绿僵菌研究的新进展

绿僵菌研究的新进展高松（中国农科院生物防治研究所，北京１０００８１）ＣＵＲＲＥＮＴＳＴＡＴＵＳＯＦＳＴＵＤＩＥＳＯＮＭＥＴＡＲＨＩＺＩＵＭＳＰＰ．ＧＡＯＳｏｎｇ（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｏｎｔｒｏｌ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏ...     

布氏白僵菌和金龟子绿僵菌两变种的生长性状及其对蛴螬的毒力测定

以蛴螬病原真菌--布氏白僵菌、绿僵菌小孢变种作参照菌,研究了新分离鉴定的绿僵菌大孢变种的生物学特性,测定了不同温度、不同培养基条件下各菌株对蛴螬的致病能力.结果表明：绿僵菌大孢变种与两种参照菌的培养条件接近,最适宜生长的温度为25℃,所试的3种培养基中,最适宜的培养基为PPDA,其次为SDAY;绿僵菌大孢变种在偏低温（10～20℃）的环境下对蛴螬的毒杀能力比布氏白僵菌强,土壤处理和喷雾处理后,累计僵虫率分别达88.23%和76.47%,有很好的田间应用前景.两种真菌的拌土处理效果高于直接喷雾.鉴于绿僵菌Ma1的致病力较强,在生产上可用该菌进行土壤处理,防治蛴螬等地下害虫.     

绿僵菌感染白蚁生物测定新方法

白蚁是世界性害虫。不少种类对森林、房屋建筑、电讯设备、水库土坝等造成严重危害。利用金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)防治白蚁,已有不少研究。本文提出绿僵菌感染白蚁生物测定新方法,比以往的方法更省时。试验以象白蚁(Nasutitermes exitiosus)作供试昆虫,但也适用于对其它白蚁的研究。     

绿僵菌无纺布菌条制作工艺

在接种优良液体种子的基础上，以单位面积的产孢量为指标，筛选了制作多种蛀干害虫的病原——绿僵菌无纺布菌条的最佳营养组合及培养条件。结果表明，最佳营养条件为（g／L）：白砂糖20g、黄豆粉40g、蛋白胨6g；琼脂含量对产孢量无显著影响；最佳培养条件为：25℃下，相对湿度（RH）95％，产孢量可达3．6×10^8～3．7×10^8孢子／cm^2。     

绿僵菌侵染对黏虫免疫反应的影响

为揭示黏虫被病原菌侵染后的免疫应答机制,本试验分析比较了黏虫幼虫被金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae侵染后不同时间其血淋巴蛋白含量、免疫关键酶系(酚氧化酶PO,溶菌酶)活性、抗菌活力以及血细胞数量等免疫相关指标的变化。结果表明:受绿僵菌侵染后,黏虫6龄幼虫血淋巴蛋白含量在侵染初期(6 h和24 h)显著高于对照,侵染48、72和96 h后幼虫血淋巴蛋白质含量显著低于对照。且侵染后幼虫血淋巴PO活性也呈现先升高后降低的趋势,侵染初期(6 h和24 h)显著高于对照,侵染后期除72 h外与对照组无显著差异。侵染初期(24 h)溶菌酶活性也显著升高,随后出现下降,并于48 h显著低于对照,但在化蛹时(96 h)再次上升。绿僵菌侵染后期,黏虫的抗菌活性下降,于侵染后72 h抗菌活性显著低于对照,而侵染初期抗菌活性与对照无显著差异。另外,绿僵菌侵染对幼虫血细胞数量以及浆血胞比率也有显著的影响,表现为:侵染后6 h和24 h血细胞总数、浆血胞比率均显著高于对照,随后与对照并无显著差异。综上,绿僵菌侵染黏虫幼虫初期会显著诱导其免疫反应的启动,体现在主要免疫指标升高,而后随着免疫系统的破坏与能量的消耗,其免疫反应能力降低,生理活动受到干扰。     

绿僵菌对金龟子的感病性试验

在室内用绿僵菌液喷洒３种金龟子幼虫，黄闪丽金龟、棕色鳃金龟和直蜉金龟子的感病率分别为９０．２％、５０．０％和８３．３％。用黄闪丽金龟子幼虫作试验，在室内观察不同施用菌剂的方法对该虫的防效，结果土壤中施用菌剂，在菌土比为１：１２５０时，防效为８６．２％；用菌剂拌麦种（菌剂麦种比为１：１０）防效为６２．５％；在小麦出苗后分３次施用菌液，防治效果为６４．８％。     

金龟子绿僵菌对几种林木害虫的致病性及防治应用试验

金龟子绿僵菌Ma83菌株对27种供试昆虫中的19种显示致病性。该菌株毒力很强,尤其对隐蔽性的蛀于害虫作用显著。利用Ma83菌株的菌液防治青杨天牛、云斑天牛、枇杷天牛、黑肿角天牛、柑桔吉丁虫、茶毛虫、吹绵蚧等7种昆虫,死亡率分别为94.12％、77.43％、78.26％、81.17％、92.72％、59.65％、20.32％。     

绿僵菌对小菜蛾的感染反应分析

用绿僵菌孢子悬浮液中浸渍过的甘蓝叶喂饲小菜蛾的方法,测定小菜蛾对FI1248菌株的感染反应。运用时间-剂量-死亡率模型,对死亡率随时间和剂量的变化作了拟合。接种后第9天的LC     

油类和糖类对绿僵菌孢子萌发的影响

在２３－２４℃及保湿条件下培养２４小时，绿僵菌分生孢子在７种植物油油滴上的萌发率在９６％以上。在４种矿物油中，石蜡油、煤油、柴油萌发率达８６％－９９％，但在润滑油中不能发芽。对１５种碳源上观察结果，赤癣糖、麦芽糖、Ｄ－甘露糖、葡萄糖有促进孢子萌发的作用。     

生长调节剂对球孢白僵菌产孢和分生孢子性能的影响

球孢白僵菌在农林害虫生物防治中发挥着重要的作用,发酵周期和产孢量是其发酵工艺中的主要评价指标。本试验研究了生长调节剂对球孢白僵菌JG-17菌株产孢的促进作用。结果表明,通过外源法在菌落表层施用微量乙烯利,可以明显提高菌株JG-17的产孢量,以对8日菌龄表层施用100 ng/cm²乙烯利处理最佳,产孢量为未处理对照的6.28倍。经乙烯利处理后形成的分生孢子,其耐热性、抗紫外线能力和对靶标害虫的杀虫活性与未处理对照没有显著性差异。在白僵菌培养过程中科学施用乙烯利,可有效提高白僵菌的产孢效率,研究为真菌生物农药工业化生产的效率提升提供了新的思路。     

胶孢炭疽菌株QZ-97a分生孢子货架期及对温度的耐受力

将不同含水量的胶孢炭疽菌婆婆纳专化型菌株QZ 97a分生孢子粉置于4℃和室温下,密闭或开放贮存。结果表明,4℃下密闭贮藏6个月,分生孢子萌发率和芽管长度无明显降低,室温贮藏降低也不明显。贮藏10个月后,各种贮藏方式孢子的活力都显著下降。但以4℃、含水量4%、密闭贮藏孢子活力较为稳定,420d孢子萌发率为70 4%,芽管长度为贮藏60d时的43 2%。含水量9 6%、开放室温下贮藏的孢子粉活力下降最大。因此,温度和孢子粉含水量是影响孢子货架期的两个主要因素。分生孢子粉对温度有一定的耐受性,随温度增高,敏感性增强,60℃下分生孢子的活力下降显著,处理6min,孢子芽管长度较对照下降50%。     

我国部分地区土壤中绿僵菌的物种多样性

绿僵菌是一种广泛存在且具有较高经济、生态价值的极具发展前景的绿色安全生物防治材料。为了更好地了解我国绿僵菌资源的生物多样性,本研究从13个省份不同生境中采集土壤样品,采用选择培养的方法对绿僵菌菌株进行分离纯化,通过形态学、分子生物学获取其ITS1和ITS4序列等方法鉴定菌株。在用MEGA软件依据邻接法（NJ）构建基于绿僵菌菌株ITS1和ITS4序列的系统发育树并进行同源性分析的基础上,采用香农-威纳指数、优势度指数和均匀度指数评价其多样性。结果表明,在607份土壤样品中,分离出绿僵菌属真菌共计222株,其中优势菌种金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae 130株,优势度指数为0.586;另有马昆德绿僵菌Metarhizium marquandii 83株、黄绿绿僵菌Metarhizium flavoviride 7株、罗伯茨绿僵菌Metarhizium robertsii 2株。林地的香农-威纳指数最高,为0.983,说明其物种丰富度最高。林地的均匀度指数最高,为0.709,说明其不同种间分配最均匀。     

绿僵菌防治椰心叶甲的毒力菌株筛选

在室内用绿僵菌的分生孢子悬浮液喷洒椰心叶甲成虫和幼虫，检测了不同来源的21株绿僵菌菌株对椰心叶甲的致病力。初步试验结果表明，A类菌株中的MA2、MA4和MA9，B类菌株中的MB2、MIM、MB5、MB6和MB7等对椰心叶甲的成虫和幼虫均具有较理想的效果，处理5天后成虫和幼虫的平均僵死率可达95％以上。但由于A类菌株比B类菌株产孢快、孢子量多，所以对A类菌株的MA2、MA4和MA9菌株再做进一步的室内毒力试验。最终结果表明，MA4菌株对椰心叶甲的毒力相对是最高的，具有较大的开发利用价值。     

球孢白僵菌剂量对西花蓟马偏好温度的影响

球孢白僵菌是一种对西花蓟马具高致病力的重要生防真菌。球孢白僵菌感染改变了西花蓟马的偏好温度。探讨这一现象对于提高球孢白僵菌对西花蓟马的防治效果具有重要意义。本研究分析了西花蓟马偏好温度随球孢白僵菌剂量和感染时间的变化趋势。结果表明,在各观察时间点（24～120 h,48 h除外）,感染高剂量球孢白僵菌的西花蓟马偏好温度显著低于被低剂量真菌侵染的个体。与健康西花蓟马的偏好温度（24℃±0.5℃）相比,无论是高剂量还是低剂量真菌,染菌蓟马偏好温度均随时间推移呈先下降后上升的趋势。染菌0～48 h时,蓟马的偏好温度逐渐下降。染菌后48～120 h,偏好温度回升。感染高剂量球孢白僵菌的蓟马体内真菌基因拷贝数大于被低剂量真菌感染的个体,随染菌时间的推移,差异进一步加大。本研究将为建立西花蓟马的高效防控体系提供理论支持。     

不同温度下球孢白僵菌对桃蚜的毒力

室内测定了２８、２１、１６和１１℃下球孢白僵菌对桃蚜成蚜的毒力运用时间＝剂量－死亡率模型分析了各温度折合和对桃蚜的毒力。结果表明,２８和２１℃下,桃蚜开始死亡的时间较早,而且很快达到较高死亡率。包子／ｍｌ浓度下,桃蚜接菌后３～４天开始死亡,第６天死亡率达１００％。在２１℃下,白僵菌对桃蚜的致死力比２８℃下更强。用同样浓度处理,在１６和１１℃下,桃蚜分别在接菌后么２天和第１１天开始死亡,第１０天和第     

绿僵菌侵染椰心叶甲的部位及侵染过程的电镜观察

利用扫描电子显微镜对绿僵菌侵染椰心叶甲的部位及侵染过程进行研究,从超微结构对绿僵菌侵染椰心叶甲体壁进行分析,结果发现,绿僵菌侵染椰心叶甲的主要部位是腹部节间膜,侵染过程可以分为分生孢子附着、出现分枝、长出芽管、大量聚合和入侵体内,最终绿僵菌分生孢子附着在节间膜上进入椰心叶甲体内.     

虫生真菌BB-T02分离鉴定及其对两种蓟马的致病力

榕管蓟马和香蕉花蓟马分别归属于管蓟马科和蓟马科,目前这2种蓟马对寄主为害重且相应的生防菌资源较少。为丰富这2种蓟马的生防菌资源,本研究尝试从受虫生真菌感染死亡的昆虫上分离生防菌株,确定其分类地位,测定其对这2种蓟马的致病力。结果表明,从自然罹病死亡的马尾松毛虫幼虫上分离到1株编号为BB-T02的虫生真菌,经形态观察和分子鉴定确认为球孢白僵菌。针对榕管蓟马和香蕉花蓟马的2龄若虫,菌株BB-T02侵染7 d后的LC₅₀分别为1.89×10⁵孢子/mL和9.90×10⁴孢子/mL,1.00×10⁸孢子/mL处理的累计校正死亡率分别为94.12%和98.81%、LT₅₀分别为3.48 d和3.14 d;针对它们的成虫,侵染8 d后的LC₅₀分别为4.45×10⁵孢子/mL和2.13×10⁵孢子/mL,1.00×10⁸孢子/mL处理的累计校正死亡率分别为87.21%和95.29%、LT₅₀分别为4.20 d和3.69 d。综上,球孢白僵菌BB-T02对这2种蓟马致病力强,生防潜力和应用前景良好。     

不同菌株绿僵菌和白僵菌对刚竹毒蛾幼虫致病力及林间防治试验

刚竹毒蛾(Pantana phyllostachysae Chao)是福建省毛竹林的一种主要害虫,本研究应用5种金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)菌株和1种白僵菌(Beauveria bassiana)菌株,对3龄初幼虫进行感染力测定,旨在筛选出感染该虫的高致病力菌株。结果表明:应用1.45×10 7孢子/mL孢悬液感染12 d后,3龄初幼虫的校正死亡率均达到63.16%以上;其中MaFzzL-01和Ma1291-2两个绿僵菌株对该幼虫的致病力分别为90.93%和84.21%,其LT50值分别为5.97 d和6.67 d,LC50值分别为1.727×10 4孢子/mL和2.029×10 4孢子/mL。结果说明:绿僵菌MaFzzL-01和Ma1291-2两个菌株对该幼虫的致病力强,且致死速度快。应用1.45×10 8孢子/mL孢悬液进行林间防治可以取得良好效果。