulase additives on fermentation quality and chemical compositions of shrub silages were studied by using a small‐scale fermentation system. Two LAB inoculants of Qingbao (Lactobacillus plantarum, Pediococcus acidilacticii, Lactobacillus casei and Clostridium phage) and Caihe (Lactobacillus plantarum, Lactobacillus brevis and Pediococcus acidilactici) and a commercial cellulase made from Trichoderma reesei were used as additives for intermediate pea‐shrub, rush bushclover, arborescent ceratoides and shrubby silage preparation. The crude protein, neutral detergent fiber and water‐soluble carbohydrate contents of the four shrub materials were 10.1–14.2, 62.6–67.2 and 1.9–3.5% on a dry matter basis, respectively. All shrub silages had pH 3.40–4.43, ammonia‐N 0.1–0.2% g/kg and lactic acid 1.3–2.9% on a fresh matter basis. The silage quality of LAB‐inoculated silages did not have a greater effect than control silages, except shrubby silage preparation. Silages treated with the cellulase, the pH of rush bushclover and shrubby sweetvetch silage were significantly (P < 0.05) lower and the lactic acid content were significantly (P < 0.05) higher than the control silages. The results confirmed that shrub contained a relatively high content of crude protein; its silages can be preserved in good quality, and they are new potential resources for livestock feed.     

植物乳杆菌的益生特性及其在乳制品中的应用

植物乳杆菌（Lactobacillusplanrarum）能通过胃并定植于肠道,发挥调节肠道菌群、免疫调节、降低血清胆固醇、降血压和抗氧化等益生作用。此外,由于植物乳杆菌的益生特性,国内学者申请了诸多关于植物乳杆菌菌株专利。同时,近年来有关植物乳杆菌分子多样性的研究也充分开展。另外,植物乳杆菌还被广泛应用于乳制品生产,包括功能性酸乳、发酵豆乳、干酪、功能性乳酸菌饮料等乳制品中。     

植物乳杆菌的生理功能和组学研究进展

植物乳杆菌是乳酸杆菌的一种,在自然界中广泛存在,尤其是各类发酵食品中。植物乳杆菌是人体肠道微生物的一员,由其生产的发酵食品的发酵作用与其对人体的益生作用使得植物乳杆菌逐渐成为基因组学、蛋白质组学、转录组学和代谢组学研究的模式微生物,阐明微生物环境适应性及发挥有益功能等的分子机制。本文综述了近年来植物乳杆菌的生理功能和组学研究进展,以期为研究者提供借鉴。     

山竹岩黄芪青贮中优质乳酸菌的分离和鉴定

从山竹岩黄芪(Hedysarum fruticosum Pall.)青贮饲料中分离到3株乳酸菌(HF84,HF69,HF49)。经传统鉴定方法及16SrRNA序列分析,菌株HF84为蒙氏肠球菌(Enterococcus mundtii),菌株HF69为乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.Lactis),菌株HF49为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。3株乳酸菌均为同型发酵乳酸菌,蒙氏肠球菌在pH 3.0条件下不能生长,乳酸乳球菌乳酸亚种在pH 3.0、温度5℃时及6.5%NaCl溶液中不能生长,植物乳杆菌均可在试验设定条件下生长。通过测定3株乳酸菌的生长曲线和产酸速率,菌株HF49生长速度快、产酸性能好,可作为制备乳酸菌青贮饲料添加剂的优良菌株。     

添加不同乳酸菌剂对苜蓿青贮营养价值的影响

本试验旨在研究添加不同乳酸菌剂对苜蓿青贮营养价值的影响。以紫花苜蓿为原料,分别添加干酪乳杆菌（A-LAB组）、植物乳杆菌（B-LAB组）和戊糖片球菌（C-LAB组）各1×10⁶ CFU/g进行青贮,同时设置空白对照。发酵45 d后,应用康奈尔净碳水化合物-蛋白质体系（CNCPS）对苜蓿青贮营养价值进行评定。结果表明,在蛋白质组分中,与对照组相比,添加乳酸菌剂能降低非蛋白氮（PA）含量,其中B-LAB组达到显著水平（P＜0.05）;乳酸菌剂组中速降解真蛋白质（PB₂）和慢速降解真蛋白质（PB₃）含量均高于对照组,但差异不显著（P＞0.05）。在碳水化合物组分中,添加乳酸菌剂提高了糖类（CA）、非结构性碳水化合物（CNSC）的含量,降低了可利用纤维（CB₂）的含量,其中A-LAB组达到显著水平（P＜0.05）。综上所述,添加乳酸菌剂能在一定程度上通过保护真蛋白和提高快速降解碳水化合物组分及非结构性碳水化合物含量,提高苜蓿青贮营养价值,且分别以添加植物乳杆菌和干酪乳杆菌效果较好。     

杂交构树青贮饲料中优良乳酸菌的分离与鉴定

本试验对杂交构树(Broussonetia papyrifera)青贮饲料中附着的优良乳酸菌进行了分离培养,利用传统微生物培养和16S rDNA序列分析对分离的乳酸菌进行鉴定,以期为提高杂交构树青贮品质提供乳酸菌资源.试验最终分离得到8株优良乳酸菌,其中菌株G4,G7,G9被鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus...     

植物乳酸菌和贮藏温度对辣木叶青贮品质的影响

从辣木叶青贮中筛选分离出4个乳酸菌菌株,鉴定后分别为Lactobacillus plantarum（LP）,Lactobacillus farciminis（LF）,Weissella thailandensis（W）和Lactococcus lactis（E）。试验旨在探究不同温度下添加植物乳酸菌对辣木叶青贮的青贮品质、营养成分和单宁含量的影响。采用双因素（温度×植物乳酸菌）完全随机设计,两个温度组为15和30 ℃,乳酸菌处理组为CK,LP, LF, W和E。在青贮第60天时开袋取样进行测定。结果表明,辣木叶原料粗蛋白质含量为25.31%,可溶性碳水化合物含量为7.53%,添加乳酸菌可以显著降低pH,增加乳酸和乙酸含量,同时使乳酸菌数量和氨态氮含量显著降低（P<0.05）。贮藏温度在15 ℃时,乳酸菌数量,真蛋白含量显著高于30 ℃（P<0.05）。同时,非蛋白氮、氨态氮和游离氨基酸含量在15 ℃的贮藏温度时都显著低于30 ℃（P<0.05）。青贮后,各处理组的单宁含量都有下降,但无显著差异（P>0.05）。辣木叶蛋白质丰富,易于调制青贮饲料,较低的贮藏温度和添加植物乳酸菌对辣木叶青贮品质有明显的改善作用,但对降解单宁含量并未产生显著影响。