| 水稻锌指蛋白基因CRISPR/Cas9突变体的构建及突变分析 |
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| 引用本文： | 易勇,郑瑞,杨波,栾维江,郭嗣斌,沙爱华.水稻锌指蛋白基因CRISPR/Cas9突变体的构建及突变分析[J].南方农业学报,2020,51(11):2607-2613. |
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| 作者姓名： | 易勇 郑瑞 杨波 栾维江 郭嗣斌 沙爱华 |
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| 作者单位： | 长江大学农学院/主要粮食作物产业化湖北省协同创新中心,湖北荆州 434025天津师范大学生命科学学院,天津 300387广西农业科学院水稻研究所/广西水稻遗传育种重点实验室,南宁 530007 |
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| 基金项目： | 广西水稻遗传育种重点实验室开放基金项目广西自然科学基金项目国家重点研发计划项目 |
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| 摘 要： | 目的]通过CRISPR/Cas9基因编辑技术对水稻锌指蛋白基因(OsC3H54)进行基因编辑,筛选鉴定出其突变体植株,为深入研究OsC3H54的生物学功能提供良好材料,也为水稻锌指蛋白研究提供参考依据.方法]通过E-CRISP在OsC3H54基因的外显子上设计靶点序列,将靶点序列连接至OsU6SK载体上,再与Cas9一起连接到pCAM-BIA1300双元载体上,获得CRISPR/Cas9重组双元载体,通过农杆菌介导将其转入日本晴水稻愈伤组织,利用潮霉素进行抗性筛选,获得突变体植株,并分析其靶点位置的碱基及编码氨基酸突变情况.结果]在OsC3H54基因第2个外显子上找到2个符合靶点设计要求的靶点,分别为TG1:5'-CCGCCGCGGCTGCCTTTGGATAC-3'和TG2:5'-CCTTCCC CAATGGCGGGGGTGGC-3'.将OsU6SK载体和靶点序列正确连接的重组载体与Cas9一起连接至pCAMBIA1300双载体上,成功获得CRISPR/Cas9重组双元载体(pCAMBIA1300-Cas9-TG1和pCAMBIA1300-Cas9-TG2).通过农杆菌介导转入日本晴水稻,经潮霉素抗性筛选获得TG1靶点株系和TG2靶点株系,共16株CRISPR/Cas9突变体植株.CRISPR/Cas9突变体植株在靶点序列的突变位点位置附近出现套峰,表明2个株系的植株均发生碱基突变,其中Y1、Y2、Y3和Y4突变体植株均为单碱基插入突变,最终导致编码的氨基酸发生移码突变,蛋白翻译提前终止.结论]水稻OsC3H54基因CRISPR/Cas9突变体植株的获得为进一步研究水稻锌指蛋白生物学功能提供了良好材料.
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| 关 键 词： | 水稻 锌指蛋白 C3H54 CRISPR/Cas9 基因编辑 突变体植株 突变分析 |
CRISPR/Cas9 mutants construction of rice zinc finger protein gene and mutation analysis |
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| YI Yong,ZHENG Rui,YANG Bo,LUAN Wei-jiang,GUO Si-bin,SHA Ai-hua.CRISPR/Cas9 mutants construction of rice zinc finger protein gene and mutation analysis[J].Journal of Southern Agriculture,2020,51(11):2607-2613. |
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| Authors: | YI Yong ZHENG Rui YANG Bo LUAN Wei-jiang GUO Si-bin SHA Ai-hua |
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