长白落叶松胚性愈伤组织诱导及体细胞胚胎发生

【目的】以长白落叶松的未成熟合子胚为外植体,进行胚性愈伤组织的诱导、增殖培养及体细胞胚胎发生的相关研究,揭示影响长白落叶松胚性愈伤组织诱导的关键因素,并探讨继代培养过程中添加不同种类、浓度的生长调节剂对胚性愈伤组织增殖及体胚发生的影响。【方法】采集长白落叶松3个家系优良单株的种子,诱导胚性愈伤组织,比较外植体采集时间、家系、2,4-D浓度及基本培养基对胚性愈伤组织诱导的影响。诱导出的胚性愈伤组织继代于含不同种类、浓度生长调节剂的增殖培养基,通过体胚发生途径获得体细胞胚。选取发育正常的体胚进行萌发,待体胚生根后移栽。【结果】不同时间采集的未成熟合子胚,其胚性愈伤组织诱导率存在较大差别,授粉后63天的合子胚诱导率为5.61%,授粉后70天诱导率为22.35%,而授粉后80天未诱导出胚性愈伤组织;‘长77-22’、‘长77-37’和‘长73-50’3个家系胚性愈伤组织的平均诱导率分别为6.69%,11.17%和3.11%;2,4-D浓度对长白落叶松胚性愈伤组织诱导具有一定影响,在一定范围内胚性愈伤组织的诱导率会随2,4-D浓度升高而升高,当其浓度为1.5 mg·L~(-1)时胚性愈伤组织的诱导率最高,达到11.11%,而当2,4-D浓度超过1.5 mg·L~(-1)时,胚性愈伤组织的诱导率则开始下降;BM,MS,S培养基均能诱导出胚性愈伤组织,其中,BM培养基的诱导率最高,S培养基的诱导率次之,MS培养基的诱导率最低。胚性愈伤组织在含2,4-D 0.3 mg·L~(-1)、6-BA0.1 mg·L~(-1)及KT 0.1 mg·L~(-1)的BM培养基上增殖15天可获得相对较多的胚性愈伤组织,增殖率为345.93%;在含2,4-D 1.5 mg·L~(-1)、6-BA 0.5 mg·L~(-1)及KT 0.5 mg·L~(-1)的BM培养基上培养14天,再经诱导可获得较多的体细胞胚胎,每克愈伤组织平均诱导179.87个体胚,并且这些体胚的萌发率及植株再生率相对较高,分别为75.00%,66.67%;再生植株移栽成活率为27.08%。【结论】不同长白落叶松家系的胚性愈伤组织诱导率不同,散粉后70天的合子胚适合诱导胚性愈伤组织,基本培养基为BM,添加2,4-D 1.5 mg·L~(-1)。胚性愈伤组织长期继代在含高浓度生长调节剂的培养基上易丧失胚性,且增殖速度慢,但体胚的发生量及萌发率相对较高;适当降低生长调节剂浓度利于愈伤组织保持胚性及增殖,但体胚的发生量及体胚的萌发率有所下降;当培养基中生长调节剂浓度较低时,不利于愈伤组织的增殖,但仍能使其胚性长期保持;采用浓度为0.5 mg·L~(-1)的NAA代替0.15 mg·L~(-1)的2,4-D有助于胚性愈伤组织的增殖,并能在一定程度上提高体胚的萌发率。因此,可根据不同阶段的培养目的,选择添加不同种类和浓度生长调节剂的增殖培养基进行继代。     

水曲柳不同外植体胚性愈伤组织诱导及植株再生

本研究以水曲柳不同外植体(无菌苗叶片和下胚轴、未成熟合子胚、成熟和未成熟合子胚子叶)为材料，在胚性愈伤组织诱导、胚性愈伤组织增殖、体胚形成、体胚萌发生根培养基上诱导分化。结果表明，附加了5.0 mg·L^-1 NAA和2.0 mg·L^-1 6-BA的激素配比的MS培养基，为诱导水曲柳胚性愈伤组织最适培养基；在5种不同的外植体中，成熟和未成熟合子胚子叶更适合作为诱导胚性愈伤组织的外植体；在诱导胚性愈伤组织中，成熟合子胚子叶诱导率为11.7%,未成熟合子胚子叶诱导率为9.7%;胚性愈伤组织在继代培养过程中，WPM为最佳基础培养基，附加0.1 mg·L^-1 6-BA和0.15 mg·L^-1 2,4-D的激素配比，胚性愈伤组织的增殖系数可达到1.54。在体胚成熟过程中，MS培养基内添加1.0 mg·L^-1 ABA时，体胚的诱导率最高，达到55%。在生根萌发的WPM基础培养基中附加1.0 mg·L^-1 IBA和1.0 mg·L^-1 IAA的激素配...     

丝棉木松散型胚性愈伤组织的诱导与增殖

通过建立丝棉木松散型胚性愈伤组织培养体系,为丝棉木组培快繁、体细胞离体诱变育种及遗传转化等研究奠定基础。本试验以丝棉木幼嫩茎段为外植体,研究植物生长调节剂不同种类和浓度对丝棉木松散型胚性愈伤组织诱导与增殖的影响。结果显示,丝棉木茎段在MS+1.0 mg/L 2,4-D培养基上可诱导出松散型愈伤组织,愈伤组织诱导率达100%;将松散型愈伤组织转接到MS+0.5 mg/L BA+0.5 mg/L 2,4-D的培养基上可获得胚性愈伤组织;将胚性愈伤组织转接到MS+0.25 mg/L BA+0.5 mg/L 2,4-D的培养基上,每15 d继代培养一次,继代时选择结构松散、质地硬脆的愈伤组织,继代培养2～3次后可获得均质的丝棉木松散型胚性愈伤组织。本研究表明,丝棉木茎段理想的松散型愈伤组织诱导培养基为MS+1.0 mg/L 2,4-D;最适松散型愈伤组织诱导培养基为MS+0.5 mg/L BA+0.5 mg/L 2,4-D;最适胚性愈伤组织增殖培养基为MS+0.25 mg/L BA+0.5 mg/L 2,4-D。     

地锦体细胞胚胎发生研究

以地锦幼胚为外植体,接种在附加6 BA2mg·L-1及2,4 D0～4mg·L-1的改良B5培养基中诱导愈伤组织,愈伤诱发率0～100% 对诱导出的愈伤组织采用6 BA和2,4 D不同浓度组合的培养基进行继代,对能稳定继代的愈伤组织,以改良B5为基本培养基进行分化培养,采用L16(44)正交设计,研究6 BA、NAA、AC及LH四因素不同浓度组合对体细胞胚胎发生的影响。结果表明:适宜地锦幼胚体细胞胚胎发生的培养基为:愈伤组织诱导:改良B5 6 BA2 0mg·L-1 2,4 D2 0mg·L-1;愈伤组织继代:改良B5 6 BA2 0mg·L-1 2,4 D1 0mg·L-1;胚状体分化及萌发:改良B5基本培养基。胚状体诱发率33%,成苗率53%,移栽成活率85%。胚状体为外起源发生方式,经球形胚、心形胚、鱼雷形胚、子叶形胚等阶段发育成熟。     

橡胶树胚珠离体培养与体胚植株再生的研究

对8个品种橡胶树未授精胚珠离体培养试验结果,8个品种都诱导出愈伤组织,其中6个品种诱导出胚状体,3个品种获得体胚植株。试验结果表明:不同品种橡胶树未授精胚珠在诱导愈伤组织、继代增殖、胚分化和植株再生培养存在很大差异,热研8-79、云研73-46愈伤组织的诱导率高,但未能分化出胚状体;云研73-477、RRII105等品种,愈伤组织的诱导率低,但继代增殖培养时能诱导出新鲜的胚性愈伤组织,获得体胚植株;云研77-2、云研77-4诱导出的是畸形胚,未获体胚植株,但其胚状体诱导率比用花药诱导的高,有希望通过进一步研究,优化培养方法、培养条件,最终构建出这两个抗寒高产优良品种的体胚植株再生体系。     

香樟未成熟合子胚体胚发生及植株再生研究

以香樟的未成熟幼胚为外植体进行诱导体胚发生影响因素的研究.成功地从香樟幼胚中诱导出胚状体并获得再生植株,MS为基本培养基,蔗糖是最佳的碳源.经2年对初生胚的继代培养,获得胚性愈伤组织;胚性愈伤组织经体胚诱导、体胚成熟、体胚萌发3个过程的诱导后能够获得再生植株.     

银杏成熟胚培养的细胞组织学观察

由银杏成熟胚诱导的淡绿色,疏松愈伤组织经过继代培养后在部分疏松愈伤组织上又形成致密愈伤组织,并在ＭＳ＋ＢＡ ２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．５ｍｇ／Ｌ的培养基上从致密愈伤组织中诱导胚状体发生并达到心形胚阶段。细胞组织学的观察表明,胚状体起源于愈伤组织表面的胚性细胞。     

蒙古栎体细胞胚胎发生技术研究

为建立蒙古栎体细胞胚胎发生体系,以蒙古栎未成熟合子胚为外植体,通过不同种源、外植体的取材时间、诱导培养基配比、培养条件等筛选得到胚性愈伤组织,进而进行体胚增殖。结果表明:7月上旬是最佳的取材时期(合子胚大小约10 mm),蒙古栎合子胚在培养基MS+2,4-D1 mg·L~(-1)+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+水解酪蛋白0.5 g·L~(-1)中胚性愈伤组织诱导率可达85.7%,光照条件对胚性愈伤组织的诱导率影响不显著。不同种源对胚性愈伤组织的诱导率有显著影响。在培养基MS+NAA 0.5 mg·L~(-1)+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+水解酪蛋白0.5 g·L~(-1)中体胚增殖率最大72.3%,且培养4周时胚性愈伤组织状态最佳。     

油茶离体培养诱导再生植株的研究

采用普通油茶Camelliaoleifera优良无性系湘林4号为实验材料,研究了离体条件下带芽的茎段、幼胚、子叶的愈伤组织的形成和植株再生技术。茎段离体培养以MS为基本培养基,附加6-BA3.0mg·L-1+NAA1.0mg·L-1对芽进行诱导,诱导率达到83.33%;继续在此培养基上继代得到丛生芽,增殖比例为1∶20。对于幼胚和子叶,附加2,4-D2.0mg·L-1+KT1.0mg·L-1诱导愈伤组织得到很好的效果,将愈伤组织转到附加6-BA3.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1和6-BA2.5mg·L-1+IAA1.5mg·L-1的培养基上诱导出不定芽,诱导率达到90%以上。芽苗增殖以MS+6-BA2.5mg·L-1+IAA1.5mg·L-1的培养基为好。将无菌苗在MS培养基(附加NAA7mg·L-1)上诱导生根,生根率达93%。     

曼地亚红豆杉组织培养初探

以5 a生曼地亚红豆杉当年生枝条的带芽茎段为外植体,用MS作基本培养基,进行NAA和6-BA的单因素浓度梯度组织培养试验。结果表明:NAA对诱导愈伤组织有效,MS NAA1.5 mg.L-1培养基上,愈伤组织的诱导率最高,达61%,且愈伤组织生长良好,为浅绿色,疏松度适中。但愈伤组织经继代后没有出现器官分化。适当浓度6-BA能诱导芽的萌发。MS 6-BA0.5 mg.L-1培养基上芽的萌动率最高,达到56.2%,且最后有45.5%的萌动芽抽生出嫩叶。MS添加6-BA0.1、1.0、2.0 mg.L-1的几种培养基上芽的萌动率间没有显著差异。     

虎杖愈伤组织的诱导及其白藜芦醇形成初探

将虎杖P olygonum cusp id a tum不同外植体经不同消毒时间处理后,接种在添加不同激素种类和水平的相同基本培养基上或相同激素种类和水平基本培养基上进行诱导实验,同时对根和根茎芽、叶、韧皮诱导的愈伤组织进行白藜芦醇含量的测定.结果表明:基本培养基以M S较好,外植体叶对激素种类较为敏感,其中适当浓度的NAA诱导愈伤组织比2,4-D的效果好,KT比BA好,添加KT的培养基上诱导愈伤组织比较紧密,有利于分化,在M S+NAA 2 m g/L+KT 0.1 m g/L培养基上诱导愈伤组织较好,根茎芽的诱导率最高,为73%;愈伤组织的生长趋势从接种的第3天开始生长,到21 d时生长达到最高峰,干质量为0.461 2 g,以后生长速度减慢;对不同材料诱导的愈伤组织进行白藜芦醇含量的测定,其中根茎部芽的诱导的愈伤组织中白藜芦醇含量最高,其次是叶和根,最低的为韧皮.     

荻植株再生体系建立

以成熟种子为外植体建立了荻植株再生体系。荻成熟种子经20％“84”消毒液处理20min,接种于MS＋4％蔗糖（pH5．5）培养基中培养5d,萌发率为92％,褐化率为8％,污染率为0。萌发种子继代转入愈伤诱导培养基MS＋lmg／16-BA＋1mg／12,4-D＋0．5mg／lNAA＋4％蔗糖（pH5．5）,光照条件下愈伤组织诱导率为86％,黑暗条件下愈伤组织诱导率64％。荻愈伤组织在Ms＋1IYlg,L6-BA＋0．1mg／L2,4-D＋0．5mg／LNAA＋4％蔗糖（pH5．5）进行不定芽诱导,不定芽发生率为91％。无根丛生芽继代转入不定根诱导培养1／2MS＋0．25mg／LIBA＋0．25mg／LNAA＋4％蔗糖（pH5．5）,5天可见不定根形成,15天后不定根发生率为92％。研究还发现,荻种子萌发后可直接继代转入不定芽分化培养基形成健壮不定芽,不定芽诱导率为95％。     

二乔刺槐愈伤组织超低温保存及适宜降温方法

二乔刺槐叶片在添加5 mg·L-16-BA的MS培养基上诱导出愈伤组织.将愈伤组织在冻存液(MS+10%DMSO+0.5 mol·L-1蔗糖)中于4℃预冷2 h,置人程序降温仪以1℃·min-1的速率降温至-7℃停留1 h,再以0.1℃·min-1的冷却速率将样品冷却至-20℃,平衡1 h,接下来以0.3℃·min-1的冷却速率将样品冷却至-40℃投入液氮保存,是适宜的降温方法.液氮保存1天后以38℃温水浴解冻.解冻后将愈伤组织用液体培养基(MS+6-BA 5 mg·L-1+30 g·L-1蔗糖)洗涤后转入恢复培养基暗培养,14天后放于光照下培养.光培养3天后冻后愈伤组织上开始长出新生愈伤组织颗粒,成活率最高可达52%,新生愈伤组织可诱导成苗.     

Efficient embryogenic callus induction and plant regeneration from embryonic axis explants inQuercus acutissima

Embryogenic callus ofQuercus acutissima was successfully induced from embryogenic cultures, and plants were regenerated from the callus. The development of the techniques involved will allow mass propagation and gene transformation in this species. Embryogenic cultures were formed from embryonic axis explants (i.e., embryos without cotyledons) excised from immature embryos, after culture on Murashige and Skoog (MS) medium containing indolebutyric acid and benzyladenine. Attempts to induce embryogenic cultures from cotyledon explants were unsuccessful. Embryogenic calli were induced at high frequency from embryogenic cultures on MS medium containing 2,4-dichlorophenoxyacetic acid. However, benzyladenine inhibited embryogenic callus formation. Somatic embryo development from embryogenic calli occurred on MS medium in all of the seven cell lines tested. Germination of somatic embryos was induced on half strength MS medium without plant growth regulators. Finally, acclimated plants growing in soil were obtained.     

野葛愈伤组织诱导与不定芽分化

采用MS为基本培养基，附加NAA、6-BA和IAA3种激素．诱导野葛不同外植体愈伤组织形成；再将愈伤组织接种在不同浓度6-BA的MS培养基上．分别在光照和黑暗条件下进行不定芽的诱导。结果表明．野葛幼叶、茎段和顶芽在适宜激素的诱导下均能形成愈伤组织，但不同激素组合其愈伤组织诱导率不同。幼叶愈伤组织诱导的最适培养基为MS NAA1．0mg／L 6-BA1．0mg/L．其诱导率为75％．茎段愈伤组织诱导的最适培养基为MS NAA1．0mg／L 6-BA3．0mg／L IAA0．2mg/L，其诱导率为70％。不同外植体形成的愈伤组织其不定芽的分化诱导率不同．茎段愈伤组织在不同浓度6-BA下均能诱导出不定芽；光照有利于芽的分化．在光培养条件下，茎段愈伤组织不定芽平均诱导率为66．7％。     

胡桐愈伤组织诱导条件初报

为了通过植物细胞培养获取胡桐抗HIV的活性物质,首次报道胡桐愈伤组织的诱导条件。研究结果表明:胡桐幼苗的叶、茎段与胚根均可诱导出愈伤组织,其中以茎段的诱导率最高,达95.6%,而胚乳难以诱导愈伤组织。胡桐愈伤组织生长与培养基中无机盐含量有关,在B5、MS、White三种不同的基本培养基中,以B5最适于胡桐愈伤组织的诱导,MS次之,White最差。     

Somatic embryogenesis from cell suspension cultures of aspen clone

Suspension cultures initiated from callus derived from petiole explants of aspen hybrid (Populus tremuloides × P. tremula) produced somatic embryos. Callus was induced on a MS medium supplemented with 5 mg·L–1 2,4-D and 0.05 mg·L–1 zeatin under light conditions. Embryogenic calli were obtained when a subsequent subculture of calli was suspended in the same basal me-dium with 10 mg·L–1 2,4-D. The highest number of globular embryos were induced from embryogenic calli by cell suspension cul-ture in a MS liquid medium supplemented with 10 mg·L–1 2,4-D. Genotype and 2,4-D concentration were vital to the induction of embryogenic calli producing competent cells. Embryogenic calli for each genotype were heterogeneous. Green calli with gel-like consistency could yield more competent cells than light yellow embryogenic calli. However, some globular embryos broke into slices and some developed abnormally after one month of culture under the same or other hormonal conditions.     

彩色马蹄莲“柠檬”组织培养研究

以彩色马蹄莲品种“柠檬”的块茎为外植体,研究不同的消毒方法和激素水平对彩色马蹄莲离体繁殖的影响,并筛选适合彩色马蹄莲试管苗生长的培养基。结果表明,在初代试验中对彩色马蹄莲的块茎消毒以0.2%升汞处理15 min为宜;MS＋1.0-2.0 mg/L6-BA＋0.1-0.2 mg/L NAA为适宜的愈伤组织诱导培养基;在继代培养基MS＋0.5 mg/L6-BA＋0.1 mg/L NAA上,愈伤组织能够分化出状态良好的丛生芽并继续增殖;在培养基MS＋0.1mg/L IBA上,生根率达100%,试管苗生长健壮,根系良好。     

三倍体毛白杨愈伤组织诱导及腋芽增殖技术研究

以三 本毛白杨试管苗叶片作为外植体进行愈伤组织的诱导，最适的愈伤组织诱导培养基为MS＋NAA1.0mg/L 6-BA0.1mg/L；分化培养基为：1／2MS＋BA0.5mg/L。利用腋芽增殖试管苗，单芽增殖有效苗可达12株以上；生根培养基为MS＋IBA0.8-1.2mg/L，试管苗的生根率可达85.93%；炼苗成活率达到93.8%，田间移栽成活率为87.5%。     

黄色马蹄莲的组织培养研究

以黄色马蹄莲块茎为外植体组培试验结果:最适合的灭菌时间为0.1%的HgCl2消毒15min;在MS添加2.0mg·L-16-BA+0.1mg·L-1 NAA的培养基上可以很好的诱导产生愈伤组织,并且从愈伤产生丛生芽的数量也最多;在MS添加1.0mg·L-1 6-BA+0.2mg·L-1 NAA的培养基上经过初代培养的芽丛可以健壮生长同时继续增殖出新的愈伤组织;在不添加任何激素的MS培养基上马蹄莲生根率均可以达到90%以上,且试管苗根系良好,生长健壮。