| 鸭疫里默氏杆菌Tet(X)基因原核表达及其功能鉴定 |
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| 引用本文： | 黄雪龙,单敏,陈烨,刘玲俐,何晶,王小兰,于圣青,罗廷荣,涂剑,李涛.鸭疫里默氏杆菌Tet(X)基因原核表达及其功能鉴定[J].南方农业学报,2019,50(4). |
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| 作者姓名： | 黄雪龙 单敏 陈烨 刘玲俐 何晶 王小兰 于圣青 罗廷荣 涂剑 李涛 |
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| 作者单位： | 南华大学药物药理研究所,湖南衡阳 421001;中国农业科学院上海兽医研究所,上海 200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海 200241;广西大学动物科学技术学院,南宁 530004;中国农业科学院上海兽医研究所,上海,200241;广西大学动物科学技术学院,南宁,530004;南华大学药物药理研究所,湖南衡阳,421001 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划;上海市自然科学基金;中央级公益性科研院所基本科研业务费专项;分子靶标新药研究协同创新中心项目 |
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| 摘 要： | 【目的】确定鸭疫里默氏杆菌Tet(X)基因是否与四环素类耐药相关,寻找出抗鸭疫里默氏杆菌药物研发新靶点。【方法】克隆鸭疫里默氏杆菌Tet(X)基因,以大肠杆菌原核表达体系进行诱导表达,利用生物信息学软件分析原核表达蛋白的功能和特性,并采用实时荧光定量PCR检测四环素和多西环素对鸭疫里默氏杆菌Tet(X)基因的调控作用。【结果】从鸭疫里默氏杆菌基因组扩增获得的Tet(X)基因编码框全长1167 bp,编码388个氨基酸,其编码蛋白分子量约42.53 kD,理论等电点(pI)为10.073,与AS87_09615(Yb2)、RIA_0369(YA-GD)、RAYM_08235(RA-YM)、G148_1777(RA-CH-2)、RIA_0365(YA-GD)、G148-1767(RA-CH-2)、B739_0035(RA-CH-1)和B739_0030(RA-CH-1)等8个来源于不同种鸭疫里默氏杆菌的蛋白具有较高同源性(96%～100%)。利用原核表达体系诱导表达获得的Tet(X)融合蛋白分子量约45.40 kD,且主要以包涵体的形式表达。Tet(X)融合蛋白能有效提高宿主菌株对典型四环素类药物(四环素和多西环素)的最小抑菌浓度(MIC);实时荧光定量PCR检测结果显示,四环素和多西环素对鸭疫里默氏杆菌Tet(X)基因表达量的调控呈非线性。四环素浓度为0～4 mg/L时,Tet(X)基因相对表达量随药物浓度的增加而逐渐增加;浓度为4～12 mg/L时,Tet(X)基因相对表达量随药物浓度的增加而逐渐降低。多西环素药物浓度为0～3 mg/L时,Tet(X)基因相对表达量随药物浓度的增加而逐渐增加;浓度为3～6 mg/L时,Tet(X)基因相对表达量随药物浓度的增加而逐渐降低。【结论】Tet(X)可有效提高宿主菌株对四环素类药物的耐受性,在一定的四环素类药物剂量范围内可诱导Tet(X)基因表达。不同鸭疫里默氏杆菌Tet(X)基因具有不同来源,说明Tet(X)可能存在基因水平转移,且具有环境扩散的风险。
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| 关 键 词： | 鸭疫里默氏杆菌 Tet(X)基因 原核表达 功能鉴定 |
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