| 七带石斑鱼类胰岛素生长因子-Ⅰ成熟肽的克隆及原核表达与活性分析 |
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| 引用本文： | 陈圣毅,刘新富,徐永江,刘芝亮,柳学周,史 宝,王妍妍.七带石斑鱼类胰岛素生长因子-Ⅰ成熟肽的克隆及原核表达与活性分析[J].水产学报,2013,37(9):1290-1296. |
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| 作者姓名： | 陈圣毅 刘新富 徐永江 刘芝亮 柳学周 史 宝 王妍妍 |
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| 作者单位： | 中国水产科学研究院黄海水产研究所,农业部海洋渔业可持续发展重点实验室;中国水产科学研究院黄海水产研究所,农业部海洋渔业可持续发展重点实验室;中国水产科学研究院黄海水产研究所,农业部海洋渔业可持续发展重点实验室;中国水产科学研究院黄海水产研究所,农业部海洋渔业可持续发展重点实验室;中国水产科学研究院黄海水产研究所,农业部海洋渔业可持续发展重点实验室;中国水产科学研究院黄海水产研究所,农业部海洋渔业可持续发展重点实验室;中国水产科学研究院黄海水产研究所,农业部海洋渔业可持续发展重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家“八六三”高技术研究发展计划（2012AA10A413）；鲆鲽类现代产业技术体系（CARS-50）；中央级公益性事业单位基本科研业务费项目（20603022012022号）；山东省自然科学基金项目（ZR2012CQ025）；青岛市科技计划项目（11-1-1-11-hy） |
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| 摘 要： | 应用RT-PCR方法扩增七带石斑鱼类胰岛素生长因子-Ⅰ(esIGF-Ⅰ)成熟肽序列。该成熟肽序列由210个碱基组成,编码70个氨基酸,包括B-C-A-D 4个结构域。将此成熟肽片段导入原核表达载体pET-28a上,在IPTG诱导下成功在E.coli BL21(DE3)中融合表达。SDS-PAGE分析表明,融合蛋白大小为11 ku,在IPTG诱导后3 h表达量最高,占菌体总蛋白的51.8%,重组蛋白主要以包涵体形式存在。对重组蛋白进行变性、纯化和复性,获得了纯化的重组蛋白。Western-blotting免疫印迹分析表明,融合蛋白可特异性地被6×His抗体识别。细胞增殖实验表明,纯化的IGF-Ⅰ融合蛋白能促使人乳腺癌细胞MDA231细胞增殖,表明具有生物活性。
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| 关 键 词： | 七带石斑鱼 类胰岛素生长因子-Ⅰ 成熟肽克隆 原核表达 生物活性分析 |
| 收稿时间： | 2013/4/20 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2013/5/24 0:00:00 |
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