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罗氏沼虾谷氨酰胺合成酶基因的克隆与表达
引用本文:卢志杰,叶成凯,Sarath Babu V,张晓君,刘晓丹,赵丽娟,潘淦,林蠡.罗氏沼虾谷氨酰胺合成酶基因的克隆与表达[J].水产学报,2019,43(3):549-562.
作者姓名:卢志杰  叶成凯  Sarath Babu V  张晓君  刘晓丹  赵丽娟  潘淦  林蠡
作者单位:华南师范大学生命科学学院, 广东省水产健康安全养殖重点实验室, 广东 广州 510631;仲恺农业工程学院动物科技学院, 广东省水环境与水产品安全工程技术研究中心, 广州市水产病害与水禽养殖重点实验室, 广东 广州 510225,华南师范大学生命科学学院, 广东省水产健康安全养殖重点实验室, 广东 广州 510631;仲恺农业工程学院动物科技学院, 广东省水环境与水产品安全工程技术研究中心, 广州市水产病害与水禽养殖重点实验室, 广东 广州 510225,仲恺农业工程学院动物科技学院, 广东省水环境与水产品安全工程技术研究中心, 广州市水产病害与水禽养殖重点实验室, 广东 广州 510225,扬州大学动物科技学院, 江苏 扬州 225000,扬州大学动物科技学院, 江苏 扬州 225000,仲恺农业工程学院动物科技学院, 广东省水环境与水产品安全工程技术研究中心, 广州市水产病害与水禽养殖重点实验室, 广东 广州 510225,华南师范大学生命科学学院, 广东省水产健康安全养殖重点实验室, 广东 广州 510631,仲恺农业工程学院动物科技学院, 广东省水环境与水产品安全工程技术研究中心, 广州市水产病害与水禽养殖重点实验室, 广东 广州 510225
基金项目:广东省高等教育“创新强校工程”专项(KA170500G);江苏省渔业科技创新项目(D2017-3)
摘    要:谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase, GS)是一种广泛分布在动植物体内的酶,并参与细胞多种代谢调控。在甲壳动物中,GS在能量代谢和渗透压调节过程中起着重要作用。实验克隆了罗氏沼虾GS基因。GS基因cDNA全长1 965 bp,开放读码框(ORF)为1 086 bp,编码361个氨基酸(aa),分子量大小为40.75 ku,等电点为5.81。进化树分析发现,罗氏沼虾GS基因与凡纳滨对虾、斑节对虾和中国明对虾GS聚为一支,氨基酸相似性达到95%。氨基酸多序列比对分析结果显示,罗氏沼虾GS属于无脊椎动物分支的GSⅡ群,有5个保守区域。实验对罗氏沼虾GS蛋白进行表达并制备了多克隆抗体。采用荧光定量PCR技术(qRT-PCR)和免疫印迹(Western blot)对罗氏沼虾蜕壳前后的不同组织GS表达进行检测。qRT-PCR结果显示,GS基因在所检测的8个组织中均有表达;蜕壳前,其相对表达量顺序为:肝胰脏肌肉胃肠鳃心脏脑血淋巴。蜕壳后和蜕壳前GS基因在组织中的差异表达比较结果显示,除了在肝胰脏表达下调外,其他7个组织都表达升高,其相对表达量的差异顺序为:脑鳃胃肠肌肉心脏血淋巴。Westernblot结果显示,蜕壳后GS蛋白在鳃和肌肉组织表达量上调,与其mRNA表达一致。此外,罗氏沼虾蜕壳后肝胰脏GS酶的活性和谷氨酰胺的含量下调,而其在鳃、肌肉和血淋巴中上调,结果与其基因表达一致。研究表明,GS基因在不同组织中表达的差异可能和罗氏沼虾的能量代谢、渗透压调节有关。

关 键 词:罗氏沼虾  谷氨酰胺合成酶  组织表达  蜕壳
收稿时间:2018/5/6 0:00:00
修稿时间:2018/6/8 0:00:00

Cloning and expression of glutamine synthetase from giant freshwater prawn (Macrobrachium rosenbergii)
LU Zhijie,YE Chengkai,Sarath Babu V,ZHANG Xiaojun,LIU Xiaodan,ZHAO Lijuan,PAN Gan and LIN Li.Cloning and expression of glutamine synthetase from giant freshwater prawn (Macrobrachium rosenbergii)[J].Journal of Fisheries of China,2019,43(3):549-562.
Authors:LU Zhijie  YE Chengkai  Sarath Babu V  ZHANG Xiaojun  LIU Xiaodan  ZHAO Lijuan  PAN Gan and LIN Li
Affiliation:Guangdong Provincial Key Laboratory for Healthy and Safe Aquaculture, College of Life Science, South China Normal University, Guangzhou 510631, China;Guangdong Provincial Water Environment and Aquatic Products Security Engineering Technology Research Center, Guangzhou Key Laboratory of Aquatic Animal Diseases and Waterfowl Breeding, Zhongkai University of Agriculture and Engineering, Guangzhou 510225, China,Guangdong Provincial Key Laboratory for Healthy and Safe Aquaculture, College of Life Science, South China Normal University, Guangzhou 510631, China;Guangdong Provincial Water Environment and Aquatic Products Security Engineering Technology Research Center, Guangzhou Key Laboratory of Aquatic Animal Diseases and Waterfowl Breeding, Zhongkai University of Agriculture and Engineering, Guangzhou 510225, China,Guangdong Provincial Water Environment and Aquatic Products Security Engineering Technology Research Center, Guangzhou Key Laboratory of Aquatic Animal Diseases and Waterfowl Breeding, Zhongkai University of Agriculture and Engineering, Guangzhou 510225, China,College of Animal Science and Technology, Yangzhou University, Yangzhou 225000, China,College of Animal Science and Technology, Yangzhou University, Yangzhou 225000, China,Guangdong Provincial Water Environment and Aquatic Products Security Engineering Technology Research Center, Guangzhou Key Laboratory of Aquatic Animal Diseases and Waterfowl Breeding, Zhongkai University of Agriculture and Engineering, Guangzhou 510225, China,Guangdong Provincial Key Laboratory for Healthy and Safe Aquaculture, College of Life Science, South China Normal University, Guangzhou 510631, China and Guangdong Provincial Water Environment and Aquatic Products Security Engineering Technology Research Center, Guangzhou Key Laboratory of Aquatic Animal Diseases and Waterfowl Breeding, Zhongkai University of Agriculture and Engineering, Guangzhou 510225, China
Abstract:
Keywords:Macrobrachium rosenbergii  glutamine synthetase  tissue expression  molting
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