| 连翘叶片原生质体分离及瞬时转化 |
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| 引用本文： | 赵峥畑,张晓璐,程堂仁,等.连翘叶片原生质体分离及瞬时转化[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2023,51(4):130-136. |
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| 作者姓名： | 赵峥畑 张晓璐 程堂仁 等 |
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| 作者单位： | 北京林业大学 园林学院，花卉种质资源创新与分子育种北京市重点实验室，国家花卉工程技术研究中心，城乡生态环境北京实验室 |
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| 基金项目： | 北京市科技计划项目(Z181100002418006)；北京林业大学建设世界一流学科和特色发展引导专项资金项目（2019X-KJS0323） |
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| 摘 要： | 【目的】研究高效分离连翘叶片原生质体的条件，并以PEG介导进行瞬时转化，为连翘基因的同源表达提供技术。【方法】以金叶连翘（Forsythia koreana‘Suwon Gold’）组培苗幼嫩叶片为材料，采用4因素3水平L9(34)正交试验，分析纤维素酶质量浓度（15，20，25 g/L）、离析酶质量浓度（3，5，7 g/L）、甘露醇浓度（0.2，0.4，0.6 mol/L）及酶解时间（5，7，9 h）对原生质体分离的影响，探索最优酶解条件，并在此条件下分离原生质体，之后以PEG介导转化pSuper1300::GFP质粒，研究其遗传转化效果。【结果】L9(34)正交试验结果显示，不同处理的金叶连翘叶片原生质体产量为1.17×106~5.71×106 g-1，影响最大的因素为离析酶质量浓度，且4个因素对产量均有极显著影响；原生质体活力为81.19%~90.69%，影响最大的因素为离析酶质量浓度，且其对活力的影响达到显著水平。最佳酶解条件为：在20 g/L纤维素酶、5 g/L离析酶、0.2 mol/L甘露醇的混合液中酶解9 h，在此条件下原生质体产量为5.57×106 g-1，活力为86.79%。PEG介导法结果显示，以GFP为报告基因，在转化后的金叶连翘原生质体中可以检测到绿色荧光信号。【结论】获得金叶连翘叶片原生质体分离的最佳条件，且在此条件下原生质体产量、活力较高，能够成功进行瞬时转化。
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| 关 键 词： | 原生质体分离 连翘叶片 瞬时转化 GFP |
| 收稿时间： | 2022/2/13 0:00:00 |
Protoplast isolation and transient transformation of Forsythia leaves |
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| ZHAO Zhengtian,ZHANG Xiaolu,CHENG Tangren,et al.Protoplast isolation and transient transformation of Forsythia leaves[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2023,51(4):130-136. |
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| Authors: | ZHAO Zhengtian ZHANG Xiaolu CHENG Tangren |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | protoplast isolation Forsythia leaves transient transformation GFP |
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