敖汉细毛羊DKK1基因重组质粒的构建及其在成纤维细胞中表达量的研究

本研究旨在构建敖汉细毛羊DKK1基因的重组质粒,并对其转染成纤维细胞后基因的表达量变化进行研究。试验采集敖汉细毛羊肱二头肌提取基因组DNA,参照GenBank中DKK1基因序列设计1对引物,PCR扩增获得DKK1基因片段,连接到pEASYTM-T1载体,构建pEASYTM-T1-DKK1重组质粒并转化大肠杆菌（E.coli）DH5α感受态细胞,提取质粒进行酶切鉴定,鉴定正确后构建PmaxGFP-DKK1重组质粒,转化大肠杆菌（E.coli）DH5α感受态细胞;对敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养,并将构建的重组质粒PmaxGFP-DKK1转染成纤维细胞,利用实时荧光定量PCR技术检测DKK1基因在成纤维细胞中的表达量变化。结果显示,经酶切、测序鉴定发现,重组质粒PmaxGFP-DKK1构建成功,大小为3 956 bp,并成功瞬时转染成纤维细胞,转染细胞后DKK1基因的表达量明显升高,且转染组的表达量极显著高于对照组（P<0.01）。试验成功构建了敖汉细毛羊DKK1基因重组质粒,并成功转染成纤维细胞,为进一步研究DKK1基因的功能奠定基础。     

绵羊Myostatin基因真核表达载体的构建及在其原代成纤维细胞中的瞬时表达

Myostatin(MSTN)基因是胚胎期肌肉形成和出生后骨骼肌生长的主要调控因子之一,通过抑制肌细胞的扩增和分化而调控肌肉的生长和发育。为了进一步揭示MSTN在绵羊成纤维细胞中的生物学功能,采用RT-PCR从绵羊肌肉组织中扩增MSTN基因,将其cDNA终止密码子TGA删除,采用定向克隆技术连接到带有水母绿色荧光蛋白(AcGFP)报告基因的真核表达载体pAcGFP-N1中,构建融合蛋白重组质粒,经XhoⅠ/SacⅡ双酶切、测序鉴定后,用脂质体介导质粒转染绵羊原代成纤维细胞,观测荧光表达及用RT-PCR和Western blotting方法检测基因转录、蛋白质表达情况。结果表明,成功克隆绵羊MSTN基因,通过PCR方法在MSTN阅读框两端引入了XhoⅠ和SacⅡ克隆位点,成功构建pAcGFP-MSTN融合蛋白真核表达载体,重组质粒转染绵羊成纤维细胞24 h后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,通过RT-PCR扩增出1138 bp的转录产物,并用Western blotting检测到78 ku目的蛋白的表达。本试验为研究MSTN基因在成纤维细胞和脂肪分化调控中的具体机制奠定基础。     

DKK2基因质粒的构建及其在敖汉细毛羊成纤维细胞中表达量的研究

本研究旨在探究DKK2基因过表达后在敖汉细毛羊成纤维细胞中的表达量变化.采集40日龄敖汉细毛羊胎羊皮肤组织作为实验样品,首先参照GenBank中绵羊的DKK2基因序列信息进行引物设计,通过PCR反应对DKK2基因进行扩增,并与pGM-T载体进行连接反应,构建了pGM-T-DKK2重组质粒;将克隆载体转化DH5α大肠杆菌...     

猪Mx1基因真核表达载体的构建及表达

根据GenBank中猪Mx1基因序列设计并合成引物,对Mx1基因ORF区全长1 992个碱基进行扩增。将扩增片段与pVax1载体连接,构建pVa-Mx1-ORF真核表达载体。将构建的表达载体导入BHK-21和HEK-293细胞进行表达,用RT-PCR和间接免疫荧光对表达产物进行鉴定。结果表明,所构建的pVa-Mx1-ORF表达载体在BHK-21和HEK-293细胞中成功表达。     

崂山奶山羊Myostatin基因真核表达载体的构建及其在成纤维细胞中的表达研究

试验克隆了崂山奶山羊Myostatin基因序列,构建了其真核表达载体,并验证了其在成纤维细胞中的表达。本研究通过从崂山奶山羊肌肉组织中提取RNA,反转录后采用巢式PCR方法扩增出Myostatin基因序列,构建真核表达载体,通过转染成纤维细胞,采用RT-PCR方法验证其表达。结果表明,克隆出崂山奶山羊Myostatin基因的全长cDNA序列,大小为1128 bp,GenBank登录号:GU377303.1;构建pcDNA-MSTN真核表达载体,转染成纤维细胞48 h后通过RT-PCR检测,结果显示,Myostatin表达量显著增加,表明成功构建pcDNA-MSTN真核表达载体,为进一步研究Myostatin的生物学功能及转基因羊培育奠定基础。     

抗菌肽Cecropin P1基因真核表达载体的构建

选择大肠杆菌偏爱密码子，人工设计合成3条抗菌肽Cecropin P1基因寡核苷酸片段，通过PCR扩增得到抗菌肽Cecropin P1基因的全序列，并将其克隆到T-easy载体上，经双酶切重组于真核表达质粒pcDNA3.1（+）上，经酶切鉴定和序列分析，抗菌肽Cecropin P1基因表达载体构建成功。抗菌肽Cecropin P1基因表达载体的成功构建，为进一步研究其抗菌活性、抗菌机理及应用等打下基础。     

血红素氧合酶-2基因真核表达载体的构建

为构建血红素氧合酶-2（HO-2）真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP,并观察其在小鼠脑血管内皮细胞中的表达情况。试验利用PCR技术从C57BL/6小鼠海马组织中扩增出HO-2基因cDNA序列,用双酶切法将此序列克隆到真核表达载体pEF1α-IRES-AcGFP上,构建HO-2的真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP,重组载体经EcoRI和BamHI双酶切和测序鉴定。电穿孔法转染小鼠脑血管内皮细胞,48h后,实时定量PCR、Western blot检测HO-2在小鼠脑血管内皮细胞中mRNA和蛋白质水平的表达情况。结果表明,pEF1α-HO-2-AcGFP载体构建正确;重组载体转染小鼠脑血管内皮细胞后HO-2在mRNA水平表达量较空载体转染极显著增高（P〈0.01）,在蛋白水平表达量较空载体转染显著增高（P〈0.05）。表明HO-2基因的真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP构建成功,为进一步研究其机制和功能奠定了基础。     

表达3个外源基因真核表达载体的构建

为构建可以同时表达3个外源基因的真核表达载体,本实验以pCAGGs载体为骨架,引入SV40启动子及单疱疹病毒(HSV)TK基因的polyA序列,并且在β-actin启动子下游插入内部核糖体进入位点序列(IRES),构建了能够同时表达3个外源基因的真核表达质粒pCAGGs-IRES.本研究将PR8流感病毒的M基因、绿色荧光蛋白基因EGFP及H1N1猪流感病毒的HA基因,分别克隆于pCAGGs-IRES载体的3个启动子下游,转染细胞后,通过间接免疫荧光和western blot表明本实验构建的pCAGGs-IRES载体能同时表达3个外源基因.该载体有望为基因疫苗、基因操作及蛋白质相互作用等研究提供新的真核表达载体.     

利用同源重组技术构建Chordin基因载体及其在成纤维细胞中表达量的研究

本实验旨在利用同源重组技术构建敖汉细毛羊Chordin基因表达载体,将其转染至成纤维细胞中,分析Chordin基因mRNA及蛋白表达量的变化.以40日龄的胎羊为研究对象,采集组织样品,参照Genbank中Chordin基因序列设计一对含有同源臂的引物,通过PCR反应扩增目的基因片段,利用SoSo试剂盒将目的片段连接至表...     

湖羊FecB基因在新疆细毛羊胎儿成纤维细胞中的表达

为培育携带FecB多胎基因的高繁殖率新疆细毛羊,本研究提取了湖羊卵巢的总RNA,在此基础上反转录为cDNA,通过PCR扩增得到了湖羊的FecB基因,再与pMD19-T载体连接,构建了pMD19-T-FecB重组质粒。通过双酶切与真核表达载体pEGFP-N1连接,得到了pEGFP-N1-FecB真核表达载体。经测序与酶切证明,成功构建了pEGFP-N1-FecB真核表达载体,并转染新疆细毛羊胎儿成纤维细胞,通过药物筛选获得了表达湖羊FecB基因的阳性新疆细毛羊胎儿成纤维细胞,为培育高繁殖率的新疆细毛羊奠定基础。     

敖汉细毛羊小肠可吸收氨基酸适宜模式的研究

选用9只体况良好,体重35～45 kg的1.5周岁敖汉细毛羊半同胞羯羊,安装永久性瘤胃瘘管、十二指肠近端瘘管和回肠末端瘘管进行试验,试验采用随机区组试验设计,3个试验组为在基础日粮条件下的3种十二指肠氨基酸灌注模式,分别为M100、M85+H15和M70+H30,旨在寻找出一种相对平衡的有利于羊毛纤维生长的敖汉细毛羊小肠可吸收氨基酸适宜模式.试验结果显示,改善小肠可吸收氨基酸模式,可明显提高敖汉细毛羊的产毛性能.在本试验条件下,敖汉细毛羊小肠可吸收氨基酸适宜模式接近M70+H30.     

敖汉细毛羊主要经济性状的遗传力估计

研究采用父系半同胞相关法和单元内半同胞相关法分别估算了敖汉细毛羊的初生重、断乳重、断乳毛细度、周岁毛细度、周岁毛长、周岁剪毛量、周岁剪毛后体重、2周岁毛细度、2周岁毛长、2周岁剪毛量、2周岁剪毛后体重的遗传力。结果发现,这些性状的遗传力均为中高遗传力,在0.1～0.7之间。     

敖汉细毛羊主要经济性状的遗传力估计

研究采用父系半同胞相关法和单元内半同胞相关法分别估算了敖汉细毛羊的初生重、断乳重、断乳毛细度、周岁毛细度、周岁毛长、周岁剪毛量、周岁剪毛后体重、2周岁毛细度、2周岁毛长、2周岁剪毛量、2周岁剪毛后体重的遗传力.结果发现,这些性状的遗传力均为中高遗传力,在0.1～0.7之间.     

细毛羊产业可持续发展的出路

一、影响因素 1.经济分析 (1)消费需求与生产发展.2008年,在美国金融危机蔓延、全球经济减速的宏观背景下,消费需求普遍下滑.受全球形势影响,我国毛市也呈疲软状态,在消费市场"内忧外患"的压力下,企业购买热情不高,经销商节奏放慢.主销热点分散.有的供货有价无市,有的品种甚至有市无价.大盘情形持续弱化.总之,世界金融危机殃及全球经济发展,毛市阴霾包裹,企业举步维艰,前景不容乐观.     

青海加什科羊与青海毛肉兼用半细毛羊被毛纤维物理性能比较

青海加什科羊和青海高原毛肉兼用半细毛羊(以下简称半细毛羊)毛纤维细度周岁:公羊50支分别占18.00%、31.17%,母羊分别占20.40%、26.25%;56~58支公羊分别占53.57%、68.82%,母羊分别占53.47%、36.50%,差异极显著(P0.01);成年:公羊50支分别占20.00%、42.26%,母羊分别占20.22%、43.56%;56~58支公羊分别占51.25%、57.76%,母羊分别占51.44%、56.44%,差异极显著(P0.01)。     

鄂尔多斯细毛羊羊毛细度和皮肤转录组测序分析

羊毛细度是影响羊毛价格的主要因素,也是毛纺工业中评价羊毛品质最重要的指标。在分析鄂尔多斯细毛羊羊毛细度的基础上,利用高通量测序技术测定了不同纤维细度个体皮肤转录组。结果显示,鄂尔多斯细毛羊羊毛纤维直径为（13．16±3．39）～（27．81±5．63）μm,有半数羊毛样品的细度变异系数在18．7％。23．3％之间;育成公、母羊较成年公、母羊羊毛直径小（P〈0．01）;皮肤转录组测序共获得6个个体28．6G数据量．为下一步羊毛细度相关基因筛选奠定了基础。     

新吉细毛羊角蛋白的EST筛选及表达研究

试验旨在从新吉细毛羊皮肤组织表达序列标签(expressed sequence tags,ESTs)中筛选与毛囊发育相关基因并探讨其表达模式与羊毛细度的相关性。利用组装、比对软件Trinity与Blat对新吉细毛羊皮肤组织ESTs组装、注释进而筛选与毛囊发育相关基因,并通过实时荧光定量PCR相对定量方法以2^-△△Ct值检测相关基因在不同绵羊个体中的表达规律。结果显示,从474条ESTs中筛选注释获得了4个与毛囊发育相关的角蛋白基因KRT27、KAP3.2、KAP11.1和KAP8.1;4个角蛋白基因在超细型细毛羊皮肤组织表达量极显著高于细型细毛羊的表达量(P<0.01);4个角蛋白基因表达量:KRT27 >KAP3.2 >KAP11.1 >KAP8.1。该研究为角蛋白基因在细毛羊转录水平上的研究提供了一定数据。     

青海细毛羊血清芳基酯酶多态性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对509只青海细毛羊血清芳基酯酶的多态性进行研究。结果发现：①青海细毛羊芳基酯酶位点有ES A′和ES a为优势表型（64.05％）；②ES^A和ES^a等位基因频率分别为0.1997和0.8003；③基因杂合度为0.3196;④除ES A型母羊的周岁毛长显著大于ES a型母羊（P＜0.05）以外，其它各组的生产性状指标没有表型间的差异。