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| 甜菜NADH-NR gDNA全长序列的克隆及酶切鉴定 | |
| 引用本文： | 丁广洲,侯静,马凤鸣,陈丽,陈连江.甜菜NADH-NR gDNA全长序列的克隆及酶切鉴定[J].农学学报,2012,2(11):6-11. |
| 作者姓名： | 丁广洲 侯静 马凤鸣 陈丽 陈连江 |
| 作者单位： | 1. 黑龙江省普通高校甜菜遗传育种重点实验室/黑龙江大学,哈尔滨150080 中国农业科学院甜菜研究所,哈尔滨150030 2. 东北农业大学农学院,哈尔滨,150030 3. 黑龙江省普通高校甜菜遗传育种重点实验室/黑龙江大学,哈尔滨,150080 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目“甜菜硝酸还原酶基因的克隆及表达与调控研究” |
| 摘 要： | 为了研究甜菜NADH-NR gDNA的序列特征,从分子水平上为甜菜硝酸盐累积差异机理的研究做铺垫;利用二倍体甜菜品种‘甜研7号’,采用分步克隆方法,分别获得甜菜NADH-NR基因组DNA的3’端序列和5’端序列以及中间序列,再以3’端和5’端序列设计特异引物,克隆获得甜菜NADH-NR基因组DNA的全序列;结果表明,甜菜NADH-NR gDNA全长序列6346bp,经与先前获得的甜菜NADH-NR cDNA序列比对,甜菜NADH-NR gDNA含有3个内含子,4个外显子。内含子大小分别为197、1088、2343bp。甜菜NADH-NR gDNA的外显子序列与菠菜的同源性达到78%,但内含子序列在进化期间发生了较大分化,甜菜NADH-NR gDNA的内含子相对菠菜要大,两者也不处于同样的位点,甜菜NADH-NR gDNA的内含子靠近5＇端较早出现,每个内含子大小均是菠菜的1.10～1.71倍。本研究首次从甜菜中克隆获得NADH-NR gDNA全长序列,揭示了其序列特征并将其与其他作物进行了比较分析,为进一步利用该基因开展甜菜硝酸盐含量的基因调控研究奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 甜菜 NADH-NR gDNA 克隆 酶切鉴定 |
| 收稿时间： | 2012/7/12 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2012/8/17 0:00:00 |
Cloning of NADH-NR gDNA Full-length Sequence and Enzyme Digestion |
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| Abstract: | Using diploid sugar beet variety Ty7, obtained 3′end region, 5′end region and middle sequence respectively by stepwise cloning method. And then designed specific primer according to 3′end and 5′end region, the complete genomic sequence of nitrate reductase was assembled, The full-length sequence of nitrate reductase genomic DNA was 6,346 bp long. Proved the sequence obtained was target sequence by enzyme digestion. The results of sequence comparisons with its cDNA cloned previously showed that nitrate reductase genomic DNA has three introns, the sizes of the introns were: 197bp, 1088bp and 2343bp. |
| Keywords: | Enzyme digestion |
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