利用涡旋混合器对棉花基因组DNA提取方法的优化及SSR技术应用

为获得80个陆海杂交高代自交系材料的幼嫩叶片的高纯度、高完整性的DNA,应用涡旋混合器对传统的棉花基因组DNA的提取过程进行改进。结果显示:获得的棉花基因组DNA具有高完整性、高纯度的特性,SSR分子标记结果明显。利用涡旋混合器能有效提高棉花基因组DNA完整性及纯度,为后续开展棉花分子育种奠定了基础。     

不同方法提取棉花DNA的比较

主要通过选用国丰棉12为材料,对不同方法提取出的DNA进行扩增,然后进行琼脂糖凝胶电泳分析,结果表明:改良SDS法和改良CTAB法分别优于原SDS法和CTAB法,原SDS法和CTAB法分别优于氯仿一异戊醇法,由改进方法提取的棉花基因组DNA质量较高,能满足SSR等后续分子生物学研究的需要.     

棉花基因组DNA的提取及RAPD反应组成优化探讨

针对棉花富含棉酚、多糖、单宁、蛋白质等干扰物质的特点 ,主要通过快速研磨、加入 PVP、挑DNA、不加 RNA酶等方法 ,摸索出一条方便、快捷、产率高、适合棉花基因组 DNA提取的方法。另外 ,本文还探讨了模板浓度、Mg2 、d NTPs、Taq酶等因素对 PCR的影响 ,得到棉花 RAPD分析最佳PCR反应组成为 :60 ng模板 DNA、1 .2 mmo1·L-1Mg2 、0 .2 mmo1· L-1d NTPs、1单位 Taq酶 ,反应体积为 2 0μl。     

大麻基因组DNA提取方法的比较与优化

以大麻的幼嫩叶片和风干叶片为材料,分别采用优化的SDS法、CTAB法、高盐低pH法和碱裂解法这4种不同方法提取基因组DNA,并比较提取质量和效率.结果表明,采用4种提取方法,大麻干样叶和鲜样叶均可获得清晰DNA目的条带,鲜样叶基因组DNA纯度和得率的顺序为：SDS法＞CTAB法＞高盐低pH法＞碱裂解法,干样叶基因组DNA纯度和得率的顺序为：高盐低pH法＞SDS法＞CTAB法＞碱裂解法,优化的SDS法适用于大麻鲜样叶基因组DNA提取,而大麻干样叶基因组DNA的提取选用优化的高盐低pH法最适宜.     

苎麻野生近缘种植物基因组DNA提取技术的改进

用CTAB法提取悬铃叶苎麻基因组 DNA.针对悬铃叶苎麻中多糖、多酚、果胶和黄酮类次生代谢物含量高的特点,在裂解液中加入一定量的PVP 和β-巯基乙醇,采用一步抽提一步纯化的方法,并对传统乙醇沉淀法进行改进,使其更利于对基因组 DNA 进行浓缩和纯化.在获得高质量 DNA 的同时,大大节约了提取时间和程序.经实验验证,该方法提取的 DNA 能满足酶切、连接等高精度分子实验要求.     

棉花基因组封阻DNA制备方法探讨

棉花基因组大,重复序列含量高,在荧光原位杂交研究中,需要利用基因组封阻DNA降低背景信号。本试验以棉花基因组DNA为材料,通过煮沸法和超声波法进行处理,探讨棉花基因组封阻DNA的制备方法。结果表明,DNA样品沸水浴70 min和80 min时,DNA片段长度主要集中在200～800 bp,可以满足封阻DNA的要求;超声波打断法处理影响参数较多,在总超声波处理时间10 min、间隔时间20 s、功率25%的条件下,超声时间60 s时,DNA片段大小主要集中于400 bp以下,基本可以满足长度要求。综合比较2种棉花封阻DNA制备方法,煮沸法要比超声波破打断易于控制,更适合于实验室常规采用。     

不同方法从大豆不同组织中提取基因组DNA效果的比较

从大豆组织中获得高质量和足够产量的基因组DNA,是进行大豆分子生物学研究的基础.为进行大豆基因组的PCR,RAPD,SSR等分子生物学研究,分别以大豆种子和其叶片为实验材料,采用改良的SDS法和CTAB法对大豆基因组DNA进行了提取.对DNA的提取效果,采用紫外分光光度检测、琼脂糖凝胶电泳分析及DNA的限制性内切酶图谱分析进行了综合比较.结果表明,在以叶片为材料时,SDS法和CTAB法的大豆基因组DNA的提取效果差别不大,SDS法稍好于CTAB法.在以大豆种子为材料时,SDS法的提取效果明显优于CTAB法,SDS法可从大豆种子中提取到能够充分满足各种分子操作的高质量和数量的大豆基因组DNA.     

一种快速提取玉米基因组DNA的方法

实验以SDS为主要提取试剂,建立了用于玉米叶片基因组DNA的微量快速提取方法。结果表明:利用此方法提取的玉米叶片基因组DNA具有使用药品少、操作简单、迅速、成本低等优点,每人每工作日可以提取180～250个DNA样品,一个样品可供80～100次PCR反应使用。此DNA提取方法可有效用于玉米的转基因成分检测。     

悬铃叶苎麻基因组DNA的六种提取方法比较

悬铃叶苎麻(Boehmeria tricuspis(Hance)Makino)是一种多年生草本植物,含有较多的多酚、多糖等次生代谢物质,这些次生代谢物质能够与基因组DNA结合从而影响其DNA的提取。本文以悬铃叶苎麻幼嫩叶片为试材,采用6种方法提取基因组DNA,并比较其提取效果,以期寻找到正确的、快速的、能够得到高质量的基因组DNA的方法。琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度仪、SSR-PCR扩增和限制性内切酶酶切等方法检测不同方法提取的全基因组DNA的质量和纯度。结果显示:采用方法 1(Tian Gen试剂盒)提取的溶液中含有杂质,DNA含量较少;方法 2(常规CTAB法)提取的DNA含有较多杂质;方法 3(硅胶-CTAB法)和方法 4(酚抽提-CTAB法)没有提取到DNA;方法 5(高盐预先去杂-CTAB法)得到的基因组DNA溶液含有较多的蛋白质或盐;方法 6(葡萄糖预先去杂-CTAB法)是唯一能获得高质量的基因组DNA,能够满足PCR、限制性内切酶酶切等分子实验对DNA的要求。本研究找到了一种通用、简单易行,成本低且安全的去除植物DNA提取过程中多糖等杂质的方法,为悬铃叶苎麻后续的其他分子生物学的研究奠定了基础。     

一种快速微量提取橡胶树胚基因组DNA的方法

为了建立一套快速检测橡胶树早期胚基因组变异情况的微量检测体系,需先建立一种快速微量提取橡胶树胚中基因组DNA的方法。运用CTAB改良法、尿素改良法、SDS法分别对1 mm3橡胶树早期胚进行基因组DNA提取,并对其DNA进行质量检测和PCR验证。结果表明,尿素改良法的DNA提取率高于SDS法和CTAB改良法;样品的DNA适合PCR检测需要。因此尿素改良法是适宜于微量橡胶树胚基因组DNA提取的理想方法。