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苦楝SRAP-PCR反应体系的建立及优化
引用本文:陈丽君,刘明骞,廖柏勇,邓小梅,陈晓阳.苦楝SRAP-PCR反应体系的建立及优化[J].华南农业大学学报,2015,36(3):104-108.
作者姓名:陈丽君  刘明骞  廖柏勇  邓小梅  陈晓阳
作者单位:1. 广东省森林植物种质创新与利用重点实验室/华南农业大学林学院,广东广州510642;华南农业大学教学科研基地管理中心,广东广州510642
2. 广东省森林植物种质创新与利用重点实验室/华南农业大学林学院,广东广州,510642
基金项目:广东省林业科技创新项目(2011KJCX002)
摘    要:【目的】应用SRAP技术对苦楝Melia azedarach遗传多样性、种质资源鉴定等开展研究,对苦楝SRAP-PCR体系中的模板DNA、d NTPs、Mg2+、引物和Taq DNA聚合酶5个组分浓度进行优化,建立适合苦楝的SRAP-PCR反应体系.【方法】采用单因素试验对反应体系中的5个因素分别设置8个浓度梯度水平,确定浓度范围后进行L16(45)正交试验设计,并对结果进行打分,确定优化体系.【结果和结论】SRAP对苦楝DNA浓度的要求不高,有一个较宽的浓度适宜范围;d NTPs在0.1~0.2 mmol·L-1范围内,能扩增出条带基本相同的清晰谱带;Mg2+为2.0mmol·L-1左右时扩增条带较清晰且数量多;引物介于0.48~0.64μmol·L-1均能扩增出带型基本保持一致且清晰的谱带;Taq DNA聚合酶在0.50~2.00 U范围内可以得到清晰的带型.根据正交试验设计16个处理的得分,确定优化的反应体系为:模板DNA 30 ng、d NTPs 0.125 mmol·L-1、Mg2+2.25 mmol·L-1、引物0.48μmol·L-1、Taq DNA聚合酶0.75 U,反应总体积25μL.

关 键 词:苦楝  SRAP-PCR  体系优化  正交试验设计
收稿时间:2014/1/27 0:00:00

Establishment and optimization of SRAP-PCR system in Melia azedarach
CHEN Lijun,LIU Mingqian,LIAO Boyong,DENG Xiaomei and CHEN Xiaoyang.Establishment and optimization of SRAP-PCR system in Melia azedarach[J].Journal of South China Agricultural University,2015,36(3):104-108.
Authors:CHEN Lijun  LIU Mingqian  LIAO Boyong  DENG Xiaomei and CHEN Xiaoyang
Affiliation:1 Guangdong Key Laboratory for Innovative Development and Utilization of Forest Plant Germplasm/College of Forestry, South China Agricultural University, 2 Center for Teaching and Research Base, South China Agricultural University,,1 Guangdong Key Laboratory for Innovative Development and Utilization of Forest Plant Germplasm/College of Forestry, South China Agricultural University,,1 Guangdong Key Laboratory for Innovative Development and Utilization of Forest Plant Germplasm/College of Forestry, South China Agricultural University,,1 Guangdong Key Laboratory for Innovative Development and Utilization of Forest Plant Germplasm/College of Forestry, South China Agricultural University, and 1 Guangdong Key Laboratory for Innovative Development and Utilization of Forest Plant Germplasm/College of Forestry, South China Agricultural University,
Abstract:
Keywords:Melia azedarach  SRAP-PCR  optimization  orthogonal design
本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录!
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