洛阳地区牡丹根腐病病原菌的分离与鉴定

2016—2018年以洛阳地区不同牡丹种植地的根腐病株为试材,采用组织分离法进行根腐病病原菌的分离纯化,根据柯赫氏法则检测分离物的致病性,同时结合形态学特征和基因序列分析对具有致病性的分离物进行鉴定,以明确引起洛阳地区牡丹根腐病发病的主要病原菌种类。结果表明:从30份根腐病株中共分离获得15株病原分离物,离体致病性检测表明9株分离物具有显著致病性;根据形态学特征,初步鉴定9株致病分离物为镰刀菌属(Fusarium)真菌,rDNA-ITS序列和EF-1α基因序列分析表明其中7株致病分离物为茄病镰刀菌(Fusarium solani),2株致病分离物为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。因此,该研究结果初步表明茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌是引发洛阳地区牡丹根腐病的主要病原菌种类,2种病原菌复合侵染引起根腐病的发生,其中茄病镰刀菌为优势致病菌。     

广西珍珠李叶枯病病原鉴定

为了明确近年来广西壮族自治区天峨县发生严重的珍珠李叶枯病病原,采集天峨县珍珠李病叶,对病原进行分离和鉴定。本研究从病叶中分离到2种真菌,核糖体DNA内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列分析表明2种真菌分离物分别与GenBank中胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides和拟盘多毛孢菌Pestalotiopsis sp.具有99%的相似性。离体致病性测定结果表明,分离菌株均能使健康叶片产生症状,并通过柯赫法则(Koch’s postulates)验证。结合真菌分离物的分离比率,将广西天峨县珍珠李叶枯病病原初步鉴定为胶孢炭疽菌。     

鸡(土从)菌内生拟盘多毛孢菌的分离和培养及鉴定

目前鸡(土从)菌尚不能进行人工栽培,而与其内生生长的拟盘多毛孢菌也许是影响其栽培的因素之一.采用常规组织分离法,从鸡(土从)菌上分离出一株拟盘多毛孢菌,利用常规组织分离法,从鸡(土从)菌上分离出一株拟盘多毛孢菌,对其进行了培养特性分析及形态学鉴定,利用分子生物学方法对ITS区进行了克隆测序,利用分子生物学软件得到Pestalotiopsis属进化树,结合形态学特征,确定其为忽视拟盘多毛孢Pestalotiopsis neglecta.     

苹果霉心病病原研究

１９８９－１９９３年，在甘肃苹果产区采集红星或元帅品种病果和无症状果实，逐果取果心组织分离，获得３０余个真菌分离物，以链格抱（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａａｌｔｅｒｎａｔａ）出现率最高，占５１．３％；其次为粉红单端孢（Ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｉｕｍｒｏｓｅｕｍ）、棒盘孢（Ｃｏｒｙｍｅｕｍｓｐ．）、节孢状镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍａｒｔｈｒｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ）、狭截盘多毛孢（Ｔｒｕｎｃａｔｅｌｌａａｎｇｕｓｔａｔａ）等，依次占１１．８％、１２．０％、８．９％、７．９％。每个单果大多是只能分离出一种菌，少数出现２一３种菌。不同症状的果实，出现的真菌种类不同，霉心果以链格孢出现率最高，占６０％－８０％；心腐果中链格孢出现率显著较少，占１０％－３０％；而粉红单端孢、节孢状镰刀菌、棒盘孢、狭截盘多毛孢等５种菌的出现率较高，占７．８％－２５．５％。用果心不带菌的果实人工接种，对１２种分离物进行致病性测定看出，不同菌株之间致病力有明显差异，致心腐的病菌主要有５种，分别是粉红单端孢、棒盘孢、节孢状镰刀菌、狭截盘多毛孢和一种不产孢的浅色丝状菌。链格孢主要致霉心症状。混合接种试验表明，如有几种真菌进入果心，则致病性强的一种首先占据优势，?     

石棉县黄果柑果实病斑致病菌的分离鉴定

为明确近年四川省石棉县黄果柑果实田间普遍发生的果面病斑的致病菌,2016年12月在当地采病果为试验材料进行病菌分离,并对分离菌株进行形态学鉴定、分子鉴定及致病性测定。结果表明,分离共获得12株真菌,5株为胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides,5株为互隔交链格孢菌Alternaria alternata,2株为果生刺盘孢菌C. fructicola。分离获得的胶孢炭疽菌株和互隔交链格孢菌株均能侵染果实和叶片形成病斑且与田间病斑基本一致,两者是生产中石棉县黄果柑果面病斑的致病菌。     

草莓根腐病菌拮抗细菌的分离与鉴定

 采用平板对峙法,从分离自土壤的436株细菌菌株中筛选对草莓根腐病菌——尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）具有拮抗作用的细菌,得到了3株稳定性好,具有较高拮抗活性的菌株w-25、w-79和w-181。拮抗菌w-25对尖孢镰刀菌的抑菌带达到11.0 mm,w-79和w-181的抑菌带分别达到5.4和6.4 mm。此外,3株拮抗菌对草莓灰霉病菌（Botrytis cinerea）、草莓红中柱致病菌（Fragria ananassa）和草莓胶孢炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）等具有很强的拮抗作用。经过对3株菌株形态观察、理化分析和分子鉴定,认为w-25可能为荧光假单孢菌（Pseudomonas fluorescens）,w-181和w-79可能为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。研究表明3株拮抗菌对致病菌生长有较好的抑制作用,显微观察发现拮抗菌代谢产物会破坏致病菌菌丝形态,电镜观察发现致病菌细胞器溶解,细胞内液泡变大。     

西葫芦根腐病病原的鉴定

通过对所采集的西葫芦根腐病病株进行分离培养,共得到5种病原菌,分属于疫霉菌Phytophthora和镰刀菌Fusarium2个属。经致病性测定,确定引起西葫芦根腐病的主要致病菌为疫霉菌,镰刀菌对西葫芦根腐病的发生有加重作用。经鉴定该致病疫霉菌为烟草疫霉菌(Phytophthora nicotanae),主要致病镰刀菌为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。     

新疆加工辣椒根腐病病原鉴定

以制干辣椒根腐病病样为分离对象,采用形态学和分子生物学方法对致病菌进行鉴定。结果表明:共采集根腐病样211个,从中分离获得161个分离物,其中镰刀菌Fusarium spp.121个,占总分离物的75.16%;其它菌40个,占24.84%,说明镰刀菌是新疆加工辣椒的主要致病菌。经致病性测定后,采用形态学观察结合18SrDNA-ITS、EF-1α和β?tubulin 3个序列分析,将80株有致病性的镰刀菌鉴定为尖孢镰刀菌(F.oxysporum)和茄病镰刀菌(F.solani),其中尖孢镰刀菌57株,占镰刀菌分离物的47.11%;茄病镰刀菌23株,占19.01%。     

枇杷花腐病病原生物学特性研究

对枇杷花腐病干腐型(拟盘多毛孢Pestalotiopsis eriobotrifolia)和湿腐型(灰葡萄孢Botrytis cinerea)病原菌的生物学特性进行了研究.结果表明,两种病原菌在供试培养基上均能生长.在碳源利用上,除了木糖,不同碳源对拟盘多毛孢生长影响不大,灰葡萄孢则能很好地利用各种供试碳源.它们也都能利用各类供试氮源,适生温度5～35 ℃,25、20 ℃分别为拟盘多毛孢和灰葡萄孢最适生长温度.pH值过高或过低对二者生长都不利,拟盘多毛孢最佳生长pH值4或5,灰葡萄孢为pH值5.拟盘多毛孢分生孢子在全光照下萌发率最高,灰葡萄孢在全黑暗条件下萌发率最高;萌发最佳温度分别为30 ℃和15 ℃,最适相对湿度为75%和78%,最适营养为蔗糖和葡萄糖,致死温度为50 ℃和44 ℃.     

杧果果实潜伏侵染真菌种类研究

为了探明杧果果实真菌的潜伏侵染状况,采用组织分离法对采自华南6省区的杧果果实真菌潜伏侵染进行研究,结果表明,我国杧果果实普遍存在真菌的潜伏侵染现象,但不同省区的带菌率存在显著差异,果柄和果实蒂部的带菌率极显著高于果实中部和端部的带菌率。共鉴定11种潜伏侵染真菌,分别为胶孢炭疽菌(Colletotrichumgloeosporioides Penz.)、可可球二孢菌(Botryodiplodia theobromae Pat.)、尖孢炭疽菌(Colletotrichum acutatum Sim-monds.)、杧果拟茎点霉(Phomopsis mangiferae Ahmad.)、杧果拟盘多毛孢(Pestalotiopsis mangiferae(P.Henn.)Sutton.)、多米尼加小穴壳(Dothiorella dominicana Pet.et Cif.)、杧果大茎点霉(Macrophoma mangiferae Hing.&O.P.Sharma)、链格孢(Alternaria alternata(Fr.)Keissl.)、曲霉(Aspergillus sp.)、弯孢霉(Curvularia sp.)、镰刀菌(Fusarrium spp.)。其中,胶孢炭疽菌(C.gloeosporioides)、可可球二孢菌(B.theobromae)为主要潜伏侵染真菌,杧果大茎点霉(M.mangiferae)为首次报道的杧果潜伏侵染真菌。     

辣椒采后病害发生情况

从广东省广州、增城采收辣椒,在常温（25 ℃）贮藏条件下观察辣椒采后病害的发生情况,测定采收时无病害症状的辣椒组织中病菌的潜伏侵染率。结果表明：辣椒采后在25 ℃下贮藏,发生的病害有果腐病（Fusarium sp.）、炭疽病（Colletotrichum gloeosporioides）、软腐病（Erwinia carotovora）、黑斑病（Alternaria alternata）、疫病（Phytophthora capsici）、灰霉病（Botrytis cinerea）,且5 d后开始表现病害症状。其中果腐病、炭疽病、软腐病是辣椒采后的主要病害。辣椒采后病害主要从果柄部位开始发生,向果蒂和果身部位扩展,最后引起整个辣椒果实腐烂。辣椒果柄、果蒂是带有潜伏侵染菌较多的部位,从果柄、果蒂组织中分离出的病菌有炭疽病、链格孢菌、镰刀菌、灰葡萄孢菌和欧氏杆菌,从果身组织中只分离出炭疽菌、链格孢菌和欧氏杆菌。伤口是辣椒采后病害病原菌侵入的主要通道,伤口接种的处理发病率高,无伤口接种的处理不发病。剪除果柄可明显减轻辣椒采后病害的发生,提高辣椒的贮藏效果。     

冬枣炭疽病病原鉴定

冬枣炭疽病主要危害冬枣果实,可导致果实腐烂和提早落果,使品质下降,产量降低.2008～2010年对山东滨州不同冬枣园区冬枣炭疽病病果进行分离、回接和再分离,依照柯赫氏法则进行判断.结果表明:冬枣炭疽病病原为胶孢炭痘菌(Colletotrichum gloeosporioides).     

镰刀菌引起的北京市草莓根腐病病原鉴定

对北京市昌平区采集的35个草莓根腐病病样进行病原鉴定,结果分离获得13个菌株,根据培养特征和形态学鉴定,确定分离到的菌株均为尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）|选取真菌通用引物ITS1/ITS4扩增菌株的rDNA-ITS序列并进行测序,通过与GenBank数据库序列比对,分子鉴定结果与形态学一致。将分离到的菌株回接到健康草莓幼苗上,植株表现出与田间发病相似的症状,重新分离能够得到相同的病原物。基于形态学、分子生物学鉴定及致病性检测,最终确定北京市昌平区草莓根腐病的病原菌为Fusarium oxysporum。     

草莓根腐病菌C16-4的分离鉴定及生物学特性研究

【目的】针对近年来设施草莓根腐病普遍发生并逐年加重的现状,明确北京地区引起设施草莓根腐病的主要致病真菌的种类。【方法】以草莓根腐病(Strawberry root rot)为研究对象,采用组织分离法,从病株上共分离纯化得到5个菌株,对主要致病菌C16-4进行了鉴定和生物学特性研究。【结果】结果表明,最利于C16-4生长和产孢的培养基为PDA;最佳氮源为蛋白胨,最佳碳源为麦芽糖和淀粉。菌丝在10~35℃均可以生长,在本试验所设温度范围内,最适生长和产孢的温度分别为25℃和30℃。菌丝在pH值为5~7时均可以生长,最适pH值为7,中性条件下利于产孢。不同光照条件对菌丝生长影响不明显,在全黑暗情况下产孢量最大。【结论】通过培养性状、形态特征、致病性测定结果和ITS序列分析,将C16-4鉴定为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporium Schlecht)。     

胡萝卜镰刀菌根腐病病原菌的鉴定

为明确内蒙古西部地区一种新病害——胡萝卜镰刀菌根腐病病原菌种类,采用组织分离法对病原菌进行分离,用胡萝卜片接种、有伤口和无伤口胡萝卜肉质根接种及盆栽接种进行致病性测定,并通过形态学和分子生物学方法对病原菌进行鉴定。结果表明,分离到的3个菌株F1、F2和F3均表现致病性。经形态学鉴定,F1菌株为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum),F2和F3为茄病镰刀菌(Fusarium solani)。进一步采用真菌通用引物ITS1/ITS4对病原菌r DNA-ITS进行PCR扩增,并将测序结果在Gen Bank中进行同源性比对分析,鉴定结果和形态学鉴定的结果一致。明确了内蒙古西部地区胡萝卜镰刀菌根腐病的病原菌种类为尖孢镰刀菌(F.oxysporum)和茄病镰刀菌(F.solani)。     

草莓品种对炭疽病抗性的鉴定技术研究

从沈阳农业大学草莓试验园的发病草莓植株上分离获得胶孢炭疽菌[Colletotrichum gloeosporioides(Penz.)Sacc.],以6个草莓主栽品种为试材,进行品种抗病性鉴定技术研究。结果表明,点滴接种、菌片接种和喷雾接种3种方法均能使供试草莓植株感染炭疽病,其中以喷雾接种法发病率和病情指数最高。据此建立了草莓对炭疽病抗性鉴定技术体系:以菌悬液在植株6叶期喷雾接种,接种适宜孢子量1.0×105个/mL,保湿时间48h,接种后5d调查叶片病情和接种后7d调查叶柄及匍匐茎病情。草莓品种抗性鉴定结果表明,红颜属感病品种,丰香表现中感,哈尼、新明星表现中抗,而玛利亚和吐德拉抗性较强,此结果与其生产上的表现基本一致。     

草莓根腐病病原真菌Ilyonectria novozelandica的鉴定

采用形态学与分子生物学技术对草莓根腐病病原菌进行鉴定.对草莓育苗圃内发病草莓根部进行组织培养、病原菌分离纯化,通过传统的形态学观察初步判断该病原菌菌株为土赤壳属病原菌.利用通用引物ITS1/ITS4初步鉴定该病原菌菌株ZJ16属于土赤壳属,但不能鉴定到种,又选择土赤壳属特异基因EF-1α和Histone H3基因引物序...