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草酸青霉菌I1的cDNA文库构建及其溶磷相关基因的筛选
引用本文:唐超西,龚明波,李顺鹏,朱昌雄.草酸青霉菌I1的cDNA文库构建及其溶磷相关基因的筛选[J].中国农业科学,2012,45(18):3792-3800.
作者姓名:唐超西  龚明波  李顺鹏  朱昌雄
作者单位:1.中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所,北京 100081; 2.中国农业科学院农业资源与农业区划研究所,北京 100081; 3.南京农业大学生命科学学院/农业部农业环境微生物工程重点开放实验室,南京 210095
基金项目:中央级公益性科研院所基本科研业务费中国农科院资源区划所专项资金(2011-10);水体污染控制与治理国家科技重大专项巢湖项目农业面源课题(2009ZX07103-002)
摘    要: 【目的】构建草酸青霉菌I1的cDNA文库,筛选溶磷相关基因。【方法】利用SMART技术构建草酸青霉菌I1的初级cDNA文库,通过难溶磷培养基筛选具有溶磷能力的转化子,测序并进行生物信息学分析。在难溶磷液体培养基中,进行转化子对溶液pH值、可溶磷含量的影响和产有机酸试验。【结果】成功构建了草酸青霉菌I1的初级cDNA文库,其库容量约为5.29×106 cfu•mL-1,重组率为99%;利用难溶磷固体培养基筛选,得到具有溶磷圈的转化子48个,其中转化子I-4的cDNA序列全长536 bp,为一个新的序列,基因编码氨基酸残基序列长129 n.t。转化子E. coli HST08 I-4在液体难溶磷培养基中培养,提高了有机酸的表达量,并增加了有机酸的种类,在培养12 h后,开始产生乙酸,24 h后,溶液中产生乳酸、苹果酸和α-酮戊二酸,培养36 h,溶液pH值由6.32降到3.69,可溶磷含量达到0.1076 mg•mL-1。【结论】从草酸青霉I1中筛选到一个溶磷相关基因pstI。

关 键 词:草酸青霉菌  cDNA文库  溶磷相关基因  有机酸
收稿时间:2012-01-19

Construction of cDNA Library of Penicillium oxalicum I1 and Screening of Phosphate-Dissolving Related Gene
TANG Chao-xi,GONG Ming-bo,LI Shun-peng,ZHU Chang-xiong.Construction of cDNA Library of Penicillium oxalicum I1 and Screening of Phosphate-Dissolving Related Gene[J].Scientia Agricultura Sinica,2012,45(18):3792-3800.
Authors:TANG Chao-xi  GONG Ming-bo  LI Shun-peng  ZHU Chang-xiong
Affiliation:1(1Institute of Agricultural Environment and Sustainable Development,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Beijing 100081;2 Institute of Agricultural Resources and Regional Planning,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Beijing 100081;3College of Life Sciences,Nanjing Agricultural University/Key Laboratory for Microbiological Engineering of Agricultural Environment,Ministry of Agriculture,Nanjing 210095)
Abstract:
Keywords:Penicillium oxalicum  cDNA library  phosphate-solubilizing related gene  organic acid
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