| 特异性识别草鱼呼肠孤病毒感染细胞的ssDNA核酸适配体筛选与鉴定 |
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| 引用本文： | 余庆,刘明珠,李梦梦,肖贺贺,韦信贤,童桂香,吴思婷,李鹏飞.特异性识别草鱼呼肠孤病毒感染细胞的ssDNA核酸适配体筛选与鉴定[J].南方农业学报,2020,51(12):3057-3065. |
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| 作者姓名： | 余庆 刘明珠 李梦梦 肖贺贺 韦信贤 童桂香 吴思婷 李鹏飞 |
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| 作者单位： | 广西科学院广西北部湾海洋研究中心/广西海洋天然产物与组合生物合成化学重点实验室,南宁 530007河南师范大学生命科学学院,河南新乡 453007广西水产科学研究院/广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室,南宁 530021华南农业大学海洋学院/广东省水产免疫与健康养殖工程技术研究中心,广州 510642 |
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| 基金项目： | 广西自然科学基金项目广西重点研发计划项目国家自然科学基金联合基金重点支持项目 |
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| 摘 要： | 目的]筛选出能高特异性和高亲和性识别草鱼呼肠孤病毒(GCRV)感染细胞的核酸适配体,为研发操作便捷、成本低、耗时短、准确度高的GCRV检测技术打下基础,同时为提高水产疫病检测及防控效率提供技术支持.方法]以草鱼呼肠孤病毒I型(GCRVI)感染的宿主细胞为靶标,采用指数富集的配体系统进化技术(SELEX)进行特异性核酸适配体筛选,并通过激光共聚焦显微技术和流式细胞术对筛选获得的核酸适配体性质进行系统分析.结果]筛选获得的核酸适配体GVIK1能特异性识别并结合在GCRVI感染的草鱼肾脏组织细胞系(CIK)表面,但不识别正常的CIK细胞及石斑鱼神经坏死病毒广西株(GNNV)感染的石斑鱼脾细胞(GS);其二级结构具有独特复杂的茎环结构,吉布斯自由能(△G)为-32.93 kJ/mol,无细胞毒性.核酸适配体GVIK1结合靶标细胞的亲和常数(Kd)为148.22 nmol/L,即核酸适配体GVIK1与靶标细胞间的亲和力极强,达纳摩尔级别.核酸适配体GVIK1在靶标细胞表面的结合位点是细胞膜蛋白或膜蛋白相关结构,其在靶标细胞表面的结合位点出现在病毒感染后的第5h.临床试验结果表明,筛选获得的核酸适配体GVIK1可作为高特异性分子探针用于诊断GCRV感染所致的草鱼出血病.结论]基于SELEX技术筛选获得能特异性识别GCRVI感染宿主细胞的核酸适配体GVIK1,可作为核酸分子探针用于研发操作便捷、成本低、耗时短、准确度高的GCRV快速检测技术,实现实时监测和有效防控.
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| 关 键 词： | 草鱼呼肠孤病毒(GCRV) 指数富集的配体系统进化技术(SELEX) 核酸适配体 靶蛋白 |
Selection and characterization of ssDNA aptamer specifically recognizing grass carp reovirus(GCRV)infected fish cells |
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| YU Qing,LIU Ming-zhu,LI Meng-meng,XIAO He-he,WEI Xin-xian,TONG Gui-xiang,WU Si-ting,LI Peng-fei.Selection and characterization of ssDNA aptamer specifically recognizing grass carp reovirus(GCRV)infected fish cells[J].Journal of Southern Agriculture,2020,51(12):3057-3065. |
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| Authors: | YU Qing LIU Ming-zhu LI Meng-meng XIAO He-he WEI Xin-xian TONG Gui-xiang WU Si-ting LI Peng-fei |
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