苜蓿总RNA提取方法比较研究

以苜蓿叶片为材料,利用紫外分光光度计和凝胶电泳法比较了改良CTAB法、异硫氰酸胍法、SDS法、Tris-热硼法和尿素法等五种方法提取的苜蓿总RNA的质量和纯度.结果表明:改良CTAB法提取的RNA的OD260nm/OD230nm大于2.O并且OD260am/OD280nm接近1.8,具有较高的纯度.凝胶电泳结果表明,改良CTAB法有28SrRNA和18S rRNA两条清晰的条带,且无降解;其它四种方法获得的RNA品质较差,有降解和弥散现象.将改良CTAB法提取的RNA逆转录成cDNA,经RAPD扩增后出现4条清晰的条带,进一步证明了改良CTAB法提取的总RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的要求.     

两种一步法RNA提取试剂的比较

RNA的提取在生物医学研究和临床检测上应用广泛。本文分别用进口Invitrogen公司生产的以及我们自己研制的一步法RNA提取试剂，提取大肠杆菌RNA、鸡肌肉组织RNA和尿囊液RNA，通过核酸电泳和荧光定量RT-PCR进行比较。结果表明用我们自己研制的和进口的试剂提取的RNA都不含有DNA；这些RNA都可以作为模板进行RT-PCR检测，并且在数量上相互之间没有明显差异。说明我们自己研制的一步法RNA提取试剂可以取代进口试剂。此外，本文还讨论了此类试剂一些评定方法。     

骨组织中总RNA提取方法的改进

为了改进经典Trizol法,我们建立了一种有效提取矿化骨组织中总RNA的新方法。在Trizol裂解时加入等体积水饱和酚,在异丙醇沉淀时加入高浓度的盐溶液,并重复氯仿抽提1次。通过紫外分光光度法和1%甲醛变性凝胶电泳法分析提取RNA,以其逆转录cDNA为模板,经PCR扩增雌激素受体(ER)基因予以鉴定。结果,本方法获得的总RNA A260/A280达到1.85以上,电泳条带显示RNA完整,RT-PCR结果显示其纯度较好。结果表明,改良Trizol法是一种从矿化骨组织中提取总RNA的高效便捷的方法。     

荔枝果皮总RNA提取方法的筛选

以三月红荔枝果皮为试验材料,通过采用改良CTAB法、SDS法、改良SDS法、改良Bugos法和RNAplant plus Reagent试剂盒（TIANGEN公司）提取总RNA,采用浓度检测、纯度检测、RT-PCR等方法进行提取结果检测,进而筛选出最佳的提取方法。结果表明,这五种方法都能从三月红荔枝果皮中提取出总RNA,但总RNA浓度和纯度有明显的差异。其中采用改良Bugos法、改良SDS法和RNAplant plus Reagen试剂盒提取RNA的浓度较高;采用改良CTAB法和RNAplant plus Reagen试剂盒提取的总RNA纯度较高,完整性较好。采用SDS法、改良SDS法和改良Bugos法所提取的荔枝果皮总RNA纯度低,降解严重。经RT-PCR验证,采用改良CTAB法和RNAplant plus Reagen试剂盒均能扩增得到200bp的18sRNA编码基因片段。综合以上各项检测的结果,改良CTAB法为提取荔枝果皮总RNA的最佳方法,总RNA质量和得率满足后续分子生物学实验的需要。     

根蘖型苜蓿根部RNA提取方法的比较

以根蘖型苜蓿Medicago sativa的根、茎、叶为材料,利用紫外分光光度计和凝胶电泳法比较了改良CTAB法和TRNzol试剂盒法等4种方法提取的苜蓿总RNA的产率和纯度。结果表明:改良CTAB法提取的RNA的OD260nm/OD230nm大于2.0,并且OD260nm/OD280nm接近1.8,具有较高的纯度。凝胶电泳结果表明,改良CTAB法有28S rRNA和18S rRNA 2条清晰的条带,且很少有降解;TRNzol试剂盒法获得的RNA品质也较好,但存在降解和弥散现象;其他2种方法提取效果较差。这证明改良CTAB法提取的总RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的要求;TRNzol试剂盒法也可以满足实验的下一步要求,但需要进一步纯化。     

猪卵泡颗粒细胞总RNA提取方法改进的探讨

RNA是一类非常有用的生物大分子,在分子生物学研究领域正发挥越来越重要的作用。本文介绍一种改进过的从动物组织提取总RNA的方法,实践证明,该方法重复性好,实用性强。用此方法提取的猪卵泡颗粒细胞总RNA,无DNA污染物等问题,完全满足分子克隆、基因表达等分子生物学研究的需要。     

油菜蜂花粉总RNA(含小RNA)大量提取及RT-qPCR检测

大量提取含小RNA的油菜蜂花粉总RNA,为研究油菜蜂花粉所含外源性miRNA在动物和人体内发挥的生理和病理功能研究奠定基础。改良苯酚-氯仿法大量提取油菜蜂花粉总RNA,Nanodrop 2000检测浓度和质量,琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性;所得的总RNA经过RT-qPCR扩增。提取的总RNA260/280为2.11,产量高于1‰。电泳条带清晰,完整性良好。可扩增出油菜基因组中的miR-159和miR-166a,且可进行丰度差异比较。本方法能大量提取包括油菜蜂花粉在内的植物RNA(含小RNA),为中草药和其他植物来源天然产物中功能性miRNA在动物和人体内发挥的生物学功能研究奠定基础。     

柱花草叶绿素提取方法的研究

采用几种有机试剂提取液在暗处直接浸提柱花草叶片叶绿素,结果表明,用80％丙酮溶液提取效果较好．操作简单,效率高,适合科研上大批量样品测定,与目前报道的混合液提取法效果最好的结论有些不同。通过测定丙酮溶液在提取过程中随时间递增对比看出叶绿素溶液十分稳定。     

山羊粪便总DNA提取方法的比较

本试验比较了从山羊粪便中提取总DNA的四种方法的优缺点,旨在为后续实验提供合适的提取方法。笔者首先采用PBS缓冲液过夜处理粪便标本,继而通过酚-氯仿抽提法、CTAB抽提法、天根试剂盒法和OMEGA试剂盒法提取样品总DNA。结果显示：酚-氯仿抽提法提取的DNA完整性不好,且纯度低;CTAB法提取的DNA浓度和纯度都较高,但完整性不好;试剂盒法提取方便,操作简单,时间短,但提取的浓度较低,其中天根试剂盒法提取的DNA纯度高,完整性好。综合考虑,天根试剂盒法是提取山羊粪便总DNA的最佳方法。     

蒙古马肠道细菌总DNA提取方法的比较

本试验采集蒙古马新鲜粪便样品,采用酚－氯仿抽提法和2种细菌基因组DNA提取试剂盒法进行样品中细菌基因组DNA的提取。通过DNA浓度和纯度的测定,并将其作为模板扩增细菌16S rDNA V3区特异性片段对提取效果进行比较,从而找出更适合蒙古马粪便中细菌基因组DNA的提取方法。结果显示,3种提取方法得到的基因组DNA均能用于PCR扩增的模板,其中B试剂盒法提取的DNA数量较多,且纯度高,更适合用于提取蒙古马肠道微生物细菌基因组DNA及后续的蒙古马肠道微生物多样性等分子生物学试验。     

柱花草硼、钼微肥施用效果的研究

在热带地区土壤中硼、钼微量元素缺乏较为普遍.采用田间试验的方法,针对柱花草(Stylosanthes guianensis)喷施硼、钼微肥效果进行研究.结果表明,在土壤缺硼、钼的情况下,适量喷施钼、硼肥均能增加柱花草的产量.其中喷施钼增产效果较明显,其次为硼肥.与对照相比较,喷施钼肥和硼肥柱花草产量分别增加了2 475...     

柱花草浸出液对荔枝幼苗生长的影响

为研究柱花草(Stylosanthes guianensis)浸出液对荔枝(Litchi chinensis)幼苗生长的影响,试验以4种不同浓度的柱花草浸出液根施荔枝幼苗,观测荔枝幼苗生长的情况。结果表明：4种浓度柱花草浸出液对荔枝幼苗生长均有促进作用;柱花草浸出液处理可使荔枝植株增高,叶片数增多,叶面积增大,叶片叶绿素相对含量(SPAD)和全N、全P和全K的含量增加;浓度为25.0 mg/mL的柱花草浸出液处理效果最佳。     

超声波处理柱花草种子的生物学效应研究

采用超声波对柱花草Stylosanthes guiancnsis种子进行不同时间的处理,初步探讨超声波对柱花草种子的生物学效应。结果表明,适当时间的超声波处理对柱花草种子的发芽势、发芽率、幼苗株高、根长及活力指数均具有促进作用,以10 min的处理促长效果较理想。     

柱花草浸提液对柑桔幼苗生长的影响

以不同浓度的柱花草（Stylosanthes guianensis）水浸提液根施柑桔(Citrus reticulate Blanco)幼苗,观测柑桔幼苗生长的情况。结果表明,较高浓度的柱花草浸提液对柑桔幼苗生长均有促进作用;柱花草浸提液处理使柑桔植株增高,叶片增多,叶面积增大,生物量增加,植株全磷和全钾量增加。试验结果表明,100 mg.mL-1的柱花草浸提液处理对柑桔幼苗生长的促进作用最佳。     

柱花草9-顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶基因(SgNCED1)的克隆及表达分析

9-顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED)是高等植物ABA生物合成途径中的关键酶,本研究以3种豆科植物NCED的同源序列设计简并引物,用RT-PCR结合RACE以及嵌套PCR的方法,从柱花草叶片中克隆了一个编码NCED的基因,命名为SgNCED1。其cDNA全长2241 bp,开放阅读框架为1809 bp,编码602个氨基酸。Southern杂交结果表明,该基因在柱花草基因组中以单拷贝形式存在。氨基酸序列同源比对和系统进化分析表明SgNCED1与花生的AhNCED1高度同源(92%),与另外3种豆科植物的NCED也有很高的同源性(72%~75%)。亚细胞定位预测表明SgNCED1蛋白的N-末端具有叶绿体转运肽。叶片脱水诱导的SgNCED1基因的表达与内源ABA的积累、变化同步。     

亚热带高湿地区柱花草品种综合性状评价

2005年,在云南海拔1600 m的亚热带高湿地区,对12个柱花草品种进行了引种试验并用灰色关联分析法对牧草的适应性、地上生物量、茎叶比、青干比、分枝数、株高等指标进行综合评价。结果表明:柱花草是适合亚热带高湿地区栽培的优良草种,其中CIAT11362柱花草综合性能最优,可作为当地的推广品种。此外,R93柱花草、热研13号柱花草、GC1579柱花草、GC1463柱花草、热研5号柱花草、GC1581柱花草的综合性能也显著高于其他品种,应根据当地的不同利用方式选择使用。     

广西柱花草的研究及开发利用

柱花草作为优良的热带豆科牧草,在广西累积推广种植面积达8万hm2,产量达32～61t／hm2,营养价值高,粗蛋白含量14％～18％。广西对柱花草主要在品种引进选育、营养价值、混播、间种套种及草粉饲喂猪、鹅、鸡等畜禽的饲用价值等几个方面开展了近20多年的研究。该文对这些年广西在柱花草上取得的研究成果、研究现状及开发利用情况进行汇总,以期为柱花草的利用提供依据,促进柱花草产业的快速健康发展。     

柱花草愈伤组织培养与植株再生(简报)

对热研2号柱花草无菌实生苗的胚轴与叶片切段进行愈伤组织培养研究。结果表明,MS NAA 2 mg/L BA 0.5 mg/L及MS 2,4-D 3 mg/L BA 0.3~0.5 mg/L CH 200 mg/L对叶片切段诱导效果最好。而下胚轴愈伤组织的诱导以MS NAA 3 mg/L BA 0.1~0.3 mg/L和MS 2,4-D 3 mg/L BA 0.5 mg/L最优。愈伤组织在MS BA 2.5 mg/L NAA 0.1 mg/L进行分化培养,可实现高频植株再生。最适生根培养基为1/2MS 1.0mg/L IBA 0.5 mg/L IAA,生根率可达95.84%。     

水杨酸和硝普钠处理增强柱花草抗寒性

以35～40 d的柱花草(Stylosanthes guianensis)幼苗为材料,探讨单独或复配喷施外源水杨酸(SA)和NO供体硝普钠(SNP)对柱花草低温胁迫抗性的影响。结果表明单独使用外源SA或SNP均能提高柱花草叶片抗氧化酶活性,提高可溶性总糖、脯氨酸含量和叶片相对含水量,使叶片相对电导率及丙二醛(MDA)含量降低,减轻低温胁迫对幼苗的伤害;而SA和SNP复配喷施,对柱花草低温胁迫抗性的提高效果更佳。说明SA和NO可通过信号系统来调节柱花草的低温胁迫抗性。     

干热河谷退化山地柱花草品种(系)比较试验

2007-2009年在元谋干热河谷退化山地对12个柱花草品种(系)进行比较试验研究。观测研究牧草物候期、地上生物量、叶茎比、青干比、分枝数及株高、营养成分等生产性状和经济指标。试验结果表明,CIAT11362柱花草是综合性能较优的材料,年均产量、旱季产量和3年保存率最高,是较耐旱的牧草,适应干旱和半干旱地区种植,年均干草产量为20.31 t/hm²,旱季干草产量为7.17 t/hm²,3年植株的保存率为87.5%。GC1579柱花草和热研5号柱花草也是综合性状较优种质,可作为干热河谷地区推广的牧草。90089柱花草和西卡柱花草综合性能虽不是特别突出,但各有不可忽视的优点,在不同性能要求下是理想的材料。