| 长期超低温冷冻保存对鞍带石斑鱼精子超微结构及酶活性的影响 |
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| 引用本文： | 丁小雨,李振通,段鹏飞,邱弈树,王心怡,黎琳琳,王林娜,刘阳,李文升,王清滨,赵侠,田永胜,李胜忠.长期超低温冷冻保存对鞍带石斑鱼精子超微结构及酶活性的影响[J].水产学报,2023,47(7):079605-1-079605-17. |
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| 作者姓名： | 丁小雨 李振通 段鹏飞 邱弈树 王心怡 黎琳琳 王林娜 刘阳 李文升 王清滨 赵侠 田永胜 李胜忠 |
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| 作者单位： | 新疆农业大学生命科学学院；中国水产科学院黄海水产研究所，农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室,中国水产科学院黄海水产研究所，农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室； 青岛海洋科学与技术试点国家实验室，海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室；,中国水产科学院黄海水产研究所，农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室； 上海海洋大学，水产与生命学院,新疆农业大学生命科学学院；中国水产科学院黄海水产研究所，农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室,中国水产科学院黄海水产研究所，农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室； 上海海洋大学，水产与生命学院,中国水产科学院黄海水产研究所，农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室； 青岛海洋科学与技术试点国家实验室，海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室,中国水产科学院黄海水产研究所，农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室； 青岛海洋科学与技术试点国家实验室，海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室,中国水产科学院黄海水产研究所，农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室； 青岛海洋科学与技术试点国家实验室，海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室,莱州明波水产有限公司,莱州明波水产有限公司,莱州明波水产有限公司,新疆农业大学生命科学学院,中国水产科学院黄海水产研究所，农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室； 青岛海洋科学与技术试点国家实验室，海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室 |
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| 基金项目： | 山东省泰山产业领军人才工程项目(LJNY202109)；财政部和农业农村部国家现代农业产业技术体系资助项目(CARS-47)；山东省重点研发计划项目(2022LZGC016,2021LZGC028)；海南省重点研发项目（ZDYF2022XDNY243）；山东省农业良种工程项目(2019LZGC020)；中国水产科学研究院基本科研业务费项目(2020XT06, 2020TD19, 2020TD25)； |
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| 摘 要： | 【目的】本文旨在探究长期超低温冷冻保存中鞍带石斑鱼精子质膜、活力、超微结构及酶活性的变化，为阐明影响鞍带石斑鱼精子冷冻保存质量的相关机制提供理论依据。【方法】采集2022年鞍带石斑鱼鲜精及储存时间分别为23、49、61个月冷冻保存精液，用伊红-苯胺黑染色方法检测精子质膜完整性；用计算机辅助精子分析仪（CASA）检测精子运动参数；测量精浆和精子中琥珀酸脱氢酶（SDH）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽还原酶（GR）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）和肌酸激酶（CK）共六种酶活性的变化及三磷酸腺苷（ATP）浓度变化；用扫描电镜和透射电镜观察鲜精和冻精超微结构。【结果】伊红-苯胺黑染色检测结果发现，鲜精质膜完整性最高为83.43±2.73 %，经过超低温冷冻后，精子质膜完整性显著降低（P<0.05），且随着冷冻保存时间的延长而逐渐降低。CASA结果显示鲜精活力最高为90.47±3.34 %，经过超低温冷冻后精子活力显著降低（P<0.05），但长期保存23-61个月精子活力无显著性差异，精子活力保持在63.95±3.66 %-68.58±2.73 %，具有稳定的活力，且鲜精与冻精之间精子平均直线运动速度（VSL）、平均曲线运动速度（VCL）和平均路径速度（VAP）均没有显著差异（P>0.05）。精子超微结构显示，鲜精形态结构正常、线粒体排列结构规则、形态大小正常。经过超低温冷冻保存后，精子形态结构损伤明显，表现为精子头部质膜破损、细胞质外漏、细胞核膜破损、尾部鞭毛断裂或脱落等损伤；鞍带石斑鱼精浆和精子超低温冷冻前后六种酶活性的变化及ATP含量结果显示，经过超低温冷冻后，精子内SOD、GSH-PX和CAT三种酶及ATP含量均有显著性降低（P<0.05）。精浆中酶活力升高，除GR和CAT外，其余酶活性均差异显著（P<0.05）。【结论】长期超低温冷冻对鞍带石斑鱼精浆和精子酶活性、精子活力及精子超微结构均具有较显著影响，【意义】研究结果为鱼类精子冷冻损伤机理研究积累了丰富的数据，为鱼类精子长期冷冻保存提供了技术参考和评价指标。
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| 关 键 词： | 鞍带石斑鱼 精子 超低温冷冻 超微结构 酶活性 计算机辅助精子分析系统 |
| 收稿时间： | 2022/11/16 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2022/12/27 0:00:00 |
Effects of long-term cryopreservation on ultrastructure and enzyme activity of Epinephelus lanceolatus sperm |
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| Xiaoyu DING,Zhentong LI,Pengfei DUAN,Yishu QIU,Xinyi WANG,Linlin LI,Linna WANG,Yang LIU,Wensheng LI,Qingbin WANG,Xia ZHAO,Yongsheng TIAN,Shengzhong LI.Effects of long-term cryopreservation on ultrastructure and enzyme activity of Epinephelus lanceolatus sperm[J].Journal of Fisheries of China,2023,47(7):079605-1-079605-17. |
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| Authors: | Xiaoyu DING Zhentong LI Pengfei DUAN Yishu QIU Xinyi WANG Linlin LI Linna WANG Yang LIU Wensheng LI Qingbin WANG Xia ZHAO Yongsheng TIAN Shengzhong LI |
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| Affiliation: | College of Life Sciences, Xinjiang Agricultural University; Key Laboratory of Sustainable Development of Marine Fisheries, Ministry of Agriculture and Rural Affairs; Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences,Key Laboratory of Sustainable Development of Marine Fisheries, Ministry of Agriculture and Rural Affairs; Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences; Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Pilot National Laboratory for Marine Science and Technology (Qingdao),Key Laboratory of Sustainable Development of Marine Fisheries, Ministry of Agriculture and Rural Affairs; Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences; College of Fishers and Life Sciences, Shanghai Ocean University,College of Life Sciences, Xinjiang Agricultural University; Key Laboratory of Sustainable Development of Marine Fisheries, Ministry of Agriculture and Rural Affairs; Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences,Key Laboratory of Sustainable Development of Marine Fisheries, Ministry of Agriculture and Rural Affairs; Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences; College of Fishers and Life Sciences, Shanghai Ocean University,Key Laboratory of Sustainable Development of Marine Fisheries, Ministry of Agriculture and Rural Affairs; Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences; Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Pilot National Laboratory for Marine Science and Technology (Qingdao);,Key Laboratory of Sustainable Development of Marine Fisheries, Ministry of Agriculture and Rural Affairs; Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences; Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Pilot National Laboratory for Marine Science and Technology (Qingdao);,Key Laboratory of Sustainable Development of Marine Fisheries, Ministry of Agriculture and Rural Affairs; Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences; Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Pilot National Laboratory for Marine Science and Technology (Qingdao);,Laizhou Mingbo Aquatic Co., Ltd.,Laizhou Mingbo Aquatic Co., Ltd.,Laizhou Mingbo Aquatic Co., Ltd.,College of Life Sciences, Xinjiang Agricultural University,Key Laboratory of Sustainable Development of Marine Fisheries, Ministry of Agriculture and Rural Affairs; Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences; Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes, Pilot National Laboratory for Marine Science and Technology (Qingdao); |
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| Keywords: | Epinephelus lanceolatus sperm cryopreservation ultrastructure enzyme activities computer assisted sperm analysis system (CASA) |
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