| 摘 要： | 呼吸爆发过程可以产生大量的活性氧,核因子E2相关因子2(Nrf2)在此过程中起着重要作用。本文克隆和分析了草鱼的Nrf2基因,随后制备了Nrf2蛋白的多克隆抗体,研究了其和呼吸爆发的关系。草鱼Nrf2基因cDNA长度为1994 bp,开放阅读框为1782 bp,编码593个氨基酸(aa)。氨基酸序列比对发现,草鱼Nrf2基因与鲤鱼的同源性最高,为87%;草鱼Nrf2基因含有6个进化过程中保守的Neh(Nrf2-Epoxy chloropropane(ECH)homology)区。实时定量PCR(qRT-PCR)和蛋白印迹法(WB)检测结果表明,Nrf2基因在检测的草鱼8个组织中均有表达。Nrf2激活剂叔丁基对苯二酚(t BHQ)处理草鱼肾细胞(CIK)后,CIK细胞总抗氧化力显著上调,产生的活性氧下调,Nrf2及其下游的HO-1和GST基因的mRNA表达上调。WB和免疫荧光(IF)检测结果表明,tBHQ处理CIK后,Nrf2的蛋白表达也上调,并伴随着入细胞核现象。综上结果表明,保守的草鱼Nrf2基因在机体中广泛表达,能通过上调自身及其下游抗氧化基因的表达下调细胞活性氧的产生,从而参与调控呼吸爆发过程。
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