草地早熟禾成熟胚离体培养植株再生技术的研究

以大青山草地早熟禾和超级伊克利早熟禾的成熟种子为外植体材料,研究激动素和生长素及其不同配比组成的激素组合对愈伤组织诱导发生与生长状态及其绿苗分化能力的影响。结果表明,在愈伤组织诱导培养基中附加2.0mg/L2,4-D和0.2mg/LBA,诱导频率在30%-43%之间。在其继代培养基中添加1.0mg/L2,4-D和0.5mg/LBA,愈伤组织增殖速度快,且保持胚胎发生能力。在愈伤组织分化培养基中附加2.0mg/LBA或CPPU,经继代培养3代的愈伤组织的绿苗分化率保持在30%左右。在继代培养中,早代选择外表呈干燥、紧密、颗粒状愈伤组织是克服随着继代培养时间的延长愈伤组织再生植株的能力显著下降这一障碍的简易有效方法。     

苜蓿雄性不育系花药愈伤形成及分化培养条件的研究

以苜蓿雄性不育株系及其可育株系的花药为外植体,研究取材时间和不同激素配比对其愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明,雄性不育株系花药培养时,以现蕾初期取材、MS为基本培养基的条件下出愈率较理想。愈伤组织诱导的适宜培养基为:MS+0.5mg/L 2,4-D+0.25mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+3mg/L KT+3%蔗糖+0.7%琼脂(出愈率66.7%);不育与可育植株花药愈伤适宜的分化培养基分别为:MS+1mg/L KT+0.2mg/L NAA+2%蔗糖+0.7%琼脂(分化率75%)和MS+4mg/L KT+0.2mg/L NAA+2%蔗糖+0.7%琼脂(分化率79%)。     

紫花苜蓿花药愈伤组织和幼苗诱导技术的研究

在不同时期、不同花药低温预处理时间及热激处理、不同培养基、不同激素浓度组合、不同培养条件下对苜蓿花药进行了培养,结果表明:9月份较7月、8月份选取的花药愈伤组织诱导率高;花药低温预处理24~48h较72h处理对愈伤组织诱导的效果好,低温预处理与热激处理相结合比单用低温预处理其花药愈伤组织诱导率高;NB培养基对愈伤组织的诱导效果比B5培养基好,2,4-D浓度0.5~2.0mg/L、NAA浓度0.1~1.0mg/L、6-BA浓度0.5~1.0mg/L、KT浓度1.0~3.0mg/L都能诱导出愈伤组织,其最佳的浓度组合为NB 2,4-D 0.5mg/L NAA 0.2mg/L 6-BA 0.5mg/L KT 3mg/L;暗培养结合光照培养较直接光照培养愈伤组织诱导率低,但绿苗率较高。     

紫花苜蓿花药愈伤组织和幼苗诱导技术的研究

在不同时期、不同花药低温预处理时间及热激处理、不同培养基、不同激素浓度组合、不同培养条件下对苜蓿花药进行了培养,结果表明：9月份较7月、8月份选取的花药愈伤组织诱导率高;花药低温预处理24～48h较72h处理对愈伤组织诱导的效果好,低温预处理与热激处理相结合比单用低温预处理其花药愈伤组织诱导率高;NB培养基对愈伤组织的诱导效果比B5培养基好,2,4-D浓度0.5～2.0mg/L、NAA浓度0.1～1.0mg/L、6-BA浓度0.5～1.0mg/L、KT浓度1.0～3.0mg/L都能诱导出愈伤组织,其最佳的浓度组合为NB＋2,4-D 0.5mg/L＋NAA 0.2mg/L＋ 6-BA 0.5 mg/L＋KT 3mg/L;暗培养结合光照培养较直接光照培养愈伤组织诱导率低,但绿苗率较高.     

黑麦冬牧70幼穗和未成熟胚愈伤组织诱导及植株再生

将黑麦冬牧70幼穗切段和未成熟胚接种在附加不同激素浓度的改良MS培养基上培养,获得了能多次继代培养的愈伤组织,后者在分化培养基上再生植株.2,4-D和6-BA浓度明显影响愈伤组织质量和诱导率,幼嫩幼穗和较小的未成熟胚愈伤组织诱导率高.幼穗切段在改良MS 1.0 mg/L 2,4-D 200 mg/L谷氨酰胺的培养基上愈伤组织诱导率最高,质量较好;未成熟胚在改良MS 2.0 mg/L 2,4-D 0.1 mg/L 6-BA 200 mg/L谷氨酰胺的培养基上愈伤组织诱导率最高,质量最好.继代培养后的愈伤组织转移到附加200 mg/L谷氨酰胺、1.0 mg/L 2,4-D和0.1 mg/L TDZ的培养基上可分化出大量小芽.该体系可用于黑麦冬牧70遗传转化和细胞工程育种研究.     

多年生黑麦草愈伤组织诱导与芽分化的研究

对多年生黑麦草Lolium perenne的2个品种特拉华(Delaware)与尤文图斯(Juventus)进行了愈伤组织诱导以及芽分化的研究.结果表明,在种子和成熟胚2种外植体中,成熟胚的出愈率高,是较好的愈伤诱导材料.愈伤诱导培养基采用MS基本培养基,附加激素4 mg/L 2,4-D 0.025 mg/L 6-BA.特拉华和尤文图斯较适宜的芽分化培养基是MS基本培养基分别附加0.4 mg/L ZT 0.3 mg/L NAA和0.2 mg/L ZT 0.5 mg/L NAA.特拉华在愈伤诱导和芽分化两方面均优于尤文图斯.     

白羊草成熟胚组织培养及植株再生体系的建立

以白羊草(Bothriochloa ischaemum(L.)Keng)成熟胚为外植体,研究不同激素及其不同配比对愈伤组织诱导发生与生长状态及其绿苗分化能力的影响。从而建立了白羊草植株再生体系,为开展生物技术育种提供参考。结果表明:在愈伤组织诱导培养基中添加2.0 mg/L 2,4-D诱导频率为86.7%,MSB和MS培养基对愈伤组织诱导效果相近;在其继代培养基中添加1.0 mg/L 2,4-D愈伤组织增殖快,且保持胚胎发生能力;适宜的分化培养基为6-BA 0.1 mg/L+NAA 0.05 mg/L,分化率达61.3%;愈伤组织在不添加任何生长调节剂的培养基上即可生根。     

苜蓿花药培养及倍性鉴定

在不同低温预处理时间,不同培养基和不同激素组合下进行了苜蓿花药培养实验。结果表明,花药4℃低温预处理24h、48h较72h诱导效果好。NB培养基对愈伤组织的诱导效果比战培养基好。最佳愈伤组织诱导培养基组合为NB＋2,4-D0．5mg／L＋NAA0．3mg／L＋6-BA0．5mg／L＋KT3．0mg／L。通过不同蔗糖浓度对愈伤组织的诱导效果比较,表明低浓度的蔗糖有利于降低愈伤组织的褐化率,高浓度的蔗糖有利于单倍体愈伤组织的诱导。分化培养的最佳组合为MS＋NAA0．2mg／L＋6-BA3．0mg／L。诱导生根最好的培养基为1／2MS培养基,最适合蔗糖浓度为10g／L。     

日本结缕草植株再生体系的研究

以日本结缕草的成熟胚为外植体,对其组织培养体系进行了优化.试验结果表明,1)培养基中添加脯氨酸能提高愈伤组织诱导率,而添加BA能降低愈伤组织的诱导率,低浓度的NAA(0.1～0.2 mg/L)能促进愈伤组织的形成,愈伤组织诱导的最佳培养基为ND 2,4-D 3.0 mg/L NAA 0.2 mg/L L-Pro 500 mg/L,愈伤组织诱导率达57.3%;2)愈伤组织继代的最佳培养基为MSD 2,4-D 1.0 mg/L;3)愈伤组织分化的最佳培养基为MSD NAA 0.3 mg/L KT 0.5 mg/L BA 0.05 mg/L,分化率达36.7%.     

不同苜蓿品种再生体系的差异性比较

以陇东野生紫花苜蓿、阿尔冈金、甘农1号、游客4个苜蓿品种的下胚轴为外植体,比较不同苜蓿品种外植体愈伤组织诱导、分化及再生能力的差异,研究不同激素浓度及配比对再生体系建立的影响。结果表明,4个苜蓿品种下胚轴诱导率依次为阿尔冈金甘农1号陇东野生紫花苜蓿游客;在愈伤组织诱导培养基MS+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L NAA上诱导率最高;MS+0.5 mg/L KT+0.3 mg/L NAA为最佳分化培养基,分化率在84.5%~93.5%;适宜的生根培养基为1/2 MS+0.1 mg/L NAA,附加1%蔗糖,各品种再生植株的移栽成活率为100%。     

2,4-D和BAP对蒙古冰草幼胚愈伤组织诱导及生长的影响

以蒙古冰草为材料。在离体培养条件下对其幼胚的发育进行了研究。结果表明：蒙古冰草的幼胚在不含任何激素的培养基上能直接萌发，幼胚发芽率因培养基而异。N6＋7％蔗糖培养基萌发率最高，达96％；其次为MS＋5％蔗糖培养基。萌发率为90％。当幼胚被培养在减半的N6培养基或减半的MS培养基上时，发芽率均显著降低。以上四种培养基均未发生脱分化现象。相反，在含有2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D）的培养基上，蒙古冰草幼胚不同程度地发生了脱分化，并出现了少量再生芽。在继代培养基中，降低2，4D浓度，附加低浓度6-苄氨基嘌呤（BAP）可以改善蒙古冰草幼胚愈伤组织状态，增加胚性愈伤组织诱导率。从而提高分化率。     

象草幼穗离体培养植株再生研究

以象草幼穗为外植体材料、改良的MS为基本培养基,研究了不同外源激素组合对不同发育时期幼穗愈伤组织诱导和植株再生能力的影响.结果表明,象草幼穗离体培养最适长度为2～5 cm;愈伤组织诱导培养基中添加4.0 mg/L 2,4-D 0.05 mg/L KT和4.0 mg/L 2,4-D 0.10 mg/L KT时,颗粒状愈伤组织诱导率分别为79.0%和72.6%;转入添加3.0 mg/L 2,4-D 0.2 mg/L 6-BA的继代培养基,分别有40.9%和74.0%的愈伤组织保持颗粒状结构;在添加2.0 mg/L CPPU 0.01 mg/L NAA和0.50 mg/L KT 0.5 mg/L IAA的分化培养基上,经过继代培养后的颗粒状愈伤组织的成苗率分别为36.4%和38.5%,总成苗率达50.2%和43.9%.3片叶大小的幼苗转入附加NAA 0.50 mg/L的1/2 MS壮根培养基,试管苗移栽成活率达95%以上.在继代培养过程中逐代选择外表呈白色、干燥、紧密、颗粒状的愈伤组织,是提高其植株再生能力的有效方法.     

复序橐吾组培再生体系研究

用复序橐吾(Ligularia jaluensis Kom.)种子获得无菌苗,取其叶片为外植体,以MS培养基为基础,通过添加不同浓度和种类的细胞分裂素及生长素,目的是筛选出叶片组织培养的最适培养基。结果表明:种子较好的灭菌时间为75%酒精30 s+1‰升汞4min;初代培养基为MS+6-BA0.5mg/L+2,4-D1.0mg/L,由此获得的愈伤组织致密、颜色绿,具有很好的诱导效果,其诱导率达到90%;继代增殖的最适培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L,其增殖倍数高达3.9,并且苗生长状况良好;生根最适培养基为:1/2MS+NAA 0.5mg/L,生根率达100%。     

黄花苜蓿花药培养再生体系的建立与单倍体鉴定

花药组织培养再生体系的构建是单倍体育种的重要途径之一。本研究对呼伦贝尔黄花苜蓿(Medicago falcate‘Hulunbeier’)进行了花药组织培养研究并建立了花药组培再生体系。结果显示,液体悬浮培养基比固体培养基更适合呼伦贝尔黄花苜蓿花药愈伤组织的培养,其愈伤形成的培养条件为B5培养基+0.5 mg·L~(-1) 2,4-D+0.25 mg·L~(-1) 6-BA+0.4mg·L~(-1) NAA+3.0mg·L~(-1) KT;分化培养基为MS+1.0mg·L~(-1) 2,4-D+0.5mg·L~(-1) 6-BA+2%蔗糖+0.7%琼脂;生根培养基为1/2MS+0.1mg·L~(-1) NAA+2%蔗糖+0.7%琼脂;获得的再生植株经流式细胞仪鉴定,其单倍体比例高达27%。     

早开堇菜组织培养及植株再生体系的建立

以野生早开堇菜为材料,研究了不同外植体类型(子叶节、叶片、叶柄)和不同激素配比对其不定芽诱导、愈伤组织诱导和分化的影响,成功建立了早开堇菜组织培养植株再生体系。结果表明,1) 诱导子叶节和叶柄不定芽诱导的最适培养基为 MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,叶片不适合作为直接诱导不定芽的外植体。2) 3种外植体均能诱导愈伤组织,子叶节愈伤组织诱导的时间最短,其次为叶柄,叶片最晚。子叶节和叶柄愈伤组织诱导的最适培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D,诱导率分别为98.3%和96.7%;叶片愈伤组织诱导的最适培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D+0.05 mg/L NAA,诱导率可达88.3%。3) 最适愈伤组织分化培养基为:MS+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,分化率为100%。4)不定芽增殖的最佳培养基为:MS+1.5 mg/L 6-BA+0.075 mg/L NAA,增殖率为4.68。 5)再生苗移植到添加1.0 mg/L 6-BA的1/2 MS培养基上,生根率92.3%。6)组培苗移栽到珍珠岩∶河沙∶腐殖质(1∶2∶2)的混合基质时,100%成活,且植株长势好。     

播娘蒿幼蕾和花序轴的组织培养和再生植株研究

播娘蒿幼小花蕾在附加有１５ｍｇ／ＬＮＡＡ、０５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ和０１ｍｇ／ＬＫＴ的ＭＳ培养基中，培养两周即形成０５ｃｍ２大小的愈伤组织块，出愈率达８３％。继续培养两周转至附加有２ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ、０５ｍｇ／ＬＫＴ和０２ｍｇ／ＬＮＡＡ的ＭＳ分化培养基上，２～３周后出现绿色芽点，继续培养２周即可得到分化小芽。播娘蒿花序轴在附加有２～６ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ、０５ｍｇ／ＬＮＡＡ的ＭＳ培养基中，培养５～６周也都能分化出芽，但最佳培养基为４ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ、０５ｍｇ／ＬＮＡＡ。分化小芽转至附加０５ｍｇ／ＬＮＡＡ或０５ｍｇ／ＬＩＢＡ的１／２ＭＳ生根培养基上培养２～３周均能形成完整植株。